Instilación intratraqueal de células madre en ratas neonatales a término

Se describe un protocolo para realizar el trasplante intratraqueal de células estromales mesenquimales (MSC) a través de la inyección intratraqueal en ratas neonatales. Esta técnica es una opción clínicamente viable para la administración de células madre y fármacos en pulmones de ratas neonatales para evaluar su eficacia.

La instilación intratraqueal es un biotécnico clínico para la administración de células madre y fármacos en un pulmón neonatal para evaluar la eficacia de Chilman. Esta técnica puede ser de buena fe para su uso con una variedad de aplicación primaria en una rata neonatal y es una medida relativamente fácil y rentable para el tratamiento de la enfermedad pulmonar. En el quinto día posnatal, retén los cachorros de rata Sprague-Dawley anestesiados.en un puesto de intubación de 60 grados.

Y coloque la cinta de etiquetado del laboratorio en las cuatro extremidades de cada cachorro para asegurarlas en su lugar. Aplique cinta adhesiva debajo de cada nariz para fijar las cabezas. Y identifica el primer cuello para la traqueotomía punzante.

Utilice una almohadilla de preparación de alcohol al 75% para desinfectar el área de la incisión. Y hacer una incisión vertical de 3 centímetros de línea media por encima de la tráquea para evitar dañar las arterias carótidas. Utilice pinzas cónicas curvas sin gancho para disociar las capas de grasa y músculo para localizar la tráquea.

Cuando se pueda observar la tráquea, utilice las pinzas para agarrar la tráquea y utilice una jeringa de 100 microlitros equipada con una aguja de calibre 30 para inyectar una de las quintas pesqueras luciferasaS de la luciérnbala GFP etiquetadas células estromales mesenquimales en 30 microlitros de solución salina en la tráquea, durante la fase inspiratoria. Cuando se hayan inyectado todas las células, cierre la incisión con 160 puntos de seda atando el nudo lo más firmemente posible. Y cortando los extremos de la sutura lo más corto posible.

Luego deje que el cachorro se recupere de la anestesia, en un punto cálido con monitoreo hasta que esté caliente, rosado y capaz de movimiento espontáneo antes de devolver al animal a su jaula. Para rastrear las células estrommales mesenquimales humanas trasplantadas 15 minutos después de que las ratas se hayan recuperado de la cirugía, inyecte intraperitonealmente a los cachorros anestesiados con 125 miligramos por kilogramo de sal de potasio Luciferian en PBS. 10 minutos después de la inyección, utilice un pequeño sistema de imágenes de animales para adquirir imágenes secuenciales a intervalos de 5-15 segundos con un binning medio, un f-stop y un campo de visión de 26 centímetros.

A continuación, utilice el software de imágenes para cuantificar la actividad de luminiscencia de los pulmones en función de las regiones automáticas de interés. Se observa un alto nivel de expresión de GFP en células madre mesenquimales humanas etiquetadas con lucios de luciferasa. Las células madre mesenquimales se pueden caracterizar aún más por su expresión de marcador de superficie celular y su capacidad para diferenciarse en osteocitos, condrocitos y adipocitos.

Las imágenes de luminiscencia de las células mesenquimales humanas trasplantadas en VIVO, revelan una ausencia de señalización luminiscente en las regiones pulmonares de ratas tratadas con solución salina normal. En ratas tratadas con células madre mesenquimales, se observa luminiscencia dentro de la tráquea y las regiones pulmonares centrales de esos animales. De hecho, en este análisis representativo, la cuantificación de la intensidad de la luminiscencia reveló que las ratas tratadas con células madre mesenquimales presentaban un aumento de aproximadamente 13 veces en la actividad de luminiscencia en comparación con las ratas tratadas con solución salina normal.

Al intentar este procedimiento, es importante diseccionar y aislar la tráquea sin limitar las arterias circundantes. Esta técnica permite estudiar los efectos de la administración intratraqueal de células y fármacos de la enfermedad de Palmer neonatal utilizando rayos con el modo de paciente humano.