Name: La disección del corazón en las larvas, juveniles y adultos de pez cebra, Danio rerio /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Aprende la disección cardíaca en pez cebra para estudiar el desarrollo cardiovascular usando larvas, juveniles y adultos de Danio rerio. Este método estandarizado facilita el análisis morfológico del corazón.

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Gracias a Marie Birne, Tsiola Areti, Estévez Jaymie y Arelys Uribe. Este trabajo fue apoyado en parte por la Fundación de Investigación de CUNY y Howard Hughes Medical Institute Programa de Verano de becas para estudiantes de pregrado (SPUR) y NIH SR3 41702-00-01. La investigación también fue apoyada por el Queens College y algunos de los experimentos se realizaron en el equipo del Fondo para el núcleo de la Imagen, Biología Celular y Molecular de la Universidad de Queens.

Pez cebra se plantearon a través de protocolos estándar de 13 en las instalaciones de animales Queens College a 28 ° C. Los distintos pares de pescado o apareamientos grupo debe ser preformado y los embriones resultantes limpian y se almacenan en una incubadora de 28 ° C. Salud de los peces deben ser examinados todos los días. En la fecundación después de 5 días (DPF), el pescado debe ser separada en los tanques, con una densidad de peces 10-15 y entró en la guardería instalación de pescado. Para que el protocolo que aquí se presenta el pez cebra se recogieron en larva a través de las etapas adultas: 15, 30, 45, 60, 90, 180 DPF. 1. Pez cebra colección tema y la fijación <ol><li> Retire el pescado del tanque de hábitat por medio de net y el lugar en el 0,2% tricaína para anestesiar. </li><li> Coloque el pescado anestesiado en agua helada durante 15 minutos para practicar la eutanasia. </li><li> Hacer paraformaldehido fresco 4% (PFA) en 1x de tampón fosfato salino (PBS). </li><li> Incubar peces recogidos en PFA al 4% durante 1-2 horas a temperatura ambiente durante la noche a 4 ° C en una placa de Petri envuelto en parafilm. Esto mantiene el piso de peces y más tarde hace una disección mucho más fácil. </li><li> Después de la fijación, lavar dos veces en PBS con Tween (PBT). El pescado puede ser tener en PBT a 4 ° C durante un máximo de 10 días. </li></ol> 2. Medición de los peces y la disección <ol><li> Coloque el pescado en una sola media placa de Petri llena de PBS y lo pondré sobre su lado derecho. </li><li> Medir la longitud de los peces del hocico a la base de la cola (el pedúnculo caudal), sin incluir las aletas de la cola, utilizando un calibrador digital, mm (Figura 1). Esta es la longitud estándar (SL). </li><li> Cada pez se le puede asignar un número / combinación de letras para permitir que un pez y el corazón como consecuencia disecados para realizar un seguimiento para su posterior análisis. Datos, incluyendo el número de acciones de los padres, edad en la fijación, las mediciones de SL, se introdujeron en una hoja de cálculo y organizada sobre la base de estas etiquetas. </li><li> Antes de la disección, la etiqueta tiras de tubos PCR con número de seguimiento asignado y se llenan de PBT u otra solución apropiada para su posterior análisis. </li><li> Orientar a los peces ventral hacia arriba en la placa de Petri, mientras que la estabilización del cuerpo con pinzas de sujeción de la cabeza entre los ojos y las agallas (Figura 2). </li></ol> Los peces más pequeños (menores de 12 mm SL): <ol start="4"><li> a) El uso de pinzas cortantes, o una micro-aguja en un soporte de pasador, quitar los músculos pectorales y las aletas del cuerpo para revelar el corazón. El constante movimiento de la pinza durante la disección puede causar corrientes en el PBT que se mueven los peces. Esto es particularmente problemático para los peces más pequeños, por lo tanto una micro-aguja se puede utilizar para eliminar los músculos pectorales y las aletas y abrir la cavidad del cuerpo. </li><li> a) utilizar con cuidado las pinzas para sacar el corazón de la cavidad de debajo de la aurícula. Alternativamente, en algunos peces que puede ser capaz de extraer el corazón, tirando suavemente hacia fuera con bulbo y el resto del corazón seguirá. Tenga cuidado con la ubicación de la aurícula si se utiliza esta técnica, ya que pueden dañarse fácilmente. Si hay tejido extra que viene con el corazón, que está muy bien y pueden ser eliminados después. </li><li> a) Si el pescado contiene un marcador fluorescente cardiacas como Tg (myl7: GFP) twu34, usar un ámbito de fluorescentes para la disección y verificar la extracción del corazón por el florecimiento (Figura 3). </li><li> a) Una vez que el corazón se retira de la cavidad, utilice las pinzas para mantener el corazón y una micro-aguja para extraer adicional no tejido cardíaco y la pared epicárdica de la parte exterior del corazón. </li></ol> Los peces más grandes (más de 12 mm SL): <ol start="4"><li> b) Utilización de la primavera maneja micro-tijeras, hacen tres incisiones de menos de 1mm de profundidad: 1 - corte transversal a través de los dos branquias - corte transversal en el vientre anterior 3 - corte sagital en el lado ventral de conectar los dos cortes (Figura 4). </li><li> b) El uso de pinzas afiladas eliminar los músculos pectorales y las aletas del cuerpo para abrir la cavidad del cuerpo y revelar el tejido plateado del pericardio (Figura 5). Eliminar este tejido de pericardio y el corazón se vuelve visible (Figura 5). </li><li> b) Utilice las tijeras para cortar micro-la arteria conectada al bulbo arterioso, que se encuentra superior a la del corazón. Una vez que esta arteria se corta, se puso las puntas de unas pinzas en el atrio, utilice las pinzas para sacar el corazón de la cavidad. Si hay tejido extra que viene con el corazón, que está muy bien y se puede quitar más tarde. </li><li> b) Una vez que el corazón se retira de la cavidad, use las dos pinzas para mantener el corazón y retirar el tejido extra, o un par de pinzas para mantener el corazón y una micro-aguja para extraer extra, no de tejido cardíaco. El revestimiento epicárdica, evidente por su pigmentación negro, puede ser removido de la parte exterior del corazón, si lo desea, raspando suavemente en el tejido. </li></ol> 3. Fotografía de los corazones <ol><li> Prepare una 23g / L de agar nutritivo plato de Petri y la cubierta de agar solidificado con PBS. </li><li> Usando las pinzas, hacer un pozo en el agar que permite que el corazón descanse en la orientación deseada para la fotografía. </li><li> Remove el centro del tubo de PCR mediante la celebración de la punta del bulbo con las pinzas con firmeza. Coloque el corazón en el plato de agar. </li><li> Orientar el corazón en agar para fotografiar. La muestra se puede girar después de cada imagen para todas las orientaciones posibles (Figura 6). </li><li> Utilice el tiempo de exposición aérea ligeros y cortos para fotografiar el corazón. Haga los ajustes de calidad de la luz con la exposición como sea necesario para obtener la mejor fotografía. </li></ol> 4. Los resultados representativos: Un ejemplo de un corazón bien diseccionado limpia se muestra en múltiples orientaciones en la Figura 6. Cada centro tendrá algunas diferencias en la morfología general, pero el corazón debe ser completa, que contiene un ventrículo intacto, el atrio y bulbo arterioso. Algunos ejemplos de esta variación en la morfología general se muestra en la Figura 7. El negro manchado tejido epicárdico puede arrancar del corazón. <img src="/files/ftp_upload/3165/3165fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Medir el pescado desde el hocico hasta el pedúnculo caudal con una pinza digitales mm. <img src="/files/ftp_upload/3165/3165fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Sostenga el pescado con una pinza entre los ojos y agallas. <img src="/files/ftp_upload/3165/3165fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3 cardiaco específico marcador fluorescente transgénicos como Tg (myl7: GFP). Twu34, se muestra aquí, puede ayudar en la visualización de los corazones disecados de los peces más pequeños. <img src="/files/ftp_upload/3165/3165fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4 Tres incisiones para eliminar los músculos pectorales y la piel: 1 - corte transversal a través de las branquias 2 - corte transversal en el vientre anterior 3 - corte sagital en el lado ventral de conectar los dos cortes.. <img src="/files/ftp_upload/3165/3165fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> . Cartas de la figura 5 Negro etiqueta de las cámaras del corazón: bulbo arterioso (bis), en el ventrículo (V), y el atrio (a). A-La cavidad del cuerpo superior está abierta para mostrar el tejido plateado del pericardio. B-Después de retirar el pericardio, el corazón es visible y fácil de retirar. <img src="/files/ftp_upload/3165/3165fig6.jpg" alt="Figura 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 6"> Orientaciones Figura 6. Diferentes del corazón se muestran. Letras en negro etiqueta de las cámaras del corazón: bulbo arterioso (bis), en el ventrículo (V), y el atrio (a). Flechas grises indican la ubicación y orientación del corazón, en referencia a su posición normal en el cuerpo: anterior (A), posterior (P), dorsal (D), ventral (V), izquierda (L) y derecha (R). Barra de escala indica 400μm. A-ventral vista del corazón B-vista dorsal del corazón C-vista lateral del lado izquierdo D-vista lateral del lado derecho <img src="/files/ftp_upload/3165/3165fig7.jpg" alt="Figura 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 7"> Figura 7. Morfología de los corazones de diferentes tamaños se muestra. Letras en negro etiqueta de las cámaras del corazón: bulbo arterioso (bis), en el ventrículo (V), y el atrio (a). Barra de escala se indica 400 micras. AC-Corazones forma de pez con menos de 12 mm SL DF-Corazones con forma de pez SL mayor que 12 mm

<ol><li>Ahmad, N., Long, S., Rebagliati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+southpaw+joins+the+roster%3A+the+role+of+the+zebrafish+nodal-related+gene+southpaw+in+cardiac+LR+asymmetry%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">A southpaw joins the roster: the role of the zebrafish nodal-related gene southpaw in cardiac LR asymmetry.</a> Trends Cardiovasc Med. 14, 43-49 (2004).</li>
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<li>Huang, C. J., Tu, C. T., Hsiao, C. D., Hsieh, F. J., Tsai, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ-line+transmission+of+a+myocardium-specific+GFP+transgene+reveals+critical+regulatory+elements+in+the+cardiac+myosin+light+chain+2+promoter+of+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Germ-line transmission of a myocardium-specific GFP transgene reveals critical regulatory elements in the cardiac myosin light chain 2 promoter of zebrafish.</a> Dev Dyn. 228, 30-40 (2003).</li>
<li>Westerfield, M. The Zebrafish Book, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , University of Oregon Press. (1995).</li>
</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Estos métodos para la disección del corazón del pez cebra de post-embrionario de peces permite la extirpación completa de un corazón en buen estado. Si bien esta técnica es sencilla y ofrece guías para los cortes externos que evitar que se dañe el corazón, una mano firme es esencial para los peces más pequeños. Un paso clave en la disección es identificar el pericardio plateado como el corazón está directamente dentro de este saco. Visualizar el pericardio proporciona un marcador importante ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Material </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> Paraformaldehído </td><td> EMD </td><td> PX0055 </td><td> .04g/mL En PBS </td></tr><tr><td> Pinzas # 55 </td><td> FST </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-tijeras </td><td> FST </td><td> 15005-08 </td><td></td></tr><tr><td> Pin titular </td><td> FST </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> Micro-agujas </td><td> FST </td><td> 10130-10 </td><td></td></tr><tr><td> Agar nutritivo </td><td> BBL </td><td> 11472 </td><td> 23 g / L en agua destilada H 2 O </td></tr><tr><td> Placas de Petri </td><td> BD Falcon </td><td> 351029 </td><td></td></tr><tr><td> PCR tiras de 8 tubos </td><td> EE.UU. Científico </td><td> 1402-2500 </td><td></td></tr><tr><td> Calibre digital </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-648-17 </td><td></td></tr></tbody></table>

la disección del corazón en las larvas, juveniles y adultos de pez cebra, danio rerio</em

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Pez cebra se han convertido en un organismo modelo beneficioso y práctico para el estudio del desarrollo embrionario del corazón (ver comentarios de los últimos 1-6), sin embargo, el trabajo de examen de post-embrionario a través del desarrollo adulto cardiaca se ha limitado 7.10. Examinar el cambio de morfología del corazón de maduración y el envejecimiento se ven limitadas por la falta de técnicas disponibles para la puesta en escena y el aislamiento de los corazones juveniles y adultos. Con el fin de analizar el desarrollo del corazón durante la vida útil del pescado, que diseccionan el corazón del pez cebra en varias etapas y una fotografía para su posterior análisis 11. Las características morfológicas del corazón puede ser cuantificado y corazones individuales pueden ser analizados por una serie de métodos estándar. Pez cebra crecen a tasas variables y la maduración se correlaciona mejor con el tamaño de los peces de la edad, por lo tanto, posterior a la fijación, longitud del pez fotografía y medida como un indicador de la maduración de los peces. Este protocolo se explican dos técnicas distintas, el tamaño de la disección dependientes de pez cebra, que van desde 3,5 mm de longitud estándar larvas (SL) con el corazón de la longitud del ventrículo 100μm (VL), a los adultos, con el SL de 30 mm y 1 mm de VL o más grande. Las larvas de peces y adultos tienen el cuerpo muy diferente y la morfología de órganos. Las larvas no sólo son significativamente más pequeños, tienen menos pigmento y cada órgano es visualmente muy difíciles de identificar. Por esta razón, utilizamos distintas técnicas de disección. Se utilizó antes de la disección de los procedimientos de fijación, como hemos descubierto que el corazón disecado directamente después de la eutanasia tienen una morfología más variable, con el balón muy flojo y como aurículas en comparación con el corazón eliminado después de la fijación. Los peces fijo antes de la disección, mantener vivo en la morfología y la posición de la cámara (datos no mostrados). Además, para fines de demostración, nos aprovechamos del corazón (miocardio) específicos GFP transgénicos Tg (myl7: GFP) twu34 (12), que nos permite visualizar todo el corazón y es particularmente útil en las primeras etapas de desarrollo, cuando el corazón morfología es menos clara de los tejidos circundantes. La disección del corazón hace un mayor análisis de la biología celular y molecular que subyacen al desarrollo del corazón y la maduración utilizando hibridación in situ, inmunohistoquímica, la extracción de RNA o otros métodos analíticos más fácil en el post-embrionario del pez cebra. Este protocolo proporciona una técnica valiosa para el estudio de la maduración de desarrollo cardíaco y el envejecimiento.

Un método claro y estandarizado para la disección y el aislamiento del corazón del pez cebra en varias etapas de desarrollo se describen. Técnicas de anotación y cuantificación también se discuten.

La disección del corazón en las larvas, juveniles y adultos de pez cebra, Danio rerio</em

El pez cebra se ha convertido en un organismo modelo beneficioso y práctico para el estudio del desarrollo cardiaco embrionario (véanse revisiones recientes1-6); sin embargo, el trabajo ...

El objetivo general de este procedimiento es extraer el corazón del pez cebra. Esto se logra primero recolectando y fijando peces cebra. A continuación, se abre la cavidad corporal para visualizar el corazón.Luego, se extrae el corazón y se limpia de tejido no cardíaco. Finalmente, se toma una fotografía del corazón. En última instancia, la morfología del corazón a lo largo del tiempo puede observarse mediante microscopía, seccionamiento y fotografía.La demostración visual de este método es fundamental, ya que es la clave para la disección. Estas técnicas son difíciles de aprender porque los peces cebra son pequeños, los tejidos no tienen colores definidos y pueden ser difíciles de identificar. Para generar peces cebra desde las larvas hasta las etapas adultas, realice apareamientos individuales o por grupo con peces adultos para estos experimentos.Limpie los embriones y almacénelos en un incubador a 28 grados Celsius. A los cinco días posteriores a la fertilización, separe los peces en tanques con una densidad de 10 a 15 peces y colóquelos en la instalación para peces. Retire el pez de su tanque a la edad adecuada y colóquelo en Trica al 0,2 % para anestesiarlo.Coloque el pez anestesiado en agua con hielo durante 15 minutos para eutanasiarlo. Mientras tanto, agregue paraformaldehído al 4 % o PFA en un XPBS a un recipiente. Incube los peces recolectados en PFA al 4 % durante una a dos horas a temperatura ambiente, luego durante la noche a cuatro grados Celsius en una placa de Petri envuelta en perfil.Esto mantiene al pez plano y facilita mucho la disección después de la fijación. Lave dos veces con PBS con 0,1 % de Tween o PBT; los peces pueden guardarse en PBT a cuatro grados Celsius durante hasta 10 días. Coloque un solo pez en un recipiente de Petri, medio lleno con PBS fresco, y colóquelo sobre su lado derecho.Mida la longitud del pez desde el hocico hasta la base de la cola, sin incluir las aletas caudales, utilizando un calibrador digital en milímetros. Esta es la longitud estándar o sl. Asigne a cada pez una combinación de número y letra para permitir el seguimiento individual del pez y del corazón diseccionado resultante durante el análisis posterior.Introduzca todos los datos, incluyendo todas las mediciones, en una hoja de cálculo y organícelos según estas etiquetas antes de la disección. Etiquete tiras de tubos PCR con el número de seguimiento asignado y llene los tubos con PVT u otra solución adecuada para el análisis posterior. Oriente el pez con la cara ventral hacia arriba en una placa de Petri mientras estabiliza el cuerpo con pinzas, sujetando la cabeza entre los ojos y las branquias en los peces más cortos de 12 milímetros de longitud estándar.Utilizando fórceps afilados o una micropunzón en un soporte para alfileres, retire los músculos pectorales y las aletas del cuerpo para exponer el corazón. El movimiento constante de los fórceps durante la disección puede generar corrientes en el PPT que desplazan al pez.Esto es particularmente problemático para los peces más pequeños. Por lo tanto, es necesario utilizar una aguja micrométrica para extraer los músculos pectorales y la aleta, y abrir la cavidad corporal. Utilice la pinza para extraer suavemente el corazón de la cavidad por debajo del atrio.Si el pez contiene un marcador cardíaco fluorescente, utilice un microscopio fluorescente para la disección y verifique la extracción del corazón mediante fluorescencia. Una vez que el corazón se haya extraído de la cavidad, use la pinza para sostenerlo y una micropunzón para eliminar el tejido no cardíaco adicional y el revestimiento epicárdico del exterior del corazón. Para peces con una longitud estándar mayor a 12 milímetros.Utilizando tijeras microquirúrgicas con mango de resorte, realice tres incisiones. Primero, haga un corte transversal a través de las branquias. Segundo, realice otro corte transversal en el vientre anterior.Y en tercer lugar, realice un corte sagital en la cara ventral que conecte ambos cortes transversales. Utilizando pinzas finas, retire los músculos pectorales y las aletas del cuerpo para abrir la cavidad corporal y exponer el tejido plateado del pericardio. Elimine este tejido pericárdico y el corazón quedará visible.Use las tijeras microquirúrgicas para cortar la arteria conectada al bulbo arterioso ubicado por encima del corazón. Una vez cortada esta arteria, coloque las puntas de la pinza por debajo del atrio y utilice la pinza para extraer el corazón de la cavidad. Si hay tejido adicional que se extrae junto con el corazón, no hay problema, ya que puede eliminarse posteriormente.Alternativamente, en algunos peces, es posible extraer el corazón tirando suavemente del bulbo, lo que hará que el resto del corazón salga junto con él. Tenga cuidado con la ubicación de la aurícula si utiliza la técnica alternativa, ya que puede dañarse fácilmente. Si hay tejido adicional que sale junto con el corazón, esto no es problema y puede eliminarse posteriormente.Una vez que el corazón se ha extraído de la cavidad, use dos pinzas para sostener el corazón y eliminar el tejido adicional o una pareja de pinzas para sostener el corazón y una aguja micrométrica para retirar el tejido no cardíaco adicional. Para fotografiar el corazón de pez cebra, prepare una placa de Petri con agar nutriente a 23 gramos por litro y cubra el agar solidificado con PBS. Use las pinzas para hacer un hueco en el agar que permita colocar el corazón en la orientación adecuada.Retire el corazón del tubo de PCR sosteniendo la punta del bulbo con la pinza firmemente. Coloque el corazón en la placa de agar.Oriente el corazón en el agar para fotografiarlo. La muestra puede rotarse después de cada imagen para obtener todas las orientaciones posibles. Utilice luz cenital y tiempos de exposición cortos para fotografiar los corazones.Realice ajustes en la calidad de la luz utilizando la exposición según sea necesario para obtener la mejor fotografía. A continuación se muestra un ejemplo de un corazón bien diseccionado y limpio. Cada corazón presentará algunas diferencias en la morfología general, pero el corazón debe estar completo, conteniendo un ventrículo, una aurícula y un bulbo arterial íntegros tras su desarrollo.Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo del desarrollo cardíaco del pez cebra exploraran la maduración cardíaca en diversas etapas del desarrollo del pez cebra.

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Investigación

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Biología

Una forma rápida para llevar a cabo la inmunotinción del corazón embrionario del pez cebra se describe. En comparación con el enfoque de montaje inmunotinción todo, este método aumenta considerablemente la penetración de los anticuerpos, lo que permite obtener imágenes de alta resolución que revelan la estructura celular / subcelular en el corazón dentro de un tiempo de procesamiento muy reducida.

Inmunotinción de Disección del corazón embrionario de pez cebra

Este video describe una técnica para aislar el corazón de un pez cebra en múltiples etapas de desarrollo para estudiar el desarrollo, la maduración y el envejecimiento cardíacos.

Disección del corazón: un método para observar el desarrollo cardíaco del pez cebra

Para analizar los perfiles de expresión de genes cardiacos durante el desarrollo del corazón del pez cebra, el ARN total tiene que ser extraído de corazones aislados. A continuación, presentamos un protocolo de recogida funcionales corazones / batiendo por disección manual de rápida a partir de embriones de pez cebra para obtener ARNm específico del corazón.

A gran escala de pez cebra embrionario del corazón Disección de Análisis transcripcional

El uso del pez cebra para la investigación cardiovascular se está expandiendo hacia la investigación en corazones adultos. Para estas aplicaciones, el aislamiento rápido y sencillo de los tejidos cardíacos es clave para evitar cambios post-mortem y obtener un número adecuado de muestras. Aquí, describimos un método rápido y reproducible para diseccionar corazones de pez cebra adultos.

Recuperación de adultos de pez cebra Corazones para aplicaciones de alto rendimiento

Aquí, presentamos un método confiable, mínimamente invasivo y rentable para registrar e interpretar electrocardiogramas en peces de cebra adultos anestesiados vivos.

Electrocardiografía de superficie In Vivo para pez cebra adulto

El objetivo de este protocolo es detallar un método novedoso para la evaluación de la función cardíaca segmentaria en peces cebra embrionarios tanto en condiciones fisiológicas como patológicas.

El análisis de desplazamiento de la deformación mecánica miocárdica (DIAMOND) revela la heterogeneidad segmentaria de la función cardíaca en el pez cebra embrionario

Describimos un protocolo para evaluar la morfología del corazón y la función en el pez cebra adulto utilizando ecocardiografía de alta frecuencia. El método permite la visualización del corazón y la posterior cuantificación de parámetros funcionales, como la frecuencia cardíaca (HR), la salida cardíaca (CO), el cambio de área fraccionaria (FAC), la fracción de eyección (EF) y las velocidades de entrada y salida de la sangre.

Ecocardiografía por ultrasonido de alta frecuencia para evaluar la función cardíaca del pez cebra

Describimos herramientas optimizadas para estudiar el corazón de pez cebra in vivo con microscopía de fluorescencia de lámina de luz. Específicamente, sugerimos líneas transgénicas cardíacas brillantes y presentamos nuevas técnicas suaves de incrustación e inmovilización que evitan defectos de desarrollo y cardíacos. También se proporciona una posible línea de adquisición y análisis de datos adaptada a las imágenes cardíacas.

Microscopía de hoja de luz de dinámica cardíaca rápida en embriones de pez cebra

El presente protocolo describe el aislamiento agudo de células viables del músculo liso cardíaco y vascular de peces cebra adultos, juveniles, larvales y embrionarios (Danio rerio), adecuados para estudios electrofisiológicos.

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Este protocolo describe un método de microscopía óptica de bajo costo para evaluar la morfología y función cardíaca en embriones de pez cebra, lo que permite una evaluación reproducible de la cardiotoxicidad del desarrollo sin la necesidad de sistemas de imágenes avanzados.

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Este estudio establece un método sensible de imagen basado en inmunofluorescencia para cuantificar la metilación global del ADN en corazones embrionarios individuales de pez cebra. Este enfoque supera el reto del material tisular limitado y evita la necesidad de conversión de bisulfito.

Detección de metilación global del ADN en los corazones de larvas de pez cebra

Aprende la disección cardíaca en pez cebra para estudiar el desarrollo cardiovascular usando larvas, juveniles y adultos de Danio rerio. Este método estandarizado facilita el análisis morfológico del corazón.

La disección del corazón en las larvas, juveniles y adultos de pez cebra, Danio rerio

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