Ligadura del conducto biliar en los ratones: Inducción de la injuria hepática inflamatoria y fibrosis por colestasis obstructiva

El objetivo general de este procedimiento es inducir fibrosis hepática experimental en ratones. Esto se logra realizando primero una laparotomía de línea media para abrir el abdomen del animal. A continuación, se levanta el hígado para exponer el conducto biliar.

A continuación, se obstruye el conducto biliar con dos nudos quirúrgicos. En última instancia, el daño hepático, la fibrosis hepática y la cirrosis se miden mediante el seguimiento de la deposición de colágeno mediante análisis histológicos. La principal ventaja de este modelo experimental en comparación con otros modelos, como la aplicación crónica de tetracloruro de carbono, es que este modelo es altamente reproducible y tiene una tasa de mortalidad baja en general.

Este método ayuda a responder preguntas clave en el campo de la progresión de la fibrosis hepática. Por ejemplo, la contribución de diferentes infiltración de células inmunitarias o la regulación de las vías de señalización en el hígado. El modelo de ligadura de vías biliares comparte muchas características con la patogénesis humana.

Por lo tanto, creemos que este modelo es muy valioso para trasladar el conocimiento de las enfermedades del ratón al ser humano. Aunque este método proporciona una visión general de la fibrogénesis hepática, también se puede aplicar a otros modelos animales como hámsters o ratas. La parte crítica del procedimiento quirúrgico para el principiante es separar el conducto B del puerto de franqueo. Viento.

La demostración de estos misiles será realizada por K y civiles, nuestra línea dos técnicos de nuestros cuerpos de laboratorio. Todos los experimentos fueron aprobados por el comité oficial de cuidado y uso de animales del estado. Todos los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con la ley federal alemana relativa a la protección de los animales y la guía para el cuidado y el uso de animales de laboratorio para prepararse para la cirugía.

Reúna los siguientes instrumentos y soluciones estériles como se describe en la lista de materiales y equipos específicos en el protocolo de texto. Después de anestesiar a un ratón, de acuerdo con el protocolo de texto, asegúrese de que el animal no muestre ninguna respuesta al dolor Con una afeitadora eléctrica, afeite el pelaje abdominal y aplique un ungüento para los ojos y la nariz para proteger los ojos de la sequedad. Coloque el mouse en una placa caliente a 37 grados centígrados.

Inserte el hocico del ratón en la máscara fluvac de un sistema de anestesia fluvac y use una cinta de seda para fijar las patas del animal. Mantener la anestesia por inhalación de 1.5 a 3% de flúor ISO en oxígeno al 100% a un caudal de un litro por minuto. Por último, desinfecte el área quirúrgica.

Cubra el área operativa en general con cortinas autoadhesivas impermeables a los fluidos. Para comenzar la cirugía, use tijeras quirúrgicas para realizar una laparotomía de línea media de aproximadamente dos centímetros de longitud cortando simultáneamente los cortes más la fascia. Use las tijeras como esparcidor para diseccionar el tejido conectivo en la parte superior del peritoneo.

Cortar el peritoneo a lo largo de la alba lineal para abrir la cavidad peritoneal. A continuación, amplíe la cavidad insertando una sutura de sujeción en el esternón, elevando el filamento de la sutura y fijándolo en la parte superior de la máscara fluvac. Añadir la analgesia perioperatoria que contiene 0,1 miligramos por kilogramo de buprenorfina en la cavidad peritoneal.

A continuación, inserte un retractor Cree en la cavidad peritoneal para distribuir el área de operación. A continuación, utilice un hisopo de algodón impermeable y salino para levantar el hígado de modo que el lado ventral se adhiera al diafragma y el hilio sea claramente visible. Ahora, para exponer el conducto biliar, mueva el intestino en la dirección del mimo, luego use pinzas de microdentado para separar cuidadosamente el conducto biliar de la vena porta y la arteria hepática que lo flanquean.

Coloque una sutura de cinco a cero alrededor del conducto biliar y asegúrela con dos nudos quirúrgicos. Aumento continuo de la fuerza de atracción para garantizar una obstrucción efectiva sin cortar el conducto biliar. Para evitar que el nudo pueda gotear y que el animal desarrolle una peritonitis grave, agregue un segundo ligamento craneal de la misma manera sin diseccionar el conducto biliar en el medio, corte los extremos de las suturas, baje el esternón y retire el retractor.

Utilice solución salina al 0,9% para enjuagar la cavidad peritoneal y recolocar los órganos abdominales a sus posiciones fisiológicas. Utilice seis suturas corridas de seda merc cero para cerrar tanto el peritoneo como la fascia plus más linda. Use una solución antiséptica para desinfectar el área de operación.

Después de la cirugía, permita que el ratón se recupere en una jaula calentada por una lámpara infrarroja. Cuando el ratón esté completamente despierto y activo, muévalo a una jaula normal y proporcione acceso ad liptum a alimentos y agua. La ligadura del conducto biliar se llevó a cabo para investigar la fibrogénesis hepática en la fase de iniciación durante la progresión y a largo plazo. Como se demuestra en esta tabla, la fibrosis sinusoidal pers ya se desarrolló el día 10 después de la cirugía, mientras que la fibrosis periportal, que aumentó permanentemente hasta el final del experimento, se desarrolló completamente después de 20 días, los marcadores séricos de lesión hepática tanto LT como ST aumentaron rápidamente y alcanzaron su punto máximo durante el día siete y el día 20.

Después de la BDL a partir de entonces, la LT y la A ST disminuyeron de manera constante hasta el día 30 y se mantuvieron estables hasta 60 días después de la cirugía. De acuerdo con la lesión escolar, las concentraciones séricas de bilirrubina total se elevaron de manera constante y alcanzaron una meseta después de siete días. Por lo general, los hígados de los animales operados simuladamente todavía se ven lisos al final del experimento, mientras que los animales que recibieron BDL desarrollan edema y nódulos fibróticos en la superficie de los hígados e hidropesía de la vesícula biliar llena de bilis.

Los cambios morfológicos también se observan a través del análisis histológico. El desarrollo de fibrosis es altamente reproducible y demuestra un aumento dependiente del tiempo en la expresión y deposición de colágeno intrahepático como consecuencia de la fibrogénesis en curso, los indicadores adicionales de fibrogénesis son el aumento de la expresión de actina de músculo liso alfa, vimentina, y el marcador asociado a la inflamación, la lipina dos. Una vez dominado, este procedimiento se puede realizar en 10 a 50 minutos si se realiza correctamente mientras se intenta el procedimiento.

Es importante recordar que debe llevar a cabo los procedimientos con aceite en condiciones limpias, pero no estériles. Se pueden realizar otros métodos, como la administración de tetracloruro de carbono, para identificar si los mecanismos son específicos del modelo de ligadura de vías biliares o generalmente relevantes para la fibrogénesis hepática después de su desarrollo. Esta metodología allanó el camino para que muchos investigadores que trabajan en el campo de la hepatología analizaran y exploraran las diferentes vías de señalización evolucionadas en la fibrogénesis hepática.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar la ligadura del producto en ratones con alta reproducibilidad. No olvide que trabajar con animales requiere un manejo responsable y que la VA de narcóticos por inhalación puede ser extremadamente peligrosa durante la realización del procedimiento.