Medición de la señalización del receptor acoplado a la proteína G mediante unión de GTP marcada con radio

El objetivo general de este procedimiento es aislar las membranas celulares que contienen receptores acoplados a proteínas G o GPCR y estudiar la farmacología de GPCR utilizando un ensayo de unión funcional a GTP. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la bioquímica con respecto a las propiedades farmacológicas de los receptores acoplados a proteínas G establecidos o huérfanos. Las principales ventajas son que es sencillo, rápido y mide el evento más proximal en la señalización de receptores acoplados a proteínas G.

Primero, coloque células de riñón embrionario humano en una placa de cultivo de tejido de 10 centímetros en 10 mililitros de DMEM completo. Incubar las células a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono, hasta alcanzar una confluencia del 70% al 80%. Después de la incubación, transfecte las células con HAMOR1 utilizando un reactivo de transfección adecuado según las directrices del fabricante.