Un modelo de lesión mínima de la médula espinal para estudiar la activación y migración de las células madre neurales

Coge un ratón anestesiado y aféitate la espalda.

Asegure en un dispositivo estereotáxico, con una gasa enrollada colocada para sostener la columna torácica.

Desinfecte la piel, haga una incisión vertical en la línea media y retraiga la piel.

Separe los tendones musculares de la columna torácica y retírelos.

Identifique la vértebra objetivo, luego corte las articulaciones intervertebrales para eliminarla.

Exponga la médula espinal e inserte una aguja doblada a cada lado de la línea media.

La inserción de la aguja crea lesiones superficiales en la sustancia blanca, la capa externa de la médula espinal que contiene haces de axones, mientras que deja intacto el canal central.

Retire la aguja, luego sutura los músculos y la piel.

Las células dañadas liberan señales que activan las células inmunitarias residentes en los tejidos, que a su vez activan las células madre neurales, o NSC, que rodean el canal central.

Las NSC activadas migran al sitio de la lesión, ayudando a la reparación del tejido.

Antes de comenzar el procedimiento, use cortadoras de cabello para quitar el pelaje del dorso de un ratón anestesiado desde la parte media de la espalda hasta el cuello y las orejas. Después de asegurar al ratón en un dispositivo estereotáxico, coloque de cuatro a cinco piezas de gasa enrollada debajo del abdomen, mientras tira ligeramente de la base de la cola para enderezar el cuerpo y la columna vertebral.

Empuje el rollo de gasa torácica rostralmente desde el abdomen del ratón hacia la parte superior del tórax para sostener la columna torácica. Y use cinta de laboratorio para asegurar la cola y las extremidades en una orientación similar a la de una estrella. Después de desinfectar la piel expuesta con hisopos secuenciales de etanol al 70% y povidona yodada, use un bisturí número 10 para hacer una incisión vertical paralela al eje longitudinal del animal, desde el punto medio de ambos omóplatos hasta la curvatura de la columna torácica.

Retraiga la piel para exponer el tejido blando y el contorno de la columna vertebral, e identifique el borde inferior de la almohadilla de grasa supraescapular. Luego, use el bisturí para cortar con cuidado, pero con fuerza, a lo largo de ambos lados de los huesos vertebrales T5 a T8 y 9 para separar los tendones musculares de la espalda de la columna vertebral. Reposicione los retractores de modo que los dientes de los retractores se inserten en el sitio de la incisión a ambos lados de la columna vertebral, y expanda cada retractor para ajustar la exposición hasta que la columna esté lo suficientemente elevada, sin ejercer demasiada presión sobre las capas musculares retraídas.

Bajo un microscopio quirúrgico, limpie cuidadosamente el músculo residual y otros tejidos blandos que recubren la columna vertebral para exponer el hueso vertebral, sujetando la apófisis espinosa de las vértebras con pinzas dentadas y moviendo las pinzas ligeramente hacia arriba y hacia abajo para identificar las vértebras que se extirparán. A continuación, inserte una punta de un par de tijeras curvas y desafiladas a cada lado del agujero intervertebral expuesto, caudal a la lámina vertebral que se va a extirpar, y corte las articulaciones intervertebrales de conexión bilateralmente. Luego, levante la lámina hacia arriba y corte la unión superior de la lámina para aislar y quitar el hueso.

Al cortar y quitar la lámina vertebral, tenga cuidado de inclinar siempre las tijeras hacia arriba, para no dañar la médula espinal subyacente.

Con la vena dorsal de la línea media como punto de referencia, inserte el eje doblado de 45 grados de una punta de aguja de calibre 30 con el lado biselado hacia arriba, 1 milímetro de profundidad en la superficie dorsolateral de la médula espinal y aproximadamente 0,5 milímetros laterales a cada lado de la línea media. Mueva la aguja unos dos milímetros desde la dirección caudal a la rostral, de modo que toda la longitud del bisel se inserte en el cordón. Luego, vuelva sobre la ruta de la entrada para quitar la aguja.

Para cerrar la herida, retire el retractor y use una sutura absorbible A 6-0 para unir los músculos de la espalda a ambos lados de la lesión a lo largo de la línea media, y una sutura de seda 4-0 para cerrar la piel suprayacente.