Name: El Modelo Monoiodoacetate del dolor de la osteoartritis en el ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 26 s
Description: Aprende a inducir dolor tipo osteoartritis en ratones mediante inyección intraarticular de monoiodoacetato. Este modelo permite evaluar sensibilidad mecánica y déficits de carga para estudiar mecanismos del dolor y descubrir nuevas terapias.

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JSV está apoyado por una beca de colaboración para MM por la Comisión Europea (GAN-603191 PAINCAGE).

Los procedimientos que implican sujetos animales han sido aprobados por el Comité Ético en el Kings College de Londres y se ajustan UK Home Office Reglamento (Animales Scientific Procedures Act de 1986). 1. inyección intra-articular de la rodilla en el Monoiodoacetate <ol><li> Casa 8 -. Ratones 10 semanas de edad en grupos de 5 bajo un ciclo de 12 horas de luz / oscuridad (luces encendidas a las 7:00 AM) con comida y agua ad libitum Deje que los ratones se aclimatan durante 1 semana antes de comenzar el experimento. </li><li> Aleatoriamente y los ratones en jaulas en grupos de 5. Utilice el número de animales como los códigos para cegar el experimentador a los tratamientos. Utilice los pesos corporales como parámetros para la asignación al azar. </li><li> En el día de la inyección, recién preparar la solución de monoiodoacetate en solución salina estéril (0,9% NaCl) a las concentraciones deseadas. Utilice solución salina estéril para inyección en un grupo separado de ratones de control. La dosis más alta recomendada de MIA es de 1 mg en 10 microlitros. Precaución: Monoiodoacetate es very tóxico. Por lo tanto, se recomienda que los guantes y la máscara se usan al manipular el polvo y la preparación de la solución. La solución debe ser estéril por filtración con un filtro de 0,22 micras. </li><li> Anestesie ratón que utiliza un carro de anestésico por primera colocándolos en una cámara de entrega de 2% de isoflurano en O 2 mezcla (caudal 1,5 l / min) y luego transferir los ratones a la sección de cono de la nariz, que también suministra la mezcla de 2% de isoflurano-O 2 y, como tal, mantiene la anestesia durante la inyección. Coloca un ungüento veterinario en los ojos para evitar su desecación, mientras que bajo anestesia. Use bata quirúrgica, guantes y máscara mientras se realiza el proceso de inyección. </li><li> Confirmar la anestesia mediante la comprobación de falta de respuesta a un estímulo de presión en las patas traseras del animal. </li><li> Una vez que el animal está bajo anestesia, colocarlo en su parte posterior. Recorte y limpie el área que rodea a la articulación de la rodilla con el alcohol. yodo povidona o clorhexidina pueden ser utilizados, así fo desinfección. El tendón rotuliano (línea blanca abajo de la rótula) se hará visible. </li><li> Con el fin de estabilizar el sitio de inyección, mantener la rodilla todavía, en una posición doblada, colocando el dedo índice por debajo de la articulación de la rodilla y el pulgar encima de la superficie anterior de la articulación del tobillo. No se requiere preferencia conjunta. </li><li> Para encontrar el sitio preciso de la inyección, ejecute una aguja 26 G unida a una jeringa horizontalmente a lo largo de la rodilla (a fin de no perforar la piel con la punta) hasta que encuentra la brecha por debajo de la rótula. Aplique una leve presión para marcar el área y luego levante la aguja y jeringa en posición vertical para la inyección. Insertar la aguja en la zona marcada, a través del tendón rotuliano, perpendicular a la tibia. No hay resistencia se debe sentir. <ol><li> Utilice el pulgar como guía e inyectar superficial para el sitio de entrada. Después de la inyección, masaje de la rodilla para asegurar una distribución uniforme de la solución. Desechar la aguja inmediatamente en la agudas bin. </li><li> Coloque los ratones de nuevo en una jaula limpia en una estera climatizada y permitir que se recuperen. Mantener una vigilancia constante sobre los animales hasta que se recupera el conocimiento adecuado, que se mide por ellos recuperar decúbito esternal. Una vez que los animales se recuperan, volver a su jaula. Nota: Se sugiere para obtener los mejores propósitos de práctica y formación que se usa un colorante y la disección inmediata post-mortem realizarse para confirmar la correcta localización de la inyección. </li></ol></li></ol> 2. Medición de la hipersensibilidad mecánica (alodinia) Nota: los umbrales de retirada mecánicas estáticas se evaluaron mediante la aplicación de filamentos de von Frey a la superficie plantar de la pata trasera. <ol><li> Llevar los ratones a la sala de comportamiento y dejar que los animales se aclimaten sin restricciones en cubículos acrílicos (8 cm x 5 cm x 10 cm) encima de una rejilla de malla de alambre. <ol><li> los ratones del tren por la manipulación y la habituación a las 2 horas cubículos para dos días antes de la aplicación pelo de Von Frey con el finpara limitar el estrés y la deambulación durante la aplicación de filamentos de von Frey. En los días de ensayo, los animales se habitúen a los cubículos para un máximo de 60 min antes de la prueba. Utilizará batas, guantes, máscaras y durante todos los experimentos de comportamiento. </li></ol></li><li> Aplicar calibrados pelos de von Frey (fibras de nylon flexibles de diámetro creciente que ejercen niveles de fuerza define como calibrado por la empresa fabricante y se expresó como gramos (g)) en la superficie plantar de la pata trasera hasta que las curvas de la fibra. Utilice 0,008, 0,02, 0,04, 0,07, 0,16, 0,4, 0,6, y 1,0 g de fibras durante la prueba. <ol><li> Mantenga cada cabello en su lugar durante 3 segundos o hasta que se retira la pata, esta última definición de una respuesta positiva. A partir de una fuerza del estímulo de 0,07 g, aplicar pelos de acuerdo con el &quot;método arriba-abajo&quot; 21: X marca como una respuesta de retirada y O una ausencia de respuesta. Aplicar en orden ascendente de la fuerza, hasta 1 g (fuerza de corte), hasta que se detecta una respuesta. </li><li> Vuelva a probar la pata repitiendopaso 2.2.1, comenzando con el filamento que ejerce una fuerza inferior a la que produce una retirada. </li><li> A continuación, aplicar los filamentos restantes de forma secuencial, por la fuerza descendente, hasta que se produzca ninguna retirada. Volver a aplicar filamentos en orden ascendente hasta que se observa una respuesta. Continuar hasta que se obtiene una secuencia de seis respuestas (por ejemplo, oxoxox), con el fin de obtener el valor &#39;k&#39; haciendo referencia a tabular los valores 21. </li><li> Expresar los valores de retirada de la pata en un 50% los umbrales de retirada de la pata en gramos. Utilice la fórmula (10 [δ Xr + K]) / 10.000, donde Xr = valor de la última con filamentos de von Frey utilizado en la secuencia (en unidades logarítmicas), k = valor tabular, y δ = significan diferencia en las fuerzas entre las fibras. Cuando se detecta que no hay respuesta, utilice la respuesta máxima de 1 g 21,22. </li></ol></li><li> Siguiendo el procedimiento descrito anteriormente (2.2.1-2.2.4), evaluar los umbrales mecánicas de las dos patas traseras antes de MIA injection como valores basales. Después de la inyección, evaluar los umbrales de las patas ipsilateral y contralateral a intervalos regulares de un día durante varias semanas después MIA para determinar el desarrollo de la alodinia mecánica. Nota: Por ejemplo, el informe umbrales medidos 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, y 28 días después de la inyección de MIA. Animales se consideran alodínico cuando muestran una respuesta a 0,1 g o menos. Respuestas normales caen dentro de 0,6 - 1 g rango. </li></ol> 3. Medición de Peso Déficit Teniendo Nota: Los cambios en el levantamiento de peso que se miden usando un medidor de peso incapacitance. <ol><li> Entrenar a cada ratón para entrar en una cámara de plexiglás sobre el aparato y sentarse en la caja de soporte. Coloque el ratón delante de la caja de soporte, levante la entrada de hasta 45 °, y permitir que el ratón para entrar y cerrar la caja. Permitir que los animales puedan moverse libremente hasta que adoptan una postura sentada. Esta formación lleva por lo menos dos días y garantiza que el animal está quieto y no leaning a cada lado de la cámara. Calibre el instrumento antes de su uso con un 100 g de peso de verificación (o de acuerdo a instrucciones del equipo). <ol><li> Asegúrese de que cada pata trasera se coloca en la plataforma de grabación adecuado 11. La duración de cada medición tiene 1 sec, según las instrucciones del fabricante. </li></ol></li><li> Recoger tres mediciones del peso soportado en cada pata trasera de la plataforma de grabación de cada sesión de grabación y utilizar el valor medio para calcular la diferencia de peso soportado por las patas ipsilateral y contralateral. expresan valores como la diferencia entre las patas ipsilateral y contralateral en gramos. </li><li> Evaluar los cambios que soportan el peso antes de la inyección de MIA como valores de referencia. A continuación, las evaluaciones repetidas a intervalos regulares a lo largo de varias semanas para determinar el desarrollo de cambios de puerta. Por ejemplo, el informe umbrales medidos en 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, y 28 días después de la inyección de MIA. Nota: Un peso normal bearing valor del 50% representa una distribución de peso igual a través del miembro posterior ipsilateral y contralateral. Animales considerados pantalla hipersensible una carga de peso cambio de aproximadamente el 45%. Las mediciones de los umbrales mecánicos y que soportan peso déficits se pueden realizar en los mismos ratones, ya que ni punto final afecta a la otra. Para la evaluación farmacológica, cada grupo de animales debe ser probado en tiempos establecidos después de la dosificación en línea con el perfil farmacocinético del compuesto utilizado. </li></ol>

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<li>Ogbonna, A. C., Clark, A. K., Gentry, C., Hobbs, C., Malcangio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain-like+behaviour+and+spinal+changes+in+the+monosodium+iodoacetate+model+of+osteoarthritis+in+C57Bl%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pain%22%5BJournal%5D)">Pain-like behaviour and spinal changes in the monosodium iodoacetate model of osteoarthritis in C57Bl/6 mice.</a> Eur. J. Pain. 17 (4), 514-526 (2013).</li>
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</ol>

Ninguno de los autores tiene intereses contrapuestos o intereses contrapuestos.

Con esta metodología, se describe un método preferido para inducir dolor OA-como en el ratón por una inyección intra-articular de MIA en una articulación de la rodilla y la evaluación de la sensibilidad a estímulos no nocivos y nocivos en las extremidades traseras. la inyección de MIA se asocia con el comportamiento de dolor persistente, es decir, alterado el peso de la extremidad posterior del cojinete y el desarrollo de la hipersensibilidad mecánica referida (alodinia). Tales mediciones estáticas pueden ser complementados con análisis de la marcha en una caminadora o por análisis de pasarela en los animales que se mueven libremente. Modelos MIA son sensibles a las terapias 24 para aliviar el dolor convencionales, lo que indica que pueden ser útiles para discernir enfoques terapéuticos. Mientras que la inyección de MIA no es técnicamente difícil, la cápsula de la articulación puede ser perforado durante la inyección, dando lugar a fugas de MIA fuera de la cápsula, y la posterior incapacidad para inducir la toxicidad de los condrocitos. De hecho, la inyección sistémica de MIA puede ser fatal en los roedores unand posibles efectos de MIA en células y tejidos distintos de condrocitos pueden confundir los resultados, además de ser indeseable. En este sentido, hay que destacar que un gran cuidado necesita ser dado a la inyección de la MIA, ya que es un componente crítico del modelo, y la confianza tiene que ser dado que la inyección se produce en el espacio articular. Este protocolo ayuda a lograr eso. Los protocolos descritos aquí tienen por objeto garantizar que los animales proporcionan las respuestas al dolor similar consistentes durante todo el período de prueba. Además, permiten el ajuste de gravedad de la enfermedad mediante la alteración de la dosis de MIA utilizado para inducir la patología 15,23. La rápida inducción de la enfermedad tanto en el estado y el comportamiento de dolor similar a permitir la evaluación oportuna de los compuestos modificadores de dolor. Esto es ventajoso sobre existente quirúrgica y espontáneamente el desarrollo de modelos de OA, que puede tomar un período de tiempo más largo para desarrollar hipersensibilidad. Además, en particular para los modelos espontáneos, la enfermedad Patholgía no se manifiesta en todos los animales (aproximadamente 20 - 80% 7), mientras que el modelo de MIA se asocia con una incidencia significativa de respondedores. Además, los modelos espontáneos no son adecuados para mediciones de los cambios en la carga de peso, como se desarrolla OA en ambas rodillas. Al considerar las mediciones de comportamiento, los animales deben mantenerse tranquilo y relajado durante las evaluaciones. Esto se consigue, como se detalla en el protocolo, mediante la formación temprana antes de las mediciones de grabación y por una manipulación repetitiva, lo que permite a los animales se familiaricen con el experimentador. Un punto clave para reducir el estrés es utilizar el mismo experimentador para la prueba de comportamiento a lo largo de, como cambio constante inducirá los problemas mencionados anteriormente. Como cualquier modelo, el modelo de MIA de la OA tiene limitaciones, tales como la rapidez de interrupción conjunta, que no se parece al lento desarrollo de la patología en pacientes OA. Una forma de superar este problema sería complementar este modelo con un Dorgical modelo de la OA. El uso del modelo químico MIA en el desarrollo compuesto permite el uso de protocolos preventivos y terapéuticos sobre el desarrollo y mantenimiento de dolor OA-similares. Por último, el modelo MIA complementaría los estudios de los rasgos fenotípicos de los ratones knock-out, lo que ayuda a comprender mejor la enfermedad OA.

Clínicamente, la osteoartritis (OA) o enfermedad degenerativa de las articulaciones, es una enfermedad dolorosa y debilitante caracterizada por una pérdida progresiva de cartílago articular, inflamación leve de los tejidos en y alrededor de las articulaciones, y algunas veces la formación de osteofitos y quistes óseos. Los pacientes con OA se quejan de dolor persistente 1 y visualización aumento de la sensibilidad a la presión y los estímulos nocivos en la articulación artrítica 2-4. En la actualidad, no existe cura para la OA con los enfoques y analgésicos terapéuticas disponibles se prescriben para aliviar el dolor asociado con esta condición, con cierto grado de éxito 5. Sin embargo, el dolor de OA sigue siendo un tema de animales y clínicos modelos de OA se están desarrollando para mejorar nuestra comprensión de los mecanismos del dolor relacionado con la OA y revelar nuevas dianas para la terapia. Hay varios modelos animales de OA disponibles con diferentes características 6. Los métodos quirúrgicos, como la anteriortransección del ligamento cruzado, puede ser utilizada. Sin embargo, implican la intervención quirúrgica hábil y se realizan principalmente en la rata, mientras que la desestabilización de menisco medial (DMM) se utiliza en el ratón. Desarrollo espontáneo de la OA se produce en el conejillo de Indias y degeneración de la articulación espontánea se ha informado en ratones C57 negro de 3 a 16 meses de edad 7,8. OA modelos espontáneos no implica ninguna intervención para inducir la enfermedad, pero tienen la variabilidad inherente, y, como tal, incurrir en mayores números y cuestan 9,10. modelos químicamente inducidos, por otro lado, requieren procedimientos mucho menos invasiva que los modelos quirúrgicos, y como tal, son más fáciles de implementar y permiten el estudio de lesiones de OA en las diferentes etapas. Estos modelos incluyen inyecciones individuales en la rodilla de agentes inflamatorios, inmunotoxinas, colagenasa, papaína, o monoiodoacetate, que puede ser tóxico si se escapan del espacio articular. De todos los modelos químicos de OA, MIA es el que más se utiliza, particularly para probar la eficacia de los agentes farmacológicos para tratar el dolor, ya que este modelo genera un fenotipo similar al dolor reproducible y robusto, rápido y que puede ser calificado por la alteración de la dosis MIA 11-15. La inyección intra-articular de MIA en roedores reproduce lesiones OA-como y deterioro funcional que puede ser analizado y cuantificado. MIA es un inhibidor de la gliceraldehído-3-fosfatasa, interrumpiendo la glucólisis celular y, finalmente, lo que resulta en la muerte celular 16,17. La inyección intra-articular de MIA causa la muerte celular de condrocitos, lo que lleva a la degeneración del cartílago y hueso subcondral alteraciones posteriores tales como aparición de hueso osteofitos 18,19. A medida que la utilidad de MIA en la rata se ha descrito antes de los 20, en este trabajo nos centramos en la metodología de la OA inducida en ratones MIA ya que este modelo está siendo utilizado cada vez más con la disponibilidad de los ratones knock-out. Se describe un procedimiento para la injección de volúmenes muy pequeños en la rodilla y métodos para medir la sensibilidad a los estímulos nocivos y no nocivos en las extremidades traseras. El detalle de la metodología ayudará a reducir la variabilidad, y como tal, refinar el modelo y reducir el número de animales necesarios para el estudio.

<table><tbody><tr><td>Monoyodoacetato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-2512-25G</td><td>&#8805; 98% de pureza</td></tr><tr><td>0,9% solución salina</td><td>Mini-Plasco basic</td><td>365 4840</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Merial</td><td>DNI 4090/1</td><td></td></tr><tr><td>26 G Needle</td><td>Fisher Scientific</td><td>12947606</td><td></td></tr><tr><td>50 &#956; l Jeringa Hamilton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20701</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey Hairs</td><td>Linton Instruments</td><td>NC 122775-99</td><td></td></tr><tr><td>Probador de incapacitancia</td><td>Linton Instruments</td><td></td><td>Entrega a pedido</td></tr><tr><td>Estante de jaula de prueba &nbsp;</td><td>Ugo Basile</td><td>37450</td><td></td></tr><tr><td>Sistema anestésico compacto</td><td>Vet-Tech</td><td>AN001B</td><td></td></tr><tr><td>Médico O2</td><td>BOC</td><td>101-F</td><td></td></tr><tr><td>Aldasorbers</td><td></td><td>Vet -Tech</td><td>AN006A</td></tr></tbody></table>

el modelo monoiodoacetate del dolor de la osteoartritis en el ratón

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

Un síntoma importante de pacientes con osteoartritis (OA) es el dolor que se desencadena por cambios periféricos, así como centrales dentro de las vías del dolor. Los tratamientos actuales para el dolor de la osteoartritis, tales como los AINE o los opiáceos no son ni suficientemente eficaz y carente de efectos secundarios perjudiciales. Los modelos animales de la OA se están desarrollando para mejorar nuestra comprensión de los mecanismos del dolor relacionado con la OA y definir nuevas dianas farmacológicas para el tratamiento. Actualmente los modelos disponibles de la OA en roedores incluyen las intervenciones quirúrgicas y químicas en una sola articulación de la rodilla. El modelo monoiodoacetate (MIA) se ha convertido en un estándar para el modelado de interrupción articulación en la OA tanto en ratas y ratones. El modelo, que es más fácil de realizar en la rata, implica la inyección de MIA en una articulación de la rodilla que induce rápidas respuestas de dolor como en la extremidad ipsilateral, el nivel de los cuales puede ser controlada por la inyección de diferentes dosis. La inyección intra-articular de MIA interrumpe la glucólisis de condrocitos mediante la inhibición de glyceraldehído deshidrogenasa-3-fosfatasa y resulta en la muerte de condrocitos, neovascularización, necrosis del hueso subcondral y colapso, así como la inflamación. Los cambios morfológicos de la cartílago y hueso articular interrupción son un reflejo de algunos aspectos de la patología del paciente. Junto con el daño articular, induce la inyección de MIA se refiere sensibilidad mecánica en la pata trasera ipsilateral y peso que llevan los déficits que son medibles y cuantificables. Estos cambios de comportamiento se asemejan a algunos de los síntomas reportados por la población de pacientes, validando de este modo la inyección de MIA en la rodilla como un modelo pre-clínica útil y relevante del dolor OA. El objetivo de este artículo es describir la metodología de las inyecciones intraarticulares de MIA y las grabaciones de comportamiento del desarrollo asociado de hipersensibilidad con una mente para poner de relieve las medidas necesarias para hacer grabaciones coherentes y fiables.

Recientemente hemos informado de que la inyección de 0,5 - 1 mg MIA en los induce la articulación de la rodilla del ratón refiere hipersensibilidad mecánica (alodinia) en la pata trasera ipsilateral y la carga de peso déficit de hasta 4 semanas, aunque inicios son 23 dependiente de la dosis. Los datos presentados en la Figura 1 constituyen un ejemplo de la evolución temporal de la hipersensibilidad mecánica inducida por MIA en las patas traseras ipsilaterales después de un intervalo de dosis inyectadas en la rodilla. Específicamente, la dosis más baja de MIA (0,5 mg / ratón) indujo una disminución del 50% de los umbrales de comparación con la inyección de solución salina en días 10, y los umbrales se redujo a 70% de los de los controles de solución salina por día 28 después de la inyección. La dosis intermedia de 0,75 mg de MIA resultó en una disminución gradual en umbrales que eran 80% inferiores a los umbrales de control de solución salina en días 10 y permaneció baja hasta el día 28. La dosis más alta de 1 mg MIA se asoció con un signoificant caída en el umbral el día 5 y una nueva disminución en el día 10, que se mantuvo hasta el día 28. Los datos presentados en la Figura 2 proporcionan ejemplos de soporte de peso cambios que están asociados con la inyección de MIA en las articulaciones de rodilla. En este conjunto de experimentos, mientras que el 0,5 mg dosis MIA no indujo cambios significativos en la carga de peso durante toda la duración 28 días del estudio, la 0,75 mg dosis MIA resultó en una reducción significativa en el peso soportado por el pata ipsilateral del día 10 adelante. En particular, la carga de peso asimetría asociada con 0,75 mg de MIA puede producir resultados variables e inconsistentes entre los estudios 23. En lugar de ello, la dosis de 1 mg MIA induce generalmente peso reproducible teniendo asimetría y los datos de la Figura 2 demostrar la reducción significativa de peso soportado en la pata trasera ipsilateral de día 3 hasta el final del período de observación. Como era de esperar, saline animales tratados no mostraron cambios en la carga de peso. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53746/53746fig1.jpg" /> Figura 1. Desarrollo de la alodinia mecánica Publicar MIA inyección. Umbrales de retirada de la pata de las patas traseras ipsilaterales y contralaterales se evaluaron antes y después de la inyección de MIA (0,5, 0,75 y 1 mg / ratón) y solución salina (0,9% NaCl), n = 8 - 10 ratones / grupo. * P &lt;0,05, ** P &lt;0,01, *** P &lt;0,001 frente al grupo tratado con solución salina; Dos vías de medidas repetidas ANOVA seguido de Student Newman-Keuls test post hoc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53746/53746fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/53746/53746fig2.jpg" /> Figura 2. Desarrollo de Peso Déficit Teniendos Publicar MIA inyección. Los cambios en la distribución del peso corporal entre los dos miembros traseros se calcula como [(peso tenerse en ipsilateral pata / suma del peso soportado en las patas ipsilaterales y contralaterales) * 100] se evaluaron antes y después de la inyección de MIA ( 0,5, 0,75 y 1 mg / ratón) y solución salina (0,9% NaCl), n = 8 - 10 ratones / grupo. * P &lt;0,05, ** P &lt;0,01, *** P &lt;0,001 frente al grupo tratado con solución salina. Dos vías de medidas repetidas ANOVA seguido de Student Newman-Keuls test post hoc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53746/53746fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

La osteoartritis (OA) o enfermedad degenerativa de las articulaciones, es una condición debilitante asociada con el dolor que queda sólo parcialmente controlado por analgésicos disponibles. Los modelos animales se están desarrollando para mejorar nuestra comprensión de los mecanismos del dolor relacionado con la OA. A continuación se describe la metodología para el modelo monoiodoacetate del dolor de la osteoartritis en el ratón.

El Modelo Monoiodoacetate del dolor de la osteoartritis en el ratón

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

El objetivo general de este procedimiento es observar el desarrollo de comportamientos similares al dolor por osteoartritis en la articulación de la rodilla del ratón, mediante la inyección intraarticular de monoiodoacetato y la medición de déficits en la sensibilidad mecánica y en la distribución del peso corporal. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del dolor por osteoartritis, como cuáles son los mecanismos subyacentes al dolor en la osteoartritis y cuáles dianas farmacológicas son más prometedoras para futuros tratamientos. La principal ventaja de esta técnica es que es fácil de realizar y permite ajustar la gravedad de la enfermedad modificando la dosis de MIA.Por lo tanto, el modelo proporciona respuestas similares al dolor constante durante todo el período de prueba. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el tratamiento del dolor asociado al sobrepeso, ya que el modelo de MIA responde a terapias convencionales para aliviar el dolor y podría ser útil para el descubrimiento de fármacos. Para este protocolo, es habitual alojar ratones de 8 a 10 semanas de edad en grupos de cinco y permitirles aclimatarse a la sala de alojamiento.Al configurar el experimento, aleatorice los ratones manteniendo el peso corporal promedio de cada grupo igual. Etiquete los animales con números para cegar al experimentador respecto a sus tratamientos. El día de la inyección, prepare la solución de MIA en solución salina estéril en las concentraciones deseadas.Prepare siempre la solución usando mascarilla y guantes. La dosis más alta recomendada es un miligramo por diez microlitros. Utilice solución salina estéril para los ratones de control.Ahora, anestesie un ratón utilizando un carro anestésico. Primero use una cámara de isoflurano y continúe administrando el mismo gas mediante un cono nasal durante la inyección. Trate los ojos con una pomada oftálmica para que no se sequen.Una vez confirmada la anestesia mediante un pellizco en el dedo del pie, coloque al ratón boca arriba y recorte y limpie con alcohol el área que rodea la articulación de la rodilla. El tendón rotuliano será visible como una línea blanca debajo de la rótula. Para estabilizar el sitio de inyección, mantenga la rodilla en posición flexionada.Coloque un dedo índice debajo de la articulación de la rodilla y un pulgar por encima de la superficie anterior de la articulación del tobillo. Para encontrar el sitio exacto de inyección, deslice horizontalmente una aguja de calibre 26 a lo largo de la rodilla hasta que encuentre el espacio debajo de la rótula. Luego, aplique una presión suave para marcar el área, levante la aguja y la jeringa verticalmente para realizar la inyección.Guiando la aguja con un pulgar, inserte el tendón rotuliano, perpendicularmente a la tibia. No se debe sentir resistencia alguna. Realice la inyección de forma superficial en el sitio de entrada.La profundidad de la inyección es fundamental para este modelo. Se debe tener mucho cuidado para asegurarse de que la aguja no haya penetrado demasiado y, por lo tanto, haya atravesado la articulación del tobillo. Después de la inyección, masajee la rodilla para garantizar una distribución uniforme de la solución.Luego, coloque al ratón nuevamente en una jaula limpia de recuperación sobre una almohadilla calefaccionada y permita que se recupere. Observe al ratón hasta que recupere la recumbencia esternal. A continuación, devuélvalo a su jaula de origen.Antes de comenzar los experimentos conductuales, colóquese siempre una bata, guantes y una mascarilla. Durante los dos días previos a la prueba, lleve a los ratones a la sala de pruebas y permita que cada uno se acostumbre a estar en cubículos de acrílico colocados sobre una rejilla de malla metálica, en sesiones de dos horas. En los días de prueba, habitúe a los animales durante un máximo de 60 minutos antes de realizar las pruebas.Luego, aplique los filamentos de von Frey calibrados sobre la superficie plantar de la pata trasera. Comience con un filamento de 0,07 gramos. Mantenga el filamento en posición durante tres segundos o hasta que la pata se retire.Después de diez segundos, aplique el siguiente vello siguiendo el método de arriba-abajo, hasta encontrar la fuerza máxima a la que responde. No supere un gramo de fuerza. Se considera alodinia una respuesta que ocurre a 0,1 gramo o menos.Una vez detectada una retirada, vuelva a probar al animal. Comience con un filamento un nivel por debajo del filamento que produjo la retirada. Luego, continúe descendiendo por el rango de fuerzas hasta que no se observe ninguna respuesta, y a continuación ascienda nuevamente por las fuerzas hasta encontrar otra vez la fuerza de respuesta.El objetivo es recopilar una secuencia de 6 respuestas para obtener un valor k. Repita el proceso en las patas ipsilaterales y contralaterales a la extremidad inyectada. Este procedimiento debe utilizarse antes de la inyección para obtener una línea base y durante varios días posteriores a la inyección para determinar el desarrollo de alodinia mecánica.Esta prueba utiliza un medidor de peso y capacitancia calibrado con un peso de 100 gramos antes de cada uso. Al igual que la prueba de von Frey, realice esta prueba antes y después de las inyecciones. Para comenzar, entrene a cada ratón para que camine dentro de una cámara de Plexiglas en el aparato y se siente en la caja de contención.Para ello, coloque el ratón frente a la caja de contención, levante la entrada a 45 grados y permita que el ratón entre libremente. A continuación, cierre la caja. Permita que los animales se muevan libremente hasta que adopten una postura sentada.Repita este entrenamiento durante al menos dos días hasta que el ratón permanezca quieto y no se incline hacia ninguno de los lados de la cámara. Cada pata trasera debe colocarse sobre la almohadilla de registro adecuada para la medición. La medición tarda un segundo en realizarse.Realice tres mediciones separadas del peso soportado por cada pata trasera en cada sesión. Utilice los valores medios para calcular la diferencia en el peso soportado por las patas ipsilateral y contralateral. Se considera que los animales son hipersensibles si presentan un desequilibrio en la distribución del peso de 45 por ciento o menos en una pata.Se realizó un curso temporal de hipersensibilidad mecánica inducida por MIA en las patas traseras ipsilaterales utilizando una gama de dosis. La dosis más baja de MIA indujo una disminución del 50 % en los umbrales al día diez y una disminución del 70 % al día 28. La dosis más alta provocó una caída significativa de los umbrales al día cinco.También se calcularon los cambios en la carga de peso. La dosis más baja de MIA no tuvo ningún efecto medido sobre la carga de peso. Pero la siguiente dosis más alta provocó una reducción significativa en el peso soportado por la pata ipsilateral diez días después de la inyección.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar inyecciones intraarticulares de MIA en la rodilla del ratón y llevar a cabo pruebas adecuadas para evaluar el desarrollo de comportamientos similares al dolor. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en cinco minutos por ratón para la inyección, si se realiza correctamente.Al realizar este procedimiento, es importante recordar mantener a los animales tranquilos en todo momento. No olvide que trabajar con monoiodoacetato puede ser extremadamente peligroso, y siempre se deben tomar precauciones como el uso de guantes y mascarillas al llevar a cabo este procedimiento. Tras seguir este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como histología e inmunoquímica de la articulación de la rodilla para responder preguntas adicionales.Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo del dolor por osteoartritis exploraran la farmacología de la enfermedad en roedores.

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Investigación

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Medicine

Medicina

Hemos desarrollado una medida evocada de dolor de la artritis y junto con un método estandarizado para medir el dolor espontáneo en diferentes modelos murinos de artritis inducida químicamente. Estas medidas son sensibles y reproducibles para diferentes tipos de dolor en las articulaciones.

Medidas espontáneas y evocadas de dolor en modelos murinos de dolor Monoarticular de la rodilla

Este estudio describe el método de inyección intraarticular de monoyodoacetato en ratas y discute los comportamientos resultantes relacionados con el dolor y los cambios histopatológicos, que proporcionan referencias para futuras aplicaciones.

Modelo de dolor de osteoartritis inducido por inyección intraarticular de monoyodoacetato en ratas

El protocolo actual establece un método riguroso y reproducible para la cuantificación de los cambios morfológicos articulares que acompañan a la osteoartritis. La aplicación de este protocolo puede ser valiosa para monitorear la progresión de la enfermedad y evaluar las intervenciones terapéuticas en la osteoartritis.

Evaluación histomorfométrica estandarizada de la osteoartritis en un modelo de ratón quirúrgico

El presente protocolo describe los arañazos controlados de microcuchilla en la superficie del cartílago articular después de desestabilizar la rodilla del ratón cortando el ligamento miniescotibial medial. Este modelo animal presenta una forma acelerada de osteoartritis (OA) adecuada para estudiar la formación de osteofitos, la osteosclerosis y el dolor en etapa temprana.

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Intervención de Tuina en el modelo de artrosis de rodilla inducido por inyección de monoyodoacetato de sodio

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La técnica del miógrafo de alambre se utiliza para investigar las funciones del músculo liso vascular y nuevos fármacos de la pantalla. Se presenta un protocolo detallado para medir la contractilidad isométrica de la arteria mesentérica de ratón y para la detección de nuevos relajantes del músculo liso vascular.

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Aprende a inducir dolor tipo osteoartritis en ratones mediante inyección intraarticular de monoiodoacetato. Este modelo permite evaluar sensibilidad mecánica y déficits de carga para estudiar mecanismos del dolor y descubrir nuevas terapias.

El Modelo Monoiodoacetate del dolor de la osteoartritis en el ratón

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