Lesión quirúrgica del páncreas del ratón a través de la ligadura del conducto pancreático como un modelo para el endocrino y exocrino Reprogramación y proliferación

El objetivo general de este procedimiento es inducir lesiones graves en el páncreas adulto de roedores para establecer un entorno que permita la neogénesis y proliferación de las células beta. Esto se logra realizando primero una laparotomía de línea media para permitir la exposición del páncreas. A continuación, se liga el conducto pancreático principal en la región del cuello del páncreas mediante dos nudos quirúrgicos.

En el paso final, se extrae la ligadura parcial del conducto o páncreas PDL. En última instancia, el análisis inmunohistoquímico y el Q-R-T-P-C-R se utilizan para estudiar los factores implicados en la remodelación tisular, la proliferación endocrina y la neogénesis inducida por la ligadura parcial del conducto. La principal ventaja de esta técnica frente a otros modelos de lesión pancreática, como la pancreatectomía y la ablación química de células beta, es que la ligadura parcial de conductos es un procedimiento sencillo que no implica la extirpación de tejido pancreático ni la destrucción de células beta.

La ligadura parcial de conductos por páncreas de rata, ha sido introducida en nuestro instituto hace más de 20 años. Hemos trasladado esta técnica a ratones para facilitar el rastreo del linaje genético de las células, así como los experimentos de pérdida y ganancia de función. Para evaluar el mecanismo detrás de la generación de células beta en estas condiciones experimentales, antes de comenzar el procedimiento, desinfecte el tórax, el abdomen de un ratón anestesiado de ocho semanas de edad con una solución antiséptica de clorhexidina.

A continuación, afeita una sección de 2,5 por 1,5 centímetros del abdomen y desinfecta el sitio quirúrgico con exfoliantes alternos del antiséptico y etanol. Después del último frote, confirme la profundidad adecuada de la anestesia con los dedos del pie. Pellizca y luego cubre al animal.

A continuación, utilice una cuchilla estéril para hacer una incisión en la línea media superior de la piel, que se extienda desde la apófisis xifoides hasta el ombligo con unas tijeras estériles. Separe el codo lineal subyacente y el peritoneo para exponer el cuadrante abdominal superior. A continuación, retraiga el estómago superiormente para exponer el bazo.

A continuación, exponga el lóbulo esplénico o la región de la cola del páncreas. A continuación, retraiga suavemente el duodeno y parte del yeyuno superior hacia el cuadrante abdominal superior derecho para exponer la cabeza, el cuello y el cuerpo del páncreas. Localiza el conducto principal pancreático en la región del cuello del páncreas.

El cuerpo y la región de la cola del páncreas ahora están expuestos para ligar el conducto pancreático. Coloque con cuidado una aguja de sutura 6.0 debajo de la región del cuello y gársela en el lado izquierdo de la vena porta, separando los lóbulos gastroduodenal y esplénico. Coloque una segunda ligadura muy cerca de la primera para asegurarse de que los lóbulos estén adecuadamente separados.

A continuación, regrese los órganos a la cavidad abdominal y utilice cuatro hilos filamentosos de poliglicol cero para cerrar la capa muscular en un patrón de sutura continuo. Por último, cerrar la piel con una sutura discontinua y vigilar al animal hasta que se recupere por completo. El páncreas PDL se reducirá de tamaño y parecerá casi translúcido.

Con los ojales apareciendo como pequeños puntos blancos, la cabeza del páncreas aparecerá en un color rosa opaco, lo que permitirá la identificación de la LOI exocrina distintiva utilizando tijeras estériles. Corte a lo largo del bazo para separar la cola ligada del páncreas del bazo y el tejido conectivo que conecta la cola del páncreas con los órganos internos. A continuación, corte la cola PD L inmediatamente delante de la ación.

Aísla el tejido de la cola falsa de la misma manera. Sin embargo, tenga en cuenta que tanto la cola como la región de la cabeza del páncreas falso son de color rosa opaco. Para aislar ambas partes por separado, corte el páncreas ligado falso en la región del cuello.

Cuando la PDL se realiza correctamente, los ratones parecen sanos y no muestran una diferencia significativa en el peso corporal o la glucemia. En comparación con los animales operados simuladamente, el tejido asar exocrino se pierde gradualmente después de la cirugía de PD L, lo que resulta en una reducción en el tamaño y el peso de la cola ligada de PD L tres días después de la PDL. La morfología del tejido de la teína R se altera con una aparente apoptosis de las células asares. Después de una semana, el tejido pancreático queda engullido por células inmunitarias CD 45 positivas que se infiltran.

Después de dos semanas, muchos lóbulos ASIN r son reemplazados por tejido fibrótico y adiposo, lo que provoca la apariencia translúcida del páncreas de la cola de PD L y permite que los ojales se vuelvan visibles a simple vista. Coincidiendo con el inicio de la apoptosis asar, también se observa un aumento de la actividad celular del epitelio dúctil. Además, dos semanas después de la PDL, el volumen total de células beta en la cola de PDL se duplica en comparación con el observado en la cola simulada no ligada, lo que se acompaña de un aumento de la proliferación de células beta, una activación del marcador progenitor endocrino embrionario neurogen en tres.

Al intentar este procedimiento, es importante utilizar la técnica aséptica adecuada para cada paso de la cirugía y realizar la ligadura del conducto pancreático con el mínimo daño posible a las arterias subyacentes y los tejidos circundantes. Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como el rastreo de linaje en ratones transgénicos ligados parcialmente a conductos, con el fin de responder preguntas adicionales sobre el destino y el origen de las células. Después de PD L.