Preparación de Drosophila Las neuronas centrales para In situ Parche de sujeción

El objetivo general de este procedimiento es preparar la neurona motora de vuelo de Drosophila cinco para las grabaciones de pinza de parche en C dos. Esto se logra visualizando primero el cordón nervioso ventral de Drosophila con las neuronas motoras de vuelo marcadas con GFP de una a cinco a través de una lente de inmersión en agua de 40x. El segundo paso es utilizar una pipeta de parche llena de proteasa rota para aplicar proteasa a través de las neuronas motoras marcadas con GFP con el fin de aflojar los restos de glía y tráquea que obstruyen el acceso a la neurona motora cinco.

A continuación, la glía y la tráquea se eliminan aspirando suavemente los residuos sueltos y la glía en la pipeta y tirando de la tráquea fuera del camino con la aplicación de presión positiva y negativa. Alternativamente, en este punto, se utiliza luz brillante para eliminar los desechos restantes que no se pueden ver con luz fluorescente a través de un filtro GFP. En última instancia, la neurona motora cinco limpia se puede ver débilmente con luz brillante, pero se ve bien usando luz fluorescente con un filtro GFP.