In Vitro Establecimiento de una línea celular de cáncer de cabeza y cuello de murine genéticamente diseñada utilizando un sistema de virus Cas9 asociado con Adeno

Este protocolo permitió el desarrollo de modelos de cáncer de cabeza y cuello con operación genómica específica, lo que impactó significativamente en nuestra comprensión del papel de mutaciones genéticas específicas en el proceso de neoplasia. La principal ventaja de esta técnica es la facilidad con la que la línea celular se puede desarrollar desde prácticamente cualquier órgano. Demostrando el procedimiento estará Manu Prasad un estudiante de posgrado de mi laboratorio.

Comience por usar tijeras quirúrgicas para cosechar la lengua de un ratón transgénico B6 macho o hembra de seis semanas de edad. Utilice un bisturí para picar el tejido en fragmentos muy pequeños y recoger las piezas en un tubo de 15 mililitros que contiene 4,5 mililitros de RPMI medio simple sin suero. Añadir 200 microlitros de mezcla de triple enzima al tubo e incubar la muestra a 37 grados Celsius durante 30 minutos tocando el tubo cada 10 minutos para mejorar la disociación enzimática del tejido.