Name: Generación de linfocitos T reguladores del receptor de antígeno quimérico humano (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Aprende a generar linfocitos T reguladores con receptores de antígeno quimérico humanos para terapias de enfermedades autoinmunes y trasplantes. Este protocolo estandarizado mejora la reproducibilidad en investigación.

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<meta charset="utf8"></head><body>Ingeniería y expansión de Tregs CAR humanos para terapias de regulación inmunitaria

<ol><li>Zhang, X., Zhu, L., Zhang, H., Chen, S., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR-T+cell+therapy+in+hematological+malignancies%3A+current+opportunities+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">CAR-T cell therapy in hematological malignancies: current opportunities and challenges.</a> Front Immunol. 13, 927153(2022).</li>
<li>Cappell, K. M., Kochenderfer, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcomes+following+CAR+T+cell+therapy%3A+what+we+know+so+far%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Long-term outcomes following CAR T cell therapy: what we know so far.</a> Nat Rev Clin Oncol. 20 (6), 359-371 (2023).</li>
<li>Choi, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraventricular+CARv3-TEAM-E+T+cells+in+recurrent+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Intraventricular CARv3-TEAM-E T cells in recurrent glioblastoma.</a> N Engl J Med. 390 (14), 1290-1298 (2024).</li>
<li>Brown, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locoregional+delivery+of+IL-13Ralpha2-targeting+CAR-T+cells+in+recurrent+high-grade+glioma%3A+a+phase+1+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Locoregional delivery of IL-13Ralpha2-targeting CAR-T cells in recurrent high-grade glioma: a phase 1 trial.</a> Nat Med. 30 (4), 1001-1012 (2024).</li>
<li>Bagley, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+bivalent+CAR+T+cells+targeting+EGFR+and+IL13Ralpha2+in+recurrent+glioblastoma%3A+phase+1+trial+interim+results%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Intrathecal bivalent CAR T cells targeting EGFR and IL13Ralpha2 in recurrent glioblastoma: phase 1 trial interim results.</a> Nat Med. 30 (5), 1320-1329 (2024).</li>
<li>Ghobadinezhad, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+regulatory+cell-based+therapy+in+autoimmune+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The emerging role of regulatory cell-based therapy in autoimmune disease.</a> Front Immunol. 13, 1075813(2022).</li>
<li>Sakaguchi, S., Yamaguchi, T., Nomura, T., Ono, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+and+immune+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells and immune tolerance.</a> Cell. 133 (5), 775-787 (2008).</li>
<li>Sakaguchi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+and+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells and human disease.</a> Annu Rev Immunol. 38, 541-566 (2020).</li>
<li>Ferreira, L. M. R., Muller, Y. D., Bluestone, J. A., Tang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+regulatory+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Next-generation regulatory T cell therapy.</a> Nat Rev Drug Discov. 18 (10), 749-769 (2019).</li>
<li>Rosenblum, M. D., Gratz, I. K., Paw, J. S., Abbas, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treating+human+autoimmunity%3A+current+practice+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Treating human autoimmunity: current practice and future prospects.</a> Sci Transl Med. 4 (125), 125sr121(2012).</li>
<li>Sawitzki, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+cell+therapy+in+kidney+transplantation+%28The+ONE+Study%29%3A+a+harmonised+design+and+analysis+of+seven+non-randomised%2C+single-arm%2C+phase+1%2F2A+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Regulatory cell therapy in kidney transplantation (The ONE Study): a harmonised design and analysis of seven non-randomised, single-arm, phase 1/2A trials.</a> Lancet. 395 (10237), 1627-1639 (2020).</li>
<li>Spanier, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tregs+with+an+MHC+class+II+peptide-specific+chimeric+antigen+receptor+prevent+autoimmune+diabetes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Tregs with an MHC class II peptide-specific chimeric antigen receptor prevent autoimmune diabetes in mice.</a> J Clin Invest. 133 (18), e168601(2023).</li>
<li>Muller, Y. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+engineering+of+an+anti-HLA-A2+chimeric+antigen+receptor+in+regulatory+T+cells+for+transplant+immune+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Precision engineering of an anti-HLA-A2 chimeric antigen receptor in regulatory T cells for transplant immune tolerance.</a> Front Immunol. 12, 686439(2021).</li>
<li>MacDonald, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alloantigen-specific+regulatory+T+cells+generated+with+a+chimeric+antigen+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Alloantigen-specific regulatory T cells generated with a chimeric antigen receptor.</a> J Clin Invest. 126 (4), 1413-1424 (2016).</li>
<li>Boardman, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flagellin-specific+human+CAR+Tregs+for+immune+regulation+in+IBD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Flagellin-specific human CAR Tregs for immune regulation in IBD.</a> J Autoimmun. 134, 102961(2023).</li>
<li>Schreeb, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+design%3A+human+leukocyte+antigen+Cclass+I+molecule+A%28%2A%2902-chimeric+antigen+receptor+regulatory+T+cells+in+renal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int+Rep%22%5BJournal%5D)">Study design: human leukocyte antigen Cclass I molecule A(*)02-chimeric antigen receptor regulatory T cells in renal transplantation.</a> Kidney Int Rep. 7 (6), 1258-1267 (2022).</li>
<li>Zimmerman, C. M., Robino, R. A., Cochrane, R. W., Dominguez, M. D., Ferreira, L. M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redirecting+human+conventional+and+regulatory+T+cells+using+chimeric+antigen+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Redirecting human conventional and regulatory T cells using chimeric antigen receptors.</a> Methods Mol Biol. 2748, 201-241 (2024).</li>
<li>Tang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+decrease+of+donor-reactive+T%28regs%29+after+liver+transplantation+limits+T%28reg%29+therapy+for+promoting+allograft+tolerance+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Selective decrease of donor-reactive T(regs) after liver transplantation limits T(reg) therapy for promoting allograft tolerance in humans.</a> Sci Transl Med. 14 (669), eabo2628(2022).</li>
<li>Bender, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+2+randomized+trial+with+autologous+polyclonal+expanded+regulatory+T+cells+in+children+with+new-onset+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes.</a> Sci Transl Med. 16 (746), eadn2404(2024).</li>
<li>Ferreira, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conference+report%3A+Advanced+Therapies+Week+2023%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Conference report: Advanced Therapies Week 2023.</a> Regen Med. 18 (4), 297-299 (2023).</li>
<li>Cochrane, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+test+human+CAR+T+cells+in+solid+tumors%2C+the+next+frontier+of+CAR+T+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">How to test human CAR T cells in solid tumors, the next frontier of CAR T cell therapy.</a> Methods Mol Biol. 2748, 243-265 (2024).</li>
<li>Roy, A., Krzykwa, E., Lemieux, R., Neron, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+efficiency+of+gamma-irradiated+versus+mitomycin+C-treated+feeder+cells+for+the+expansion+of+normal+human+cells+in+long-term+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematother+Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Increased efficiency of gamma-irradiated versus mitomycin C-treated feeder cells for the expansion of normal human cells in long-term cultures.</a> J Hematother Stem Cell Res. 10 (6), 873-880 (2001).</li>
<li>Eyquem, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+a+CAR+to+the+TRAC+locus+with+CRISPR%2FCas9+enhances+tumour+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Targeting a CAR to the TRAC locus with CRISPR/Cas9 enhances tumour rejection.</a> Nature. 543 (7643), 113-117 (2017).</li>
<li>Negrini, M., Wang, G., Heuer, A., Bjorklund, T., Davidsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AAV+Production+everywhere%3A+a+simple%2C+fast%2C+and+reliable+protocol+for+in-house+AAV+vector+production+based+on+chloroform+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Neurosci%22%5BJournal%5D)">AAV Production everywhere: a simple, fast, and reliable protocol for in-house AAV vector production based on chloroform extraction.</a> Curr Protoc Neurosci. 93 (1), e103(2020).</li>
<li>Velasco Cardenas, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+CD3+diversity+to+optimize+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Harnessing CD3 diversity to optimize CAR T cells.</a> Nat Immunol. 24 (12), 2135-2149 (2023).</li>
<li>Boomer, J. S., Green, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enigmatic+tail+of+CD28+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">An enigmatic tail of CD28 signaling.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (8), a002436(2010).</li>
<li>Suhoski, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+artificial+antigen-presenting+cells+to+express+a+diverse+array+of+co-stimulatory+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineering artificial antigen-presenting cells to express a diverse array of co-stimulatory molecules.</a> Mol Ther. 15 (5), 981-988 (2007).</li>
<li>Fung, V. C. W., Rosado-Sanchez, I., Levings, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+of+human+T+cell+subsets+with+lentivirus%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Transduction of human T cell subsets with lentivirus.</a> Methods Mol Biol. 2285, 227-254 (2021).</li>
<li>Bailey-Bucktrout, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-antigen-driven+activation+induces+instability+of+regulatory+T+cells+during+an+inflammatory+autoimmune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Self-antigen-driven activation induces instability of regulatory T cells during an inflammatory autoimmune response.</a> Immunity. 39 (5), 949-962 (2013).</li>
<li>Nakagawa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instability+of+Helios-deficient+Tregs+is+associated+with+conversion+to+a+T-effector+phenotype+and+enhanced+antitumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Instability of Helios-deficient Tregs is associated with conversion to a T-effector phenotype and enhanced antitumor immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (22), 6248-6253 (2016).</li>
<li>Dawson, N. A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+effects+of+chimeric+antigen+receptor+co-receptor+signaling+domains+in+human+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Functional effects of chimeric antigen receptor co-receptor signaling domains in human regulatory T cells.</a> Sci Transl Med. 12 (557), eaaz3866(2020).</li>
<li>Rana, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR-+and+TRuC-redirected+regulatory+T+cells+differ+in+capacity+to+control+adaptive+immunity+to+FVIII%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">CAR- and TRuC-redirected regulatory T cells differ in capacity to control adaptive immunity to FVIII.</a> Mol Ther. 29 (9), 2660-2676 (2021).</li>
<li>Battaglia, M., Stabilini, A., Tresoldi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+human+T+regulatory+cells+with+the+mTOR-inhibitor+rapamycin%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding human T regulatory cells with the mTOR-inhibitor rapamycin.</a> Methods Mol Biol. 821, 279-293 (2012).</li>
<li>Brady, B. L., Steinel, N. C., Bassing, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+receptor+allelic+exclusion%3A+an+update+and+reappraisal%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen receptor allelic exclusion: an update and reappraisal.</a> J Immunol. 185 (7), 3801-3808 (2010).</li>
<li>Samarasinghe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterization+of+alloreactive+T+cells+identifies+CD25+and+CD71+as+optimal+targets+for+a+clinically+applicable+allodepletion+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional characterization of alloreactive T cells identifies CD25 and CD71 as optimal targets for a clinically applicable allodepletion strategy.</a> Blood. 115 (2), 396-407 (2010).</li>
<li>Voss, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FOXP3+protects+conventional+human+T+cells+from+premature+restimulation-induced+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">FOXP3 protects conventional human T cells from premature restimulation-induced cell death.</a> Cell Mol Immunol. 18 (1), 194-205 (2021).</li>
<li>Collison, L. W., Vignali, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Treg+suppression+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">In vitro Treg suppression assays.</a> Methods Mol Biol. 707, 21-37 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Virus adenoasociados&nbsp;( AAV)</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Células</td><td></td><td></td> K562 que expresan dianas CAR<td>, por ejemplo, CD19-K562</td></tr><tr>Irradiador <td></td><td></td><td></td>de<td>cesio-137</td></tr><tr><td>Anti-humano CD8 PerCP (clon SK1)</td><td>Biolegend</td><td>344708</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humano CD4 PE/Cy7 (clon SK3)</td><td>Biolegend</td><td>344612</td><td></td></tr><tr><td>Imán DynaMag-15</td><td>ThermoFisher</td><td>12301D</td><td></td></tr><tr><td>Ghost BV510 tinte de viabilidad&nbsp;</td><td>TONBO</td><td>13-0870-T100</td><td></td></tr><tr><td>K562 células</td><td>Tipo Americano Colección de Cultivo</td><td>CCL-243</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M EDTA, pH 8.0</td><td>Gibco&nbsp;</td><td></td><td></td>15575020</tr><tr><td>1 M HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>solución de cloruro de amonio</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>7850</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humano CD127 PE (clon hIL-7R-M21)</td><td>BD Biosciences</td><td>557938</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humano CD25 APC (clon BC96)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td>302610</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humano CD4 FITC (clon SK3)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td></td><td></td>344604</tr><tr><td>Anti-humano CD71 PE (clon SK1)</td><td>Biolegend</td><td>334106</td><td></td></tr><tr><td>Anti-humano CD8 PerCP (clon SK1)</td><td>Biolegend&nbsp;</td><td></td><td></td>344707</tr><tr><td>CTLA-4 antihumano PerCP-e710</td><td>ThermoFisher</td><td>46-1529-42</td><td></td></tr><tr><td>EGFR antihumano APC (clon AY13)</td><td>Biolegend</td><td>352905</td><td></td></tr><tr><td>antihumano FOXP3 eFluor 450</td><td>ThermoFisher</td><td>48-4776-42</td><td></td></tr><tr><td>Antihumano HELIOS PE</td><td>Biolegend</td><td>137216</td><td></td></tr><tr><td>Ca2+ y Mg2+ sin Dulbecco' s Solución salina tamponada con fosfato (DPBS)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Contador de células (TC20 Automated Cell Counter)</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de recuento de células</td><td>Bio-Rad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Kit de proliferación celular violeta</td><td>ThermoFisher</td><td>C34571</td><td></td></tr><tr><td>DNA LoBind Tubos</td><td>Eppendorf</td><td>22431021</td><td></td></tr><tr><td>Easy 50 EasySep magnet&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>18002</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Kit de enriquecimiento de células T humanas CD4+</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>19052</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Human CD8+ Kit de enriquecimiento de células T</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>19053</td><td></td></tr><tr><td>EasySep magnet&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>18000</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience Foxp3 juego de tampones de tinción con factor de transcripción</td><td>ThermoFisher</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Tubos de ensayo de poliestireno de fondo redondo con tapón a presión para filtro de células, 5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-23</td><td>40&mu; m</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Citómetro de flujo</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>CytoFLEX LX U3-V5-B3-Y5-R3-I2</td></tr><tr><td>Clasificador de células activado por fluorescencia</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>FACS Aria III Clasificador de células</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Células T humanas CD3/28 Expansión y activación Dynabeads</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de transfección de neón Invitrogen</td><td>ThermoFisher</td><td>10431915</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de transfección de neón Invitrogen 100 &mu; L Kit</td><td>ThermoFisher</td><td>10114334</td><td></td></tr><tr><td>Lentivirus</td><td>VectorBuilder</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MEM Solución de aminoácidos no esenciales&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Myc Tag anticuerpo A647 (clon 9B11)</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>2233S</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I Medio sérico reducido</td><td>ThermoFisher</td><td>31985062</td><td></td></tr><tr><td>solución de penicilina-estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Interleucina-2 humana recombinante (rhIL-2)</td><td>Peprotech</td><td>200-02</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medio, sin glutamina&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>piruvato de sodio</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>Citómetro de flujo espectral</td><td>Cytek</td><td></td><td>Northern Lights</td></tr><tr><td>TRAC gRNA</td><td>Synthego</td><td></td><td>Sequence (CAGGGTTCTGGATATCTGT)</td></tr><tr><td>TrueCut Cas9 Protein v2</td><td>ThermoFisher</td><td>A36496</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue solution&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>T8154-100ML</td><td></td></tr><tr><td>1/10 Leukopak</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>200-0092</td><td>1-2 mil millones de PBMC</td></tr></tbody></table>

generación de linfocitos t reguladores del receptor de antígeno quimérico humano

Generation of Human Chimeric Antigen Receptor Regulatory T Cells

El protocolo descrito aquí proporciona una línea simplificada y estandarizada para evaluar nuevas construcciones de receptores de antígenos quiméricos (CAR) en células T reguladoras humanas (Tregs), con el objetivo de crear terapias vivas para enfermedades autoinmunes, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo de trasplante de órganos y alergia. La Figura 1 muestra cómo obtenemos Tregs humanas de alta pureza a partir de sangre periférica utilizando FACS (Figura 1A</s...

Generación de linfocitos T reguladores del receptor de antígeno quimérico humano

Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has reshaped the face of cancer treatment, leading to record remission rates in previously incurable ...

generation-of-human-chimeric-antigen-receptor-regulatory-t-cells

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Se describe un método para la generación de regulación, la memoria y el ingenuo células T de un donante de sangre humana única. Polarizada Tregs puede ser entonces en comparación con otros subconjuntos en una variedad de aplicaciones genéticas y funcionales con homogeneidad genética, incluyendo un ensayo de supresión también detallan aquí.

La generación de células T reguladoras inducidas de células humanas primarias T vírgenes y de memoria

Este video muestra una técnica para fabricar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) ex vivo. Las células T humanas se incuban con perlas magnéticas recubiertas con anticuerpos anti-CD3 y anti-CD28, junto con un medio suplementado con interleucina-2 (IL-2), lo que conduce a la activación y proliferación de las células T. Se introducen vectores lentivirales transgénicos, lo que permite que el ARN transgénico se integre en el genoma del huésped y exprese el transgén. Esto da como...

Una técnica ex vivo para fabricar linfocitos T receptores de antígenos quiméricos

Este video muestra una técnica para la generación ex vivo de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específico de antígeno tumoral. Los vectores retrovirales portadores de ARN transgénico se mezclan con células de bazo en un medio suplementado con interleucina-2 para promover la supervivencia y proliferación de las células T. A continuación, la mezcla se transfiere a una placa recubierta con fragmentos de fibronectina humana recombinante y se centrifuga para facilitar la fusión del...

Una técnica ex vivo para generar células T receptoras de antígenos quiméricos específicos de tumores

Este video muestra una técnica para generar células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) específico de antígeno a través de la transducción retroviral. Los linfocitos T CD8+ murinos activados se añaden a una placa de micropocillos recubierta con fragmentos de fibronectina recombinante. A continuación, se introducen vectores retrovirales que contienen ARN transgénico que codifica un receptor de antígeno quimérico (CAR) específico del antígeno, y se centrifuga la placa para facilitar la...

Una técnica para la generación de células CAR-T específicas de antígenos

Describimos un enfoque para generar de forma fiable células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) y probar su diferenciación y función in vitro e in vivo.

Fabricación de células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) para inmunoterapia adoptiva

Este protocolo describe el proceso de transducción de células T humanas primarias con un gen de interés, lo que garantiza la compatibilidad con los estándares de Buenas Prácticas de Fabricación (GMP).

Un procedimiento conforme a las GMP para la generación de células T modificadas genéticamente

En este artículo se detalla el proceso de fabricación de linfocitos T receptores de antígenos quiméricos para uso clínico, concretamente utilizando un procesador celular automatizado capaz de realizar la transducción viral y el cultivo de linfocitos T. Proporcionamos recomendaciones y describimos los escollos que deben tenerse en cuenta durante el desarrollo del proceso y la implementación de un ensayo clínico de fase inicial.

Fabricación de células T con receptor de antígeno quimérico en un procesador celular automatizado

Este protocolo agiliza la producción de vectores retrovirales y la transducción de células T murinas, lo que facilita la generación eficiente de células CAR-T de ratón.

Generación eficiente de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) murino

En este trabajo se presenta un protocolo para la generación y verificación funcional de células T con receptor de antígeno quimérico (CAR) sensibles a la hipoxia. Este protocolo presenta la generación de células CAR-T sensibles a la hipoxia basada en lentivirus y su caracterización, incluida la validación de la expresión de CAR dependiente de la hipoxia y la citotoxicidad selectiva.

Generación y verificación funcional de células T receptoras de antígenos quiméricos sensibles a la hipoxia

Las células T reguladoras CD4+ son potentes inmunomoduladores y cumplen funciones importantes en la homeostasis inmunitaria. La escasez de estas células en la sangre periférica dificulta los estudios funcionales, especialmente en el contexto de la infección por VIH-1. Aquí describimos un método para aislar y expandir las Tregs CD4+ funcionales de sangre periférica de individuos infectados por VIH-1.

Nuevas herramientas para expandir células T reguladoras de las personas VIH-1-infected

Aprende a generar linfocitos T reguladores con receptores de antígeno quimérico humanos para terapias de enfermedades autoinmunes y trasplantes. Este protocolo estandarizado mejora la reproducibilidad en investigación.

Generación de linfocitos T reguladores del receptor de antígeno quimérico humano

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