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Medición de niveles hemo síntesis en células de mamífero
Medición de niveles hemo síntesis en células de mamífero
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JoVE Journal Biology
Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Medición de niveles hemo síntesis en células de mamífero

Full Text
12,570 Views
09:43 min
July 9, 2015

DOI: 10.3791/51579-v

Jagmohan Hooda1, Maksudul Alam1, Li Zhang1

1Department of Molecular and Cell Biology, Center for Systems Biology,University of Texas at Dallas

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Los niveles alterados de hemo intracelular se asocian con enfermedades comunes como el cáncer. Por lo tanto, existe la necesidad de medir los niveles de biosíntesis de hemo en diversas células. El objetivo de este protocolo es proporcionar un método rápido y sensible para medir y comparar los niveles de síntesis de hemo en diferentes células.

El objetivo general de este procedimiento es medir los niveles de síntesis de hemo en células de mamíferos mediante el uso de un precursor radiactivo específico de la síntesis de hemo. Esto se logra incubando primero las células con ácido inmunolilina cinco marcado con C 14, que se incorporará al hemo. El segundo paso es recolectar las células mediante raspado y luego cortarlas con tampón de extracción hemo.

A continuación, se añade éter datilo para extraer el hemo y se recoge la fase éter. El paso final es lavar la fase éter con ácido clorhídrico para separar las porfirinas del hemo. En última instancia, los niveles de síntesis de hemo se pueden medir en líneas celulares, y los resultados muestran los niveles diferenciales de síntesis de hemo y varias células cancerosas y células T HK 2 93.

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Biología Molecular Número 101 hemo el nivel de síntesis del grupo hemo células de mamíferos [4- 14 C] ácido 5-aminolevulínico ([ 14 C] 5-ALA) cáncer

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