Intraportal trasplante de islotes pancreáticos en modelo murino

Soy Thomas Linn, investigador principal del Grupo de Investigación en Diabetes de la Universidad Justus Liebig, Giessen, Alemania. El trasplante de islotes pancreáticos es un tratamiento para la diabetes mellitus tipo 1. El trasplante experimental de islotes se realiza a la cápsula renal, mientras que los programas clínicos prefieren la vía intraportal.

Por lo tanto, creemos que se necesita más investigación sobre el trasplante intraportal de islotes en modelos preclínicos. Por ejemplo, los sitios de los islotes expuestos a la sangre, ya que el sitio del trasplante es intravascular. Además, la técnica de microcirugía requiere cierta experiencia.

Por ejemplo, después de la inyección de la vena porta, puede producirse una hemorragia o puede haber problemas con la anestesia o con el mantenimiento del peso corporal del ratón receptor. Por lo tanto, creemos que la explicación visual del procedimiento es crucial. Este vídeo se centra en la vía intraportal del trasplante de islotes.

Para lograr una glucemia normal en ratones diabéticos, se puede utilizar para el trasplante singénico y alogénico en ratones negros, pero también en modelos singénicos en receptores de ratones desnudos. Retire los islotes aislados de la incubadora y colóquelos debajo de un banco de flujo. Centre los islotes con un movimiento circular de oscilación de la placa de Petri.

Llene 100 microlitros de medio en una jeringa de un ml con la ayuda de una aguja azul. Luego agregue 350 islotes en 300 microlitros de la solución de Hank. Mantenga la jeringa en posición vertical para permitir que los islotes se asienten.

Disminuya el volumen a 50 microlitros. Reemplace la aguja azul por la aguja marrón. A la misma jeringa agregue 150 microlitros de medio de gradiente de densidad en la parte superior, para alcanzar el volumen final de 200 microlitros en la jeringa.

Evite las burbujas de aire. Mantenga la jeringa en posición vertical. Gíralo ligeramente para evitar la aglomeración de islotes.

Los islotes se asentarán en el cono de la jeringa en dos o tres minutos. Después de tres días de inyección de estreptozotocina, controle el nivel de glucosa en sangre perforando la vena de la cola con la ayuda de un medidor de glucosa de mano. Anestesiar a los ratones con dalzylozina y ketamina mediante inyección intraperitoneal.

Coloque los ratones en posición supina sobre una placa térmica caliente. Revise la anestesia de profundidad pellizcando el dedo del pie. Limpie la piel con un desinfectante sin piel.

Para evitar que los ojos se sequen, manténgalos húmedos con ungüento para los ojos. Comience con la electrotomía sujetando la piel con una pinza y haciendo una incisión central de dos a tres centímetros de largo con una tijera. Coloque una gasa húmeda estéril alrededor de los bordes de la herida para mantenerla húmeda.

Mantenga el intestino situado a la izquierda y fuera de la cavidad abdominal. Mueva el duodeno y localice el páncreas. Use un dedo y un pulgar para exponer la vena porta.

Inyecte los islotes en 200 microlitros lentamente en la vena porta. Aplique la presión con el dedo índice en el sitio de la punción durante seis minutos para detener el sangrado. Coloque con cuidado el intestino, el peritoneo y la capa de músculos abdominales en su posición.

Con una pinza, levante la piel, cierre la incisión muscular y la capa superior de la piel con una sutura de seda absorbible. Aplícate un cicatrizante de heridas. Mantenga la temperatura corporal a 37 grados centígrados en una placa térmica caliente.

Observa al ratón hasta que recupere la conciencia suficiente. Proporcione tramadol junto con líquido para controlar el dolor. Después del trasplante de los islotes, se observó una caída repentina en el nivel de glucosa en sangre el primer día, de 23 milimolar por litro a 4,6 milimolar por litro en ratones diabéticos inducidos por estrepto.

La glucemia normal se mantuvo hasta 121 días. El peso corporal y el nivel de glucosa en sangre siguieron aproximadamente el mismo patrón. Después de la inyección de estreptozotocina y la cirugía, el peso corporal disminuyó; A partir del segundo día tiende a subir hacia la normalidad, de 25,3 gramos a 29,7 gramos.

En los ratones con desajuste de histocompatibilidad mayor después del trasplante de islotes, el nivel de glucosa en sangre bajó a 4,4 milimoles por litro, y la glucemia normal se observó hasta por 10 días. Después, comienza a rechazar. El peso corporal de los ratones diabéticos también sigue un patrón similar.

En el injerto exitoso de los islotes pancreáticos trasplantados en el hígado. En este estudio se explora la vía intraportal del trasplante de islotes. Este protocolo es altamente eficiente para aliviar el estrés diabético y brinda una oportunidad en profundidad para explorar el trasplante de islotes.

Este protocolo confirma que alrededor de 350 islotes son capaces de revertir el estado hiperglucémico. Además, ninguno de los ratones murió durante el procedimiento y se mantuvo el control glucémico.