In vivo Detección de permeabilidad vascular en glándula submandibular de ratón

El presente protocolo describe una medida de detección de permeabilidad paracelular in vivo para evaluar la función de las uniones endoteliales estrechas en glándulas submandibulares de ratón. Sin embargo, la microscopía de barrido láser de dos fotones no solo tiene la ventaja de la microscopía confocal convencional, sino que también se puede usar para detectar tejidos e imágenes más profundos con mayor claridad. Este experimento proporciona una buena medida de método para evaluar la permeabilidad vascular de diferentes tejidos, especialmente los tejidos superficiales y órganos de los animales.

Comience eligiendo trazadores apropiados como fluoresceína, isotiocianato, dextrano marcado y rodamina B, marcado como dextrano con espectros de emisiones de excitación distintos, para minimizar la interferencia entre las señales de fluorescencia para el ensayo de permeabilidad. Diluir las trazas en solución salina tamponada con fosfato estéril en 100 miligramos por mililitro y almacenar las alícuotas protegidas de la luz a menos 20 grados centígrados. Después de anestesiar al ratón macho de tipo salvaje de 8 a 10 semanas de edad, sostenga suavemente la cabeza y el cuello del ratón para hacer que un lado del globo ocular sobresalga ligeramente.