Medición de la fotofisiología de la etapa adjunta de Colacium sp. por un fluorómetro de tasa de repetición rápida tipo Cuvette

Este protocolo mide la actividad fotosintética de las algas adheridas, mientras que todavía se adhieren al plancton, al igual que en la naturaleza. La principal ventaja de esta técnica es que la medición de la fotofisiología se puede hacer en tiempo real sin distracción de la muestra. Para examinar los efectos de los individuos de zooplancton sobre la fluorescencia basal, prepare scapholeberis mucronata adulto del cultivo sin ningún organismo adherido.

Ahora priva a los individuos en FLW a 20 grados Celsius durante al menos 90 minutos para evitar la fluorescencia del contenido intestinal. Vierta 1.5 mililitros de FWL en una cubeta. Recoja el número deseado de s.

individuos mucronata usando una pipeta bajo un microscopio óptico a un aumento de 100 veces y los transfieren a la cubeta. Agregue FLW para llevar el volumen de la muestra hasta 2 mililitros y permita que se aclimate con poca luz a 20 grados Celsius durante 15 minutos antes de la medición del fluorómetro de tasa de repetición rápida. Luego haga clic en actuar para ejecutar"para iniciar la medición y repetir las mediciones más de tres veces por muestra.

Lea el valor F0 de la gráfica resultante. Recoja las especies de colacium con un caparazón muda usando una pipeta bajo un microscopio óptico a un aumento de 100 veces y lávelas con FLW. Inocular asépticamente especies de colacio en el medio AF-6 en un tubo de vidrio de 10 mililitros en un banco limpio.

Mantenga el cultivo a una temperatura NC2 en una cámara de crecimiento, agitando el tubo de vidrio suavemente a mano al menos una vez al día para evitar el asentamiento celular. Para examinar los efectos de los individuos de zooplancton sobre la clorofila y la fluorescencia de las especies de colacium, use s. mucronata adulta sin ningún organismo adherido.

Para evitar la fluorescencia del contenido intestinal, muera de hambre a las personas en la PDA durante al menos 90 minutos. Configure un fluorómetro de tasa de repetición rápida tipo cubeta. Ahora vierta una muestra de 1,5 mililitros de submuestra de especies de colacium precultivadas en una cubeta.

Luego transfiera el número deseado de individuos s. mucronata a estas cubetas y lleve el volumen de muestra hasta 2 mililitros con el medio filtrado. Aclimata a los individuos bajo poca luz a 20 grados Celsius durante 15 minutos antes de tomar la medición del fluorómetro de tasa de repetición rápida.

Haga clic en actuar para ejecutar"para iniciar la medición, repitiendo las mediciones más de tres veces por muestra. Lea los valores F0 y FM de la gráfica resultante. Para corregir la fluorescencia basal, filtre el medio de cultivo con un filtro de 0,2 micrómetros del tamaño de un vertido y mida la fluorescencia.

Reste F0 de la muestra basal de F0 y FM de especies de colacium o modifique el valor de corrección en blanco en la configuración de la pestaña de opciones. Aísle a los individuos de s. mucronata con especies de colacium usando una pipeta bajo un microscopio óptico.

Luego lave s. mucronata usando FLW. Transferencia s.

mucronata en 100 mililitros de PDA y manténgalos en condiciones oscuras a temperatura NC2 durante 90 minutos por inanición. Vierta 1,5 mililitros de FLW en una cubeta. Traslado alrededor de diez s.

individuos mucronata con especies de colacium en una cubeta y agregar FLW para llevar la muestra hasta 2 mililitros. Aclimatar a los individuos bajo poca luz a temperatura N2C durante 15 minutos y medir la clorofila y la fluorescencia, como se menciona en el manuscrito de texto. Para enumerar el número de células adheridas, fije la muestra con glutaraldehído al 2% después de tomar la medición del fluorómetro de tasa de repetición rápida.

Luego tome fotografías a varias profundidades focales y posiciones de s. mucronata bajo un microscopio de luz. No hubo un efecto significativo sobre la fluorescencia basal o la clorofila a fluorescencia por s.

mucronata hasta 5 individuos por mililitro. Sin embargo, la máxima eficiencia fotoquímica y el enfriamiento no fotoquímico se vieron significativamente afectados cuando la densidad de s. mucronata fue de 7,5 individuos por mililitro.

La variación estacional en la fitofisiología de las especies de colacium durante la etapa de unión y la etapa planctónica para la fase estacionaria en el medio AF-6 mostró una eficiencia fotoquímica máxima media similar y un enfriamiento no fotoquímico. Para la etapa adjunta de las especies de colacium en condiciones oscuras, no hubo diferencias significativas en los parámetros fotofisiológicos, excepto que el enfriamiento no fotoquímico fue mayor para el manganeso que para el calcio después de tres horas, y a una intensidad de luz baja a las 21 horas. Para la etapa planctónica, la sección transversal de absorción de PS2 fue significativamente menor en el tratamiento con manganeso que en el tratamiento con calcio a las tres horas.

La eficiencia fotoquímica efectiva fue significativamente mayor, pero el enfriamiento no fotoquímico fue menor en el tratamiento con manganeso que en el control a las 21 horas. Bajo el aumento de la luz, el manganeso tendió a disminuir la sección transversal de absorción de PS2 a las tres horas, en el enfriamiento no fotoquímico a las 21 horas, al tiempo que aumentaba la eficiencia fotoquímica efectiva a las tres horas. El calcio mejoró ligeramente el enfriamiento no fotoquímico bajo una luz creciente.

Sin embargo, disminuyó la eficiencia fotoquímica efectiva a las tres horas. Lo más importante es el efecto de los organismos de sustrato. Si las algas se adhieren a diferentes especies o materiales, el efecto puede ser diferente.

Además de este protocolo, la medición de la fijación de carbono o las tasas de producción de oxígeno son útiles para aclarar la respuesta de la productividad del calcio a las manipulaciones experimentales. Este protocolo nos permite aclarar cómo la actividad fotosintética de las algas adheridas responde a los cambios ambientales.