Perfusión e inflación del pulmón del ratón para la histología tumoral

La demostración del procedimiento estará a cargo de Mackenzie Davenport, estudiante graduada del Laboratorio Edmonds. Después de sacrificar al ratón, use unas tijeras quirúrgicas para hacer una incisión horizontal de 3,5 a cinco milímetros en el centro de la parte inferior del abdomen. A continuación, inserte unas tijeras quirúrgicas en la incisión y corte verticalmente por la línea media central hasta justo debajo del cuello del ratón.

Tire de la piel hacia atrás con los dedos e inspeccione los ganglios linfáticos axilares. Utiliza unas tijeras quirúrgicas para hacer una incisión lateral de 3,5 milímetros para abrir la cavidad abdominal. A continuación, corte en dirección interior hasta la parte inferior del tórax.

Inspeccione los órganos de la cavidad abdominal, como el hígado, el bazo y los riñones. Con la parte plana de las tijeras quirúrgicas, mueva el hígado para exponer el diafragma. Inspeccione el diafragma en busca de crecimiento tumoral o metástasis, luego corte suavemente el diafragma del lado derecho del operador, permitiendo que se expanda.

Corte el diafragma de derecha a izquierda para exponer la cavidad torácica y los pulmones, teniendo cuidado de no cortar los pulmones. Corte a través del extremo lateral de la caja torácica izquierda para inspeccionar el lóbulo izquierdo de los pulmones. Mueva suavemente los lóbulos derechos del pulmón para apartarlos.

A continuación, corte el extremo lateral de la caja torácica derecha y retire la caja torácica. Si se requiere tejido pulmonar fresco o congelado, use pinzas de hemostático para pinzar el bronquio del lóbulo izquierdo y resecar el pulmón izquierdo con tijeras quirúrgicas antes de la perfusión. Use las pinzas para levantar el tejido que cubre la tráquea y corte el exceso de tejido, luego corte suavemente el tejido delgado que recubre la tráquea para exponer las vías respiratorias.

Cortar la arteria renal con unas tijeras quirúrgicas. Para perfundir los pulmones, use una jeringa de tres mililitros con una aguja de calibre 22 para inyectar PBS con 10 unidades por mililitro de heparina en el ventrículo derecho del corazón. Profusa lentamente los pulmones a aproximadamente 300 microlitros por segundo, lo que hace que los pulmones se vuelvan blancos.

Para inflar los pulmones, use una jeringa de tres mililitros con una aguja de calibre 22 y manténgala paralela a la tráquea. Inserte la aguja en la tráquea e inyecte formalina al 10% con un caudal no superior a 200 microlitros por segundo hasta que los pulmones se hayan inflado por completo. Una vez que los pulmones están inflados, la formalina refluirá fuera de la tráquea.

Sostenga la aguja en su lugar durante unos segundos más y luego retírela. Use fórceps para levantar el corazón, inserte unas tijeras quirúrgicas directamente detrás de los pulmones y corte el tejido conectivo para resecar los pulmones. Luego corte el para sacarlo de los pulmones.

Coloque los pulmones en un casete etiquetado con el ID del ratón o el ID del estudio, luego coloque el casete en formol tamponado al 10% durante 24 a 48 horas. Los pulmones se pueden dejar en fijador durante más de un año si se desea. Cuando termine, transfiera el casete que contiene los pulmones a etanol al 70% y proceda con la histología.

Este protocolo permite una rápida perfusión, inflado y fijación de los pulmones de los ratones. Aquí se muestra la histología tumoral en pulmones que se han perfundido e inflado con esta técnica. Cuando se omite el paso de profusión, o los pulmones no se perfunden correctamente, el exceso de sangre en los pulmones crea una histología menos que ideal y puede dificultar la observación completa de la arquitectura pulmonar.

La inflación es un paso importante en este protocolo. Es más difícil identificar áreas de hiperplasia en pulmones desinflados debido a la compresión y la proximidad de los alvéolos. Sin embargo, en los pulmones sobreinflados, muchas de las paredes alveolares se han roto, lo que podría confundirse con enfisema.