1. Génération de poisson zèbre atteint de diabète sucré, poisson DM
- Préparez les réservoirs d’eau de récupération et d’anesthésie. L’eau de récupération est de l’eau de poisson normale. Pour l’eau anesthésique, ajoutez suffisamment de 2-phénoxyéthanol pour obtenir une dilution de 1:1 000 dans de l’eau de poisson normale.
- Préparez une solution à 0,3 % (dans une hotte) de streptozocine (STZ) en ajoutant 6 mg de STZ à 2 ml de chlorure de sodium à 0,09 % et placez immédiatement la solution sur de la glace. Cela fournira suffisamment de solution d’injection pour l’injection d’environ 20 poissons en 20 min. Si vous dépassez la marque des 20 minutes, arrêtez-vous et préparez une nouvelle solution STZ avant de continuer. Dans un tube séparé, aliquote suffisamment de solution saline pour les poissons témoins. Une fois que la STZ est solubilisée, toutes les étapes suivantes ne nécessitent pas l’utilisation d’une hotte.
- Remplissez une seringue de 1/2 cc équipée d’une aiguille de calibre 27 1/2 avec le STZ ou des solutions de contrôle en veillant à ce qu’aucune bulle d’air ne soit piégée.
- Anesthésiez chaque poisson individuellement en le plaçant dans de l’eau anesthésique et attendez que son mouvement de nage cesse (1 à 2 min).
- Une fois anesthésié, placez brièvement le poisson sur une serviette en papier pour absorber tout excès d’eau, placez le poisson dans un bateau de pesée et mesurez la masse du poisson.
- Placez le poisson sur une surface ferme (couvercle de boîte de Pétri) pour l’injection.
- Injectez la STZ ou la solution témoin dans la cavité péritonéale du poisson en insérant l’aiguille au-delà du biseau dans la face postérieure du péritoine ventral.
- 0,35 mg/g (350 mg/kg) de STZ doit être administré à chaque poisson et le volume de solution à 0,3 % requis peut être calculé de la manière suivante.
- Multipliez la masse de poisson (g) par 0,35 pour obtenir la quantité de STZ en mg requise.
- Diviser par 3 le produit généré ci-dessus pour obtenir le volume de la solution injectable à 0,3 % en μL.
Echantillon : Pour un poisson de 0,5 g : a) 0,5 x 0,35 = 0,175 b) 0,0175/3 = 0,058 ml = 58 μl.
Le même volume sans la STZ serait injecté pour un poisson témoin. Une feuille pour les volumes à injecter par masse de poisson doit être générée et utilisée pour une référence rapide.
- Après l’injection, placez les poissons dans le réservoir d’eau de récupération et surveillez-les pour s’assurer qu’ils nagent normalement. Une fois cela réalisé, les poissons sont transférés dans un bassin vivant normal qui est maintenu à une température réduite de 22 °C à 24 °C. Cette température réduite est essentielle pour l’induction efficace de l’hyperglycémie (diabète sucré, DM).
- Bien que l’hyperglycémie soit détectée dans les 24 heures suivant la première injection, afin d’induire un état prolongé d’hyperglycémie très élevée, le poisson-zèbre nécessite une phase d’induction d’injection fréquente suivie d’injections hebdomadaires comme indiqué ci-dessous.
Semaine 1 : 3 injections (Jour 1, 3, 5), Semaine 2 : 1 injection (Jour 12), Semaine 3 : 1 injection (Jour 19), Semaine 4 : (Jour 21) Effectuer le test d’intérêt.
À ce stade, on considère que le poisson-zèbre est dans un état prolongé d’hyperglycémie et présente des complications diabétiques telles que la rétinopathie, la néphropathie et une altération de la régénération des nageoires. C’est ce qu’on appelle les poissons MS. De plus, si vous le souhaitez, le poisson peut être maintenu dans l’état hyperglycémique avec des injections d’entretien hebdomadaires. Il faut s’attendre à environ 5 % de décès au cours de ce processus.
