Modelo murino de imagen no invasivas para detectar y vigilar cáncer ovárico de Recurrencia

El objetivo general de este procedimiento es establecer un modelo de xenoinjerto de cáncer de ovario intraperitoneal que imite el perfil clínico observado en pacientes con cáncer de ovario. Esto se logra mediante la inyección intrauterina de células madre de cáncer de ovario marcadas con fluorescencia mCherry en ratones desnudos. A continuación, se determina el establecimiento de la progresión tumoral y la respuesta al tratamiento midiendo la fluorescencia como sustituto de la carga tumoral.

Esto permite monitorizar en tiempo real la progresión tumoral o la respuesta al tratamiento sin necesidad de sacrificar a los ratones. El modelo que aquí mostramos. B recapitula el perfil clínico observado en las pacientes con cáncer de ovario, por lo que nos permite no solo estudiar la biología de la enfermedad, sino también identificar nuevas terapias, especialmente para el cáncer de ovario recurrente.

El modelo nos permite monitorizar la progresión del tumor para determinar en tiempo real si responde a la quimioterapia, y también determinar si la enfermedad volvería a aparecer si se suspende la quimioterapia. Para comenzar este procedimiento, anestesia a un ratón de siete a ocho semanas de edad, un ratón tímico desnudo con un 2% de flúor. Luego verifique que esté completamente anestesiado pellizcando su almohadilla para los pies.

A continuación, coloque al animal sobre él, con una gasa estéril y la cabeza alejada del experimentador. Aplique ungüento en ambos ojos para prevenir la sequedad mientras está bajo anestesia después. Inserte rápidamente la cabeza del animal en un sistema de conos nasales conectado a un vaporizador de isoflurano.

Desinfecte el lado derecho del abdomen con almohadillas con alcohol, seguidas de yodo. A continuación, coloque el paño quirúrgico estéril sobre él con tijeras quirúrgicas estériles y pinzas. Haz una incisión de uno a dos centímetros en la piel en el cuadrante inferior izquierdo del ratón.

Después de eso, levante el músculo y haga una incisión para llegar al peritoneo. Posteriormente, diseccionar el músculo oblicuo para exponer la cavidad abdominal. A continuación, localice el cuerno uterino izquierdo con una pinza hemostática estéril, tanto en el lado anterior como en el posterior del cuerno.

Coloque la pinza anterior justo debajo de la trompa de Falopio y la pinza posterior justo encima del cuello uterino. En este punto, tenga el segundo experimentador. Inyecte la suspensión celular colocando la aguja que contiene las células en un ángulo de 45 grados perpendicular al cuerno.

A continuación, inyecte lentamente 50 microlitros de suspensión celular en la luz del asta uterina. A continuación, suelte la pinza anterior seguida de la pinza posterior. Después de eso, vuelva a colocar el cuerno uterino en la cavidad abdominal.

Cierre el peritoneo con una sutura sintética reabsorbible. A continuación, cierre la piel con un adhesivo de tejido. Cuando termines, retira el ratón del cono de la nariz y vuelve a colocarlo en su jaula.

Asegúrese de que el animal esté despierto y activo antes de dejarlo desatendido. Proporcione ibuprofeno en el agua potable durante las primeras 48 horas después de la cirugía. Ahora abra el software de imágenes moleculares, luego abra el software Mars Capture.

Este módulo proporciona un control coordinado de la configuración de captura de Marte al tiempo que aprovecha las capacidades de captura y análisis de los sistemas de imágenes. A continuación, introduzca los valores de captura predeterminados. A continuación, guarde los parámetros como archivos de sesión individuales.

A continuación, cree un protocolo de secuencia de rotación seleccionando el botón crear editar protocolos En la ventana de adquisición de la interfaz del sistema, seleccione el archivo de sesión fluorescente guardado anteriormente y guárdelo como paso uno. A continuación, seleccione el archivo de sesión de rayos X correspondiente y guárdelo como paso dos. Con el paso uno seleccionado.

Utilice la opción "Ajustar serie de rotación" del menú desplegable "Antes de la captura de imagen" para ajustar el rango y el incremento del ángulo inicial deseados. Para garantizar una visualización fluida de las entidades, los valores específicos incluyen un ángulo inicial de menos 180 grados, un rango de 375 grados y un incremento de 15 grados. Guarde el protocolo y haga clic en el botón Listo para inicializar el Marte.

A continuación, inicie la alineación seleccionando el botón de vista previa en el menú de adquisición para que aparezca la pestaña del rotador, utilice la configuración de captura de fluorescencia especificada para las imágenes de cereza M. Mantenga la puerta abierta durante la vista previa para acelerar el posicionamiento, lo que también permite la inspección visual de la posición del mouse durante el procedimiento de alineación. A continuación, seleccione la opción de cargar el mouse y continúe a través de la serie de menús de posicionamiento.

Asegúrese de que el extremo tubular del cono de nariz plegable esté en el hueco del cono de la nariz. A continuación, coloque el ratón anestesiado en decúbito prono con la cabeza en el cono de la nariz. Comience la calibración en la posición de cero grados con el lado ventral del animal hacia abajo.

Utilice las dos perillas del sistema de rotación para colocar el animal de modo que aparezca centrado en la ventana de vista previa. Repita el proceso como se le indique para las posiciones de menos 180, menos 90 más 90 y más 180 grados y haga clic en listo. A continuación, se muestra un ejemplo de una película generada a partir de las imágenes adquiridas.

Esta figura muestra la correlación entre la carga tumoral intraperitoneal y la imagen de superposición de rayos X de fluorescencia. Aproximadamente 32 días después de la inyección de células de cáncer de ovario F two M cherry, se realizaron imágenes 2D y se sacrificaron los ratones para correlacionar la imagen adquirida con la carga tumoral real. Y aquí se muestran los conjuntos de datos de rotación que permiten la obtención de imágenes desde múltiples ángulos y la detección de tumores en ratones de control, tratados con paclitaxel y recurrentes.

Se muestra la imagen de un solo ratón por panel a medida que se gira utilizando el sistema Marte. Tenga en cuenta que incluso en ratones de control con una carga tumoral significativa, el tamaño del tumor podría subestimarse según el ángulo desde el que se tomó la imagen. Después de ver este vídeo, debería ser capaz de establecer un modelo de xenoinjerto de cáncer de ovario intraperitoneal utilizando la vía intrauterina, así como ser capaz de realizar imágenes de animales vivos utilizando un sistema de rotación multimodal.