Summary
Myofibroblast הוא תא סטרומה השפעה של מערכת העיכול המווסת את התהליכים פיסיולוגיים חשובים במדינות שניהם נורמליות ומחלה. אנו מתארים טכניקה המאפשרת בידוד של myofibroblasts העיקרי משני בעכבר ורקמת מעי גס אנושית, אשר יכול להיות מנוצל לניסויים במבחנה.
Abstract
Myofibroblast הוא תא סטרומה של מערכת העיכול (GI), שכבר צוברת תשומת לב רבה לתפקידה החיוני בפונקציות במערכת העיכול רבות. בעוד כמה שורות תאי myofibroblast זמינות מסחרי ללמוד תאים אלה במבחנה, יש תוצאות מחקר משורת תאים שנחשפה לתנאי תרבית תאים ניסיוניים מגבלות מובנות בשל האופי מדי רדוקציוניסטית של העבודה. שימוש בmyofibroblasts העיקרי מציע יתרון גדול במונחים של מאשר ממצאי ניסוי שזוהו בשורת תאים. בידוד של myofibroblasts העיקרי ממודל חיה מאפשר לחקר myofibroblasts בתנאים המחקים באופן הדוק יותר נחקרים מצב המחלה. בידוד של myofibroblasts העיקרי מרקמות מעי גס אנושיות מספק לטעון את נתוני ניסוי הרלוונטיים ביותר, שכן התאים מגיעים ישירות מחולים עם המחלה הבסיסית. אנו מתארים טכניקה מבוססת היטב כי יכול להיות utilized לבודד myofibroblasts העיקרי משני בעכבר ורקמת מעי גס אנושית. תאים מבודדים אלה מאופיינים להיות אקטין אלפא שריר החלק וvimentin חיובי, וdesmin שלילי, עולה בקנה אחד עם myofibroblasts המעיים subepithelial. ניתן לגדל תאי myofibroblast ראשוניים בתרבית תאים ומשמשים למטרות ניסוי על מספר מצומצם של מעברים.
Introduction
הרגולציה של תפקוד מערכת (GI) במערכת העיכול כוללת אינטראקציות מורכבות, דינמיות בין השכבה הרירית וmesenchyme הבסיסי שלה. אינטראקציות אלה בדרך כלל לשמש כדי לשמור על איזון, אך עשויה גם להוביל להתפתחות של מדינות מחלה בתנאים פתולוגיים 1. Myofibroblasts הוא subpopulation של תאי סטרומה ממוקמים subjacent לשכבת האפיתל המתקשרות באופן אוטוקריני עם סובבי אוכלוסיות תא לווסת את מספר תהליכי מערכת העיכול הקריטיים הכוללים התחדשות רירית, תיקון, וסיסטיק 2.
שורת תאי 18Co היא דוגמא לקו אדם הגס myofibroblast תא שכבר בשימוש נרחב ללמוד לתפקד myofibroblast משום שהיא חולקת רבות ממאפייני העיקריים בmyofibroblasts אתרו. אלה כוללים את ביטוי החלבון של חלק אקטין שריר (α-SMA) וvimentin, כמו גם ביטוי של מספרשל קולטני תא שטח כגון צמיחת אפידרמיס גורם הקולטן, או קולטנים ל3,4 חומצת lysophosphatidic. בגלל מאפיינים אלה משותפים ultrastructural, כמו גם קווי הדמיון בתפקוד ביולוגי 5, שורת תאי 18Co כבר נעשה שימוש נרחב ללמוד לתפקד myofibroblast בהקשר של מדינות מחלה רבות כגון מחלת מעי דלקתית או 3,6 סרטן מעי גס. עם זאת, יש מגבלות וחששות בעת שימוש בקו סלולרי. אלה כוללים חוסר יציבות genotypic לאורך זמן שמבדיל את שורות תאים מהתאים ראשוניים, לשנות את הפנוטיפ ותפקוד ביולוגי של התא, כולל שיעורי צמיחה ואינטראקציות עם אוכלוסיות תאים אחרות. שורות תאים גם חוסר הרכיבים הרגילים של microenvironment GI (אפיתל, סטרומה, ורכיבים של כלי דם), שהיא מגבלה העיקרית לשימוש בו. לכן, המסקנות שהוסקה ממחקר קו הסלולרי ניסיוני דורשת אימות נוספת כדי לצמצם את ריsk של פרשנות שגויה.
ניתן להשיג מרקמות מעי גס אנושיות ועכבר myofibroblasts העיקרי כדי לאשר את ממצאי ניסויים שזוהו בשורת תאי 7. השיטה שתוארה במקור על ידי Mahida, et al. 8, והפרוטוקול שלנו הוא אחת טכניקות רבות תיארו היטב, שניתן להשתמש כדי לבודד myofibroblasts העיקרי מעכבר והמעי גס אנושי 9. לכל מודל של עכברים של מחלה במעי הגס, טכניקה זו יכולה לשמש כדי לבודד myofibroblasts העיקרי כדי ללמוד כיצד הם פועלים עם תאי שכנים או לתרום לשניהם רגילים או במערכת העיכול פתולוגיים מעבדת 10,11. טכניקה זו יכולה לשמש גם כדי ללמוד איך myofibroblasts לתרום לריפוי רירי, סיסטיק, והפיתוח של אדנומות וקרצינומות של מעי גס. יכול גם להיות מושגת myofibroblasts העיקרי מרקמות מעי גס אנושיות שכבר עברו כריתה בזמן מבצע ל( מחלה דלקתית של מעי, מגבלות, דיברטיקוליטיס) שפיר או ממאיר גonditions. תאים ראשוניים מבודדים מרקמת מעי גס אנושית ועכבר ניתן לגדל בתרבית תאים ומנוצלים על מספר מוגבל של מעברים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. השג רקמות מעי גס
עכבר
פרוטוקול לביצוע ניסויים בבעלי חיים, המפרט את הרציונל ומטרות של המחקר, הוגש ואושר על ידי המשרד המוסדי שלנו של בעלי החיים פיקוח מחקר.
- להרדים את העכבר עם isoflurane בשאיפה אחריו נקע בצוואר הרחם.
- ביצוע חתך קו האמצע הגחון, לחזור בו המעי הדק משם ולזהות את המעי הגס. לחזור בו שלפוחית השתן ורחם (אם קיימים) רוחבי ולזהות את עצם הערווה ולחתוך אותו עם מספריים עדינים לחשוף את פי הטבעת.
- לנתח את לפדר הגב של פי הטבעת משל המעי הגס ולגייס את מעי גס מפי הטבעת לcecum, ותחצה אותו לנתק את המעי הגס מהמעי הדק.
- מניחים את הדגימה בופר פוספט קר כקרח (PBS).
- ממלאי מזרק 10 מיליליטר עם PBS קר כקרח ולשטוף את מעי גס לומן מספר פעמים כדי לנקות את התוכן שלה, ולאחר מכן לחתוך את אופ המעי הגסn אורך חכם באמצעות מספריים.
- הנח את המעי הגס בצינור חרוטי 50 מיליליטר מכיל 20 מיליליטר של PBS קר כקרח. המעי הגס אינו חייב להיות ממוקם בכל אורינטציה מסוימת. לשטוף את המעי הגס על ידי החלפת PBS עד שהנוזל הוא ברור ללא חומר חלקיקים.
אנושי
פרוטוקול להשיג רקמה אנושית מחולים כירורגי, המפרט את החשיבות של השגת רקמה זו, כמו גם הערכה של סיכונים ויתרונות פוטנציאליים, הוגש ואושר על ידי המשרד המוסדי תכנית אדם הגנת המחקר.
- שיתוף פעולה מחקרי עם מנתח מעי גס הוא הכרחי כדי להיות מסוגל להשיג רקמה אנושית למחקר שלך. פרוטוקול להשיג רקמת מעי גס אנושית יש להגיש ואושר על ידי דירקטוריון הסקירה המוסדי שלך.
- כתב הסכמה מהדעת מתקבלת מהמטופל לפני ההליך כירורגי.
- המנתח יבצע כריתת מעי גס בדוכןאופנה ארד. ברגע שהמעי הגס הוסר מהמטופל, הדגימה נלקחת מייד לפתולוגיה. 0.5 בסעיף בעובי מלא של קיר מעי גס אין צורך להערכה פתולוגית מסופק וממוקמים באופן מיידי על PBS קר כקרח. דגימה זו לא צריכה לכלול את לפדר המעי הגס, ונספחי חלקי איטום יש להסירם, כמו גם, שכן הנוכחות של שומן תשפיע על תהליך העיכול.
2. לחשוף תאי אפיתל
- דגירה המעי הגס כולו עכבר ב25 מיליליטר של 5 מ"מ EDTA בHBSS (טמפרטורת חדר) בצינור חרוטי 50 מיליליטר. מניחים את צינור חרוטי באמבט 37 מעלות צלזיוס רועדות אוויר (250 סל"ד) במשך 15 דקות. , לאחר 15 דקות יוצקים בזהירות את הנוזל ולמלא את הצינור עם 25 מיליליטר של 5 מ"מ EDTA, חזור עבור סכום כולל של 5 שטיפות. למעי גס אנושי, לאחר קבלת רצועת סנטימטר וחצי מקיר מעי גס מפתולוג לחתוך את המעי הגס במספריים לארבעה חלקים שווים בגודלם. הנח שתי החתיכות לתוך צינור חרוטי 50 מיליליטר אחד, והנח את שתי החתיכות של רקמת מעי גס שנותרו לתוך צינור חרוטי 50 מיליליטר נפרד. ואז דגירה עם 25 מיליליטר של 5 מ"מ EDTA בHBSS ולבצע שטיפות, כפי שתואר לעיל.
- יש לשטוף את מעי גס פעמיים ב20 מיליליטר של PBS קר כקרח.
- הנח את רקמת מעי גס עכבר בצינור חרוטי 50 מיליליטר חדש המכיל 20 מיליליטר של RPMI-5, 10 U של dispase, ו -2,000 U של collagenase D (בטמפרטורת חדר). לרקמת המעי הגס האנושית, השתמש בכמות כפולה של dispase וcollagenase (20 dispase U, 4,000 ד collagenase U).
- מניחים את הצינור באמבטית אוויר 37 C ° רועד בכיוון אנכי (אם בצורה אופקית, יש אוורור יותר מדי ונזק לתאים). לנער ב250 סל"ד עד 60 דקות. לאחר החשיפה לdispase וcollagenase D, רקמת המעי הגס תתחיל לעכל ורקמת המעי הגס תתחיל נראית קשה. זה בדרך כלל לוקח סביב 30 דקות. כאשר המעי יש מראה זה, להסיר את המעי הגס מהאנזימים.
- Shake צינור אחד למעלה ולמטה 2-4 פעמים כדי לשבור את הרקמה. Pellet הרקמה ב XG 200 בצנטריפוגה שולחן (4 מעלות צלזיוס) במשך 5 דקות. יוצק בזהירות את supernatant וזורק.
3. בידוד Myofibroblast ותרבות
- Resuspend כל גלולה על ידי הוספת 10 חיץ מיליליטר ACK תמוגה (47 מעלות צלזיוס). צנטריפוגה שוב XG 200 במשך 5 דקות (4 מעלות צלזיוס), יוצקת את וזורקים supernatant.
- Resuspend כל גלולה על ידי הוספת 10 מיליליטר RPMI-5 עם טפטפת.
- להעביר מחצית מהשעית התא (5 מיליליטר) דרך מסננת רשת 70 מיקרומטר באמצעות פיפטה 10 מיליליטר לתוך צלחת שטופלה TC 100 מ"מ. לאחר מכן להוסיף 15 מיליליטר נוסף של RPMI-5. חזור עם 5 מיליליטר הנותר של השעיה תא לתוך צלחת שטופלה TC 100 מ"מ שונה. מעי גס עכבר אחד ולכן יניבו שתי מנות שטופלה TC 100 מ"מ. רצועה אחת וחצי סנטימטר של רקמת מעי גס אנושית תניב בסך הכל ארבע מנות שטופלה TC 100 מ"מ.
- מניחים את הכלים בתרבית רקמה ב10% CO 2 באינקובטור ב 37 ° C. תנאי התרבות הם אותו Fאו עכבר ותאים ראשוניים של אדם.
- אחרי 3 שעות, לשטוף בעדינות את תאים שאינם חסיד עם שני שינויים של HBSS. צף הפסולת צריך לשטוף בעדינות. תאים חסיד מורכבים של תאים, מקרופאגים וmyofibroblasts אפיתל. שבוע לאחר זריעה, רק myofibroblasts פער, מקרופאגים ותאי האפיתל להזדקן לאחר המעבר הראשון. להוסיף RPMI-5 טריים ולגדל את התאים בתרבית תאים.
- תאי passaged ידי trypsinization למשך 5 דקות ומפוצלות 2:1.
סימני קצור
HBSS: תמיסת מלח מאוזנת של האנק; RPMI-5: תקשורת רוזוול הפארק ממוריאל מכון; ACK: אמוניום כלוריד-אשלגן-; FCS: עגל בסרום עוברי; טופלו TC: תרבית רקמה שטופל
פתרונות
מאגר תמוגה ACK - (4.15 גרם NH 4 Cl, 0.5 גרם KHCO 3, 18.6 מ"ג Na 2 EDTA, 400 מיליליטר H 2 O, כדי להתאים את pH 7.2-7.4 עם 1 N HCl). steriliz סינוןדואר דרך מסנן 0.2 מיקרומטר ולאחסן ב 4 ° C. RPMI-5 - (כדי להפוך 500 מיליליטר: 454.5 מיליליטר RPMI, FCS 25 מיליליטר, 5 מיליליטר 200 L-גלוטמין מ"מ, 5 מיליליטר 1 M HEPES, pH 7.4, 5 מיליליטר 100 פירובט נתרן מ"מ, 5 מיליליטר 100x עט סטרפטוקוקוס, 500 מיליליטר 50 מ"מ B-ME PBS).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ברגע בודד, ניתן לגדל myofibroblasts האנושי הראשוני בתרבית תאים ומשמש על מספר מצומצם של מעברים (עד חלוף 4). תאים אלה מתאפיינים כחלק אקטין שריר וvimentin חיובי, ו( איור 1 א) desmin שלילי, עולים בקנה אחד עם myofibroblasts subepithelial המעיים 5,7. יש להם גם מורפולוגיה stellate אופיינית (איור 1). myofibroblasts העיקרי לאחר מכן ניתן להשתמש כדי לאשר את ממצאי ניסויים שזוהו בשורת תאים. גישה זו נוצלה על מנת להוכיח כי TNF-α הפרו דלקתי ציטוקינים (10 ng / ml) מושרה להגברת הביטוי של ביטוי הקולטן EGF ואיתות בתאים אלה 7. ביטוי הקולטן שהוגברו EGF ואיתות בתחילה מצאו ניצול הקו שהוזכר קודם לכן האדם הגס תא myofibroblast 18Co (איור 2). באיור 2 א, אנו מדגימים כי חשיפה של תאי 18Co לTNF-45; הוביל לעלייה תלוית זמן בביטוי הקולטן EGF. זה מתואם עם ביטוי משופר-Induced EGF COX-2 וזירחון p42/44 MAPK בתאים אלה (איור 2). כדי לאמת את ממצאי ניסויים אלה, ניסויים חוזרים ונשנים באמצעות myofibroblasts האנושי הראשוני בודד מהמעי הגס שעבר כריתה בניתוח של חולים עם סרטן מעי גס. כפי שמוצג באיור 2 ג ו 2 ד, myofibroblasts האנושי הראשוני מקרוב לחקות את הממצאים הניסיוניים בתחילה זיהו בשורת תאי 18Co 7.
איור 1. יכול להיות מבודד myofibroblasts העיקרי מרקמות מעי גס אנושיות 7. תאים ראשוניים מבודדים להפגין פנוטיפ כמו myofibroblast-אשר באופן עקבי-SMA ו( איור 1 א) החיובי vimentin ולהפגין מורפולוגיה stellate ( 
איור 2. ממצאי ניסוי בקו תא תימוכין באמצעות תאי myofibroblast אנושיים ראשוניים 7. שורת תאי myofibroblast האדם הגס 18Co שימש על מנת להוכיח כי TNF-α גורמת להגברת הביטוי של ביטוי הקולטן EGF ואיתות בתאים אלה (איור 2 א). גברת ביטוי זה ביטוי הקולטן EGF היה קשור עם איתות קולטן EGF משופרת, שמוצגת באיור 2 ב ', שבו חשיפה לאחר EGF הובילה לזירחון המשופר p42/44 MAPK ו-COX-2 ביטוי. השפעות אלה עכבות לחלוטין עם מעכבי הקולטן EGF AG1478. myofibroblasts האנושי הראשוני בודד מהמעי הגס שעבר כריתה בניתוח של חולים עם סרטן מעי גס לאשר את ממצאי ניסויים אלה (2C דמויותו2 ד). נמק גידול גורם אלפא = TNF-α, EGFR = קולטן EGF, AG = AG1478, COX-2 = סקל oxygenase-2. לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה. 
איור 3. יכול להיות מבודד myofibroblasts העיקרי מרקמות מעי גס בעכבר. נוף 10X של תאי myofibroblast עכבר עיקריים. לחץ כאן כדי להציג דמות גדולה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הטכניקה הכללית היא דומה בעת שימוש או עכבר או מעי גס אנושי. גם טכניקה זו יכולה לשמש כדי לבודד myofibroblasts מהמעי הדק. פרטים ספציפיים עבור הבידוד של myofibroblasts מ1. עכבר ו2. מעי גס אנושי הם דנו בהמשך.
1. קולון מאוס
השקיה של מעי גס העכבר היא הקל על ידי הצמדת 4 ב, מחט בוטה סוף 16 G פופר לקצה אחד של המעי הגס. זה גם עוזר בעת חיתוך המעי הגס לאורכו. אתה יכול אקורדיון רקמת המעי הגס על גבי המחט, ואז למקם את קצה אחד של המספריים עם סופו של דבר חד והחלק את רקמת המעי הגס מעבר לקצה המספריים תוך חיתוך כדי לפתוח אותו לאורכו.
בשלב 2.1, חשוב להבין כי חומר גרעיני מהתאים מתים יכול להוביל להתקבצות תא. התוספת של DNase (50 מ"ג / מיליליטר) ניתן להשתמש כדי לטפל בבעיה זו.
השלב הקריטי ביותר הוא שלב 2.4. שמור caשעון Reful של רקמת המעי הגס. כאשר המעי מתחיל להיראות סיבי, הסרת המעי הגס מהאנזימים. אתה לא צריך כדי לדגור המעי הגס לדק '60 כולו. אם רקמת המעי הגס חשופה לdispase וcollagenase D במשך זמן רב מדי, התאים ימותו. זוהי טעות נפוצה שתגרום לתשואת תא נמוכה.
זיהום של התאים הוא עוד בעיה נפוצה. טכניקה זהירה, שטיפה מתאימה וסינון תהיה למזער את הסיכון של זיהום, יחד עם טכניקות סטרילית סטנדרטיות המשמשות לעבודת תרבית תאים.
2. קולון אדם
משך זמן דגירה עם האנזימים תלויים בגודל של הדגימה כי הוא מתעכל. אנחנו בדרך כלל מקבלים פס בעובי מלא אינץ וחצי מקיר מעי גס אנושי. יש שינוי בשלב 2.3 כאשר בידוד myofibroblasts מרקמות מעי גס אנושיות. לצעד 2.3, למעי גס אנושי אתה חייב להכפיל את כמות dispase (20 U) ושיתוף D llagenase (4,000 U) בשימוש. קטע גדול עוד יותר של מעי גס ידרוש זמן דגירה ארוך יותר. כמו כן, יש לזכור כי הפעילות הספציפית של האנזימים עשויה להשתנות עם הרבה, ולכן ייתכן שיהיה הצורך להתאים את זמן הדגירה בהתאם.
עבור שניהם עכבר עיקרי וmyofibroblasts האנושי, 0nce גדל בתרבות, יש להעריך תאים המבודדים כדי להעריך לטוהר של התאים וכדי לאשר כי התאים הם כמו myofibroblast. ניתן לעשות זאת עם מגוון רחב של טכניקה כולל מכתים immunohistochemical (נוגדנים לmyofibroblast סמנים כוללים חלק אקטין שריר וvimentin; נוגדנים חד שבטיים לCD68 הוא ספציפית למקרופאגים, CD31 הוא ספציפי לתאי אנדותל, וCD45 הוא ספציפי לתאים של מערכת חיסון; נוגדנים לדואר cadherin וcytokeratins השונים הם ספציפיים לתאי האפיתל. ביטוי mRNA גם ניתן להעריך על ידי RT-PCR 12. cytometry זרימה יכולה לשמש גם לתא ניתוח 13.
> ניתן ללמוד myofibroblasts הראשי, הוקפא בחנקן נוזלי לשימוש הבא במועד מאוחר יותר, או ששמש לניסויים במבחנה ותרבות משותף. יכולים גם להיות מושתלים תאים ראשוניים לתוך הרקמה תת עורית של עכברים כדי לחקור אינטראקציות תאי תאים 14. יישומים עתידיים עשויים להיות כרוכים מחדש השתלה של myofibroblasts העיקרי לקיר המעי הגס של עכבר syngeneic ניצול קולונוסקופיה העכבר הבא מניפולציה גנטית.
מספר השיטות חלופיות לבודד myofibroblasts העיקרי מאדם ומעי גס עכבר גם תוארו. שתי מפורטים להלן:
- Mahida, et al. Am. J. Physiol. 273 G1341-1348, (1997).
- דה Wever, et al. Int. J. Oncol. 39, 393-400, (2011).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
יש מחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לבריאות גרנט 5KO8DK085136-02 לJY.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Dispase I | Invitrogen/GIBCO | #17105-041 | |
| Collagenase D | Roche | #1 088 858 | |
| 4 in, 16 G Popper blunt-end needle | Fisher | #14-825-16K |
References
- Armaka, M., et al. Mesenchymal cell targeting by TNF as a common pathogenic principle in chronic inflammatory joint and intestinal diseases. J. Exp. Med. 205, 331-337 (2008).
- Powell, D. W., et al. Paracrine cells important in health and disease. Am. J. Physiol. 277, C1-C9 (1999).
- Yoo, J., Rodriguez Perez, C. E., Nie, W., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E. Protein kinase D1 mediates synergistic MMP-3 expression induced by TNF-alpha and bradykinin in human colonic myofibroblasts. Biochem. Biophys. Res. Commun. 413, 30-35 (2011).
- Yoo, J., Chung, C., Slice, L., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E. Protein kinase D mediates synergistic expression of COX-2 induced by TNF-{alpha} and bradykinin in human colonic myofibroblasts. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 297, C1576-C1587 (2009).
- Valentich, J. D., Popov, V., Saada, J. I., Powell, D. W. Phenotypic characterization of an intestinal subepithelial myofibroblast cell line. Am. J. Physiol. 272, C1513-C1524 (1997).
- Rodriguez Perez, C. E., Nie, W., Sinnett-Smith, J., Rozengurt, E., Yoo, J. TNF-alpha potentiates lysophosphatidic acid-induced COX-2 expression via PKD in human colonic myofibroblasts. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 300, G637-G646 (2011).
- Yoo, J., et al. TNF-alpha induces upregulation of EGFR expression and signaling in human colonic myofibroblasts. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 302, G805-G814 (2012).
- Mahida, Y. R., et al. Adult human colonic subepithelial myofibroblasts express extracellular matrix proteins and cyclooxygenase-1 and -2. Am. J. Physiol. 273, G1341-G1348 (1997).
- De Wever, O., et al. Priming and potentiation of DNA damage response by fibronectin in human colon cancer cells and tumor-derived myofibroblasts. Int. J. Oncol. 39, 393-400 (2011).
- Edwards, R. A., Smock, A. Z. Defective arachidonate release and PGE2 production in Gi alpha2-deficient intestinal and colonic subepithelial myofibroblasts. Inflamm. Bowel Dis. 12, 153-165 (2006).
- Hoang, B., Trinh, A., Birnbaumer, L., Edwards, R. A. Decreased MAPK- and PGE2-dependent IL-11 production in Gialpha2-/- colonic myofibroblasts. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 292, G1511-G1519 (2007).
- Li, Z. B., Kollias, H. D., Wagner, K. R. Myostatin directly regulates skeletal muscle fibrosis. J. Biol. Chem. 283, 19371-19378 (2008).
- Saada, J. I., et al. Subepithelial myofibroblasts are novel nonprofessional APCs in the human colonic mucosa. J. Immunol. 177, 5968-5979 (2006).
- Lahar, N., et al. Intestinal subepithelial myofibroblasts support in vitro and in vivo growth of human small intestinal epithelium. PLoS One. 6, e26898 (2011).
