Recopilación de la saliva y la medición de cortisol salival y alfa-amilasa en Frail comunitarios residentes adultos mayores a través de Cuidadores de Familia

El objetivo general de este procedimiento es demostrar la recolección y el análisis de biomedidas salivales en una población médicamente frágil que reside en una comunidad. Esto se logra reuniendo primero los suministros necesarios para la recolección de saliva. El segundo paso es organizar la visita domiciliaria, proporcionar los suministros y demostrar los procedimientos de recolección de saliva al cuidador.

A continuación, proporcione instrucciones escritas y responda cualquier pregunta. El paso final es devolver las muestras de saliva al laboratorio y realizar los procedimientos de ensayo. En última instancia, el protocolo está diseñado para medir el perfil diurno de las concentraciones salivales de alfa amilasa y cortisol salival en pacientes médicamente frágiles que residen en la comunidad.

Este método responderá preguntas clave en los campos de la investigación bioconductual para mejorar nuestra comprensión de la sensibilidad biológica y la susceptibilidad en torno a los procesos relacionados con el estrés. Antes de programar una visita domiciliaria con consentimiento, los participantes reúnen y arman los suministros necesarios, que incluyen cuatro hisopos psicométricos para niños, cuatro tubos de almacenamiento de hisopos, cuatro tapas de tubos codificadas por colores, cinco etiquetas blancas, una bolsa Ziploc de plástico, una hoja de instrucciones de recolección de saliva, cinco guantes nitro y una caja de almacenamiento. Con una mano enguantada con nitro, coloque cuatro hisopos infantiles Salomé en los cuatro tubos de almacenamiento de hisopos y cúbralos con tapas de color amarillo, naranja, azul y morado respectivamente.

A continuación, coloque una etiqueta en cada tubo de almacenamiento para indicar la hora de recogida. Coloque los cuatro tubos de almacenamiento tapados, la hoja de instrucciones de recolección de saliva y los cuatro guantes nitro en la bolsa Ziploc y etiquétela con la identificación del asunto y la fecha de recolección. Siguiendo este cronograma, una breve visita domiciliaria a los sujetos previamente consentidos y el día anterior a la toma de muestras de saliva.

Después de llegar a la casa del sujeto, proporcione la bolsa de plástico con los suministros y la hoja de instrucciones al recolector de saliva. Revise la hoja de instrucciones y enfatice la necesidad de registrar las horas de inicio y finalización de la recolección de saliva resaltando las instrucciones escritas. Registre el nombre, la dosis y el horario de todos los medicamentos recetados y de venta libre que haya tomado el participante en las últimas 48 horas.

Indique al recolector de saliva o al SC que aplique un guante nitro en la mano dominante. Dígale al participante que incline la cabeza hacia adelante para permitir que la saliva se acumule en el piso de su boca. Después de esto, instruya al SC para que destape el tubo de almacenamiento del hisopo y recupere el hisopo oral.

Indique al SC que coloque el hisopo oral debajo de la parte delantera de la lengua del adulto mayor para absorber aproximadamente tres gotas de la saliva acumulada y que mantenga el hisopo oral en su lugar durante dos minutos para asegurarse de que esté saturado, haga que el SC devuelva el hisopo oral saturado a la canasta del tubo de almacenamiento del hisopo, y vuelva a colocar la tapa. A continuación, haga que el SC coloque inmediatamente el tubo en la caja de almacenamiento y lo coloque en un congelador. Después de desechar el guante en el contenedor de basura, aconseje al SC que registre las horas de inicio y finalización en la hoja de instrucciones de saliva.

A continuación, informe al SC que recogerá muestras de saliva en cuatro ocasiones al día siguiente, específicamente al despertar 30 minutos después de despertarse a media mañana y por la noche, haga que el SC le diga al paciente que se enjuague la boca con agua 10 minutos antes de la recolección de saliva. Después de la recolección de saliva, deseche las muestras visiblemente contaminadas con sangre. Instruya al SC que las muestras de saliva deben permanecer en el congelador hasta que el equipo del estudio las recupere.

Llame al equipo del estudio para confirmar que programarán una hora y un día para recuperar las muestras congeladas y traer nuevos suministros de recolección de saliva para cualquier fecha futura de recolección. Una vez que las muestras se hayan retirado del congelador del sujeto, manténgalas congeladas durante el transporte al laboratorio colocándolas en una bolsa isotérmica para congelar. Al llegar al laboratorio, reemplace la etiqueta blanca de cada tubo con un código de barras secuencial.

Compruebe que el código de barras secuencial coincida con el ID del sujeto, la fecha de recogida y la hora de recogida. Luego regrese las muestras de saliva a un congelador a menos 20 grados centígrados para precipitar la mucina. Después de descongelar las muestras de saliva, centrifugar las muestras a 1500 veces la gravedad durante 15 minutos.

Una vez que los reactivos del kit de ensayo salival estén a temperatura ambiente durante aproximadamente 90 minutos, prepare el tampón de lavado siguiendo las instrucciones del kit, pipetee 25 microlitros de los controles estándar y las muestras en los pocillos apropiados de una placa de 96 pocillos. Después de esta pipeta, se introducen 200 microlitros de una solución conjugada enzimática previamente preparada en los pocillos. Mezcle las muestras colocando la placa en un rotador durante cinco minutos a 500 RPM.

Después de incubar las muestras a temperatura ambiente durante 55 minutos, lave y seque la placa con tampón de lavado cuatro veces. A continuación, añadir 200 microlitros de tetraetilbencina o solución de TMB. Una vez mezcladas las muestras durante cinco minutos.

A 500 RPM, cubra la placa con papel de aluminio e incube en la oscuridad durante 25 minutos más. Al terminar, agregue 50 microlitros de solución de parada y mezcle las muestras durante tres minutos a 500 RPM. Dentro de los 10 minutos posteriores a la adición de la solución de tope, limpie el fondo de la placa y lea la placa con un lector de placas a 450 nanómetros.

A continuación, calcule la concentración de cortisol utilizando la densidad óptica media. Reste la densidad óptica promedio en pozos de unión no específicos de la densidad óptica promedio en pozos de control y muestreo estándar cero. Por último, estimar las concentraciones de los controles y las incógnitas utilizando un software capaz de logística.

Los procedimientos descritos están diseñados para medir el perfil diurno de las concentraciones salivales, de alfa amilasa y de cortisol salival. Dado que se ha demostrado que los resultados del cortisol están sesgados positivamente, se sugiere utilizar la transformación logarítmica de los datos para obtener una distribución normal. Existen varias estrategias para modelar las diferencias en los ritmos diurnos de cortisol y alfa amilasa.

La primera estrategia es trazar el cambio diurno de la alfa amilasa o cortisol entre la vigilia y los 30 minutos después de la vigilia. La segunda estrategia es trazar la concentración total de cortisol o alfa amilasa durante un día. Los parámetros de resumen resultantes se pueden agrupar en dos categorías generales, la medida de la magnitud de la respuesta o las medidas del patrón de respuesta a lo largo del tiempo.

El modelado de la curva de crecimiento puede ser útil para estudios en los que se recogen múltiples muestras de individuos a lo largo del día. Se puede ajustar una curva de crecimiento para tener en cuenta las diferencias individuales en el ciclo diurno mediante la adición de predictores a nivel individual o de medición. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo recolectar saliva y cómo enseñar a los cuidadores cómo recolectar saliva médicamente para nuestros adultos mayores en el hogar, y debe tener una buena comprensión de cómo realizar análisis de laboratorio de analitos salivales que sean factibles, tengan un alto cumplimiento y produzcan muestras de calidad.