Summary
हम यहां मानव मिरगी cortical ऊतक की बहु इलेक्ट्रोड सरणी रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए क्या करते हैं. Interictal और ictal घटनाओं की मिरगी ऊतक लकीर, टुकड़ा तैयारी और बहु इलेक्ट्रोड सरणी रिकॉर्डिंग विस्तार से प्रदर्शन कर रहे हैं.
Abstract
मिरगी, जनसंख्या का लगभग 1% को प्रभावित करने, सामान्य मस्तिष्क समारोह को बाधित जो बरामदगी की आवधिक घटना के द्वारा होती मस्तिष्क संबंधी विकार, का एक समूह शामिल हैं. वर्तमान में उपलब्ध antiepileptic दवाओं न्यूरोनल कार्यों को लक्षित साथ उपचार के बावजूद, मिर्गी के रोगियों के एक तिहाई pharmacoresistant हैं. इस हालत में, बरामदगी पैदा मस्तिष्क क्षेत्र की शल्य लकीर ही वैकल्पिक उपचार बनी हुई है. मानव मिरगी के ऊतकों का अध्ययन कर पिछले 10 वर्षों के दौरान नई मिगी उत्पन्न करने वाला तंत्र को समझने के लिए योगदान दिया है. दरअसल, इन ऊतकों सहज interictal मिरगी निर्वहन के साथ ही शास्त्रीय इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी तकनीक के साथ दर्ज किया जा सकता है जो औषधीय प्रेरित ictal घटनाओं उत्पन्न करते हैं. उल्लेखनीय है, स्थानिक व्यवस्था की microelectrodes की एक सरणी एम्बेड microfabricated उपकरणों रहे हैं जो बहु इलेक्ट्रोड सरणियों (meas),, एक साथ प्रोत्साहित करने के लिए अद्वितीय अवसर और रिकॉर्ड क्षेत्र pote प्रदानntials, साथ ही ऊतक के विभिन्न क्षेत्रों से कई न्यूरॉन्स की कार्रवाई क्षमता. इस प्रकार meas रिकॉर्डिंग सहज interictal के स्थानिक-सामयिक पैटर्न और पैदा की जब्ती जैसी घटनाओं और जब्ती शुरुआत और प्रचार अंतर्निहित तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट दृष्टिकोण प्रदान करते हैं. यहाँ हम शल्य चिकित्सा resected ऊतक से मानव कॉर्टिकल स्लाइस तैयार करने के लिए और meas interictal और ictal-तरह की घटनाओं के पूर्व vivo साथ रिकॉर्ड करने के लिए क्या करते हैं.
Introduction
मिरगी मिसे के दसियों स्थायी तुल्यकालिक न्यूरोनल निर्वहन की उपस्थिति द्वारा विशेषता नैदानिक अभिव्यक्तियाँ के साथ जुड़े electroencephalographic (ईईजी) रिकॉर्डिंग पर सेकंड के दसियों के लिए कई सेकंड तक चलने वाले रुक-रुक कर नमूनों निर्वहन कर रहे हैं जो मिरगी दौरे, एक interictal राज्य में व्यवधान डाला जिसमें एक पुरानी बीमारी है, और interictal घटनाओं 1 कहा जाता है. यह लगभग 1% विश्व की जनसंख्या को प्रभावित करता है और दौरे के रोगियों के बहुमत में नियंत्रित कर रहे हैं, हालांकि, मिर्गी के साथ लोगों की लगभग एक तिहाई antiepileptic दवाओं 2 के लिए पर्याप्त प्रतिक्रिया नहीं दिखाते. इस हालत में, जिसका तंत्र अभी भी स्पष्ट रूप से पहचाना जा करने के लिए है pharmacoresistant मिर्गी और, जब्ती शुरुआत जोन के रूप में पहचान मस्तिष्क के विशिष्ट हिस्से के शल्य लकीर रोगियों के लिए एक सकारात्मक परिणाम दे ही वैकल्पिक उपचार रहता बुलाया. इस प्रकार, सर्जरी से resected नमूनों oppor उपजtunity पूर्व vivo व्यवहार्य मानव केंद्रीय तंत्रिका ऊतक पर interictal निर्वहन और जब्ती पीढ़ी और प्रचार का तंत्र है, साथ ही pharmacoresistance अध्ययन करने के लिए.
स्थानिक वितरित microelectrodes की एक व्यवस्था से मिलकर मल्टी इलेक्ट्रोड सरणियों (meas), सहज और पैदा गतिविधि के स्थानिक-सामयिक पैटर्न का अध्ययन करने के लिए इस प्रकार एक उत्कृष्ट दृष्टिकोण प्रदान करने, ऊतक के कई साइटों से electrophysiological गतिविधि के साथ उत्तेजना और रिकॉर्डिंग की अनुमति . इस तकनीक को पहले neuronal सेल संस्कृति गतिविधि 3 की विकासात्मक परिवर्तन की निगरानी करने के लिए आवेदन किया है और फिर तीव्र और organotypic मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी स्लाइस 4 के लिए अनुकूलित - 6, वर्तमान में एक मूल्यवान electrophysiological उपकरण माना जाता है.
मौजूदा प्रोटोकॉल शल्य चिकित्सा resected ऊतक से मानव कॉर्टिकल स्लाइस तैयार करने के लिए और meas विश्वसनीय पूर्व छठी के साथ रिकॉर्ड बताता है कि कैसेVO interictal और इन स्लाइस से जब्ती-तरह की घटनाओं. इस तकनीक को इस प्रकार मिरगी गतिविधियों दीक्षा, प्रचार और दोनों सेलुलर और नेटवर्क के स्तर पर antiepileptic दवाओं के प्रभाव अंतर्निहित बुनियादी तंत्र को संबोधित करने के लिए एक तरीका प्रदान करता है. मानव स्लाइस, प्राप्त तैयार, को बनाए रखने और रिकॉर्ड करने के लिए प्रयोग किया जाता है सभी प्रक्रियाओं यहाँ विस्तार से वर्णन किया गया हैं.
Protocol
नोट: यहां वर्णित प्रोटोकॉल फ्रेंच "Comité Consultatif नेशनल डी 'Ethique" के दिशा निर्देशों के बाद और INSERM द्वारा एक संग्रह गतिविधि के रूप में घोषित किया है.
मानव मिरगी ऊतक 1. लकीर
- मरीजों को
- असभ्य मिर्गी से पीड़ित रोगियों से मस्तिष्क के ऊतकों प्राप्त करते हैं. सर्जरी से पहले एक प्रश्न के लिखित सूचित सहमति प्राप्त.
- सभी के लिए मिरगी रोगियों स्नायविक परीक्षा, neuropsychological मूल्यांकन, सतह ईईजी, और न्यूरोइमेजिंग सहित एक व्यापक presurgical workup प्रदर्शन संचालित; resected ऊतक की शल्य चिकित्सा के बाद ऊतकीय परीक्षा द्वारा पीछा (एमआरआई और कभी कभी 18 FDG- पीईटी स्कैन चित्रा 1 ए), (चित्रा 1 बी) . नोट: विविध अन्वेषणों इसी प्रकार जब्ती शुरुआत जोन और जब इसकी हटाने का लाभ शल्य जोखिम से अधिक स्थानीय बनाना जब सर्जरी संकेत दिया है.
- शल्य-चिकित्सा
- माईntain antiepileptic दवाओं पूर्व ऑपरेशन. सामान्य संज्ञाहरण के तहत सर्जरी प्रदर्शन: प्रेरण इंट्रा शिरापरक sufentanyl साथ रखरखाव द्वारा पीछा साँस sevoflurane (6% दिया अनुपात और ओ 2 की 100% साँस अंश), इंट्रा शिरापरक sufentanyl (0.3 माइक्रोग्राम प्रति / किग्रा) और antracurium (0.5 मिलीग्राम / किग्रा), के साथ (0.5 माइक्रोग्राम प्रति किग्रा / / घंटा) और साँस sevoflurane (1 मैक).
- Lesioned कोर्टेक्स (चित्रा 1C) के एक सटीक स्थानीयकरण अनुमति देने के लिए एक neuronavigation प्रणाली का प्रयोग करें. त्वचा चीरा के बाद, एक उच्च फैल ड्रिल के साथ एक craniotomy द्वारा पीछा हड्डी में एक गड़गड़ाहट छेद करते हैं. धीरे हड्डी फ्लैप तरक्की, और कैंची (चित्रा -1) के साथ ड्यूरा खुला.
- ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप के तहत असामान्य कॉर्टेक्स की पहचान, और microsurgical उपकरणों और एक अल्ट्रासोनिक चूषित्र की सुविधा के लिए इंट्रा-ऑपरेटिव अल्ट्रा साउंड का प्रयोग करें.
- जमना और sulcal सीमा के अनुसार पीआईओ-arachnoidal विमान काटा. अनुसंधान के लिए subpial विच्छेदन का प्रयोग करेंelease lesioned आसपास के क्षेत्र पिया से कॉर्टेक्स.
- वाहिका संरचना जितना संभव बख्शते, लकीर "सामूहिक" एक टुकड़ा प्रदर्शन करने के लिए असामान्य कॉर्टेक्स के तहत सफेद पदार्थ काटें. कॉर्टेक्स की दर्दनाक हेरफेर से बचें.
- परिखा नीचे और संक्रमणकालीन कॉर्टेक्स सहित pial सतह को एक दिशा ओर्थोगोनल साथ resected ऊतक के बाहर एक 1 सेमी मोटी स्लाइस काट लें.
2. कृत्रिम मस्तिष्कमेरु द्रव टुकड़ा तैयारी, ऊष्मायन और रिकॉर्डिंग के लिए (ACSF)
- टुकड़ा तैयारी के लिए ACSF
- (मिमी में) युक्त, सूक्रोज आधारित ACSF 7,8 के 1 एल तैयार: 250 सूक्रोज, 3 KCl, 25 3 NaHCO, 10 ग्लूकोज़, 1 2 CaCl, 10 2 MgCl; विआयनीकृत पानी में इन लवण भंग करने और कम से कम 10 मिनट के लिए carbogen साथ समाधान आक्सीजन के साथ मिलना.
- 50-60 मिनट (या 15-20 मिनट के लिए -150 डिग्री सेल्सियस) के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर सुक्रोज ACSF की ~ 700 मिलीलीटर रखो. के बाकी रखेंबर्फ में ऑक्सीजन के तहत समाधान. नोट: टुकड़ा तैयारी के लिए ACSF 4 डिग्री सेल्सियस पर भंडारित किया जा सकता है; इस मामले में, यह ठंडा होने से पहले, प्रयोग के दिन 2 CaCl और 2 MgCl जोड़ें.
- टुकड़ा ऊष्मायन और रिकॉर्डिंग के लिए ACSF
- (मिमी में) युक्त, रिकॉर्डिंग ACSF 7,8 के कम से कम 3 एल तैयार: 124 NaCl, 3 NaHCO 3 KCl, 26, 10 ग्लूकोज़, 1.6 2 CaCl, 1.3 2 MgCl; विआयनीकृत पानी में इन लवण भंग करने और carbogen साथ समाधान आक्सीजन के साथ मिलना. 2 MgCl जोड़ने से पहले, 0 2 मिलीग्राम + aCSF में रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए कुछ ACSF रखना. नोट: ऊष्मायन / रिकॉर्डिंग ACSF 4 डिग्री सेल्सियस पर भंडारित किया जा सकता है; इस मामले में, 2 CaCl और 2 MgCl प्रयोग के दिन जोड़ने.
स्लाइस ऊष्मायन और रिकॉर्डिंग के लिए 3. उपकरण
- टुकड़ा ऊष्मायन के लिए इंटरफ़ेस कक्ष
- स्लाइस पूर्व vivo रह बनाए रखने के लिए एक मस्तिष्क टुकड़ा चैम्बर का प्रयोग करें </ इंटरफ़ेस मोड में उन्हें>. नोट: चैम्बर स्लाइस फ्लैट क्षेत्र में लेंस ऊतक के एक पत्रक में पर आराम जहां हीटिंग और सेंसर तत्वों और एक चीनी मिट्टी bubbler होता है और आसुत जल से भर जाता है जो एक निचले खंड, और एक ऊपरी हिस्सा, से बना है चैंबर के केंद्र (चित्रा 2A - बी).
- Preoxygenated ACSF के कक्ष में प्रवेश करती है, जिसके माध्यम से दो अलग ठीक से PTFE ट्यूब, का प्रयोग करें. नोट: ट्यूब गर्म पानी में सर्पिल और कक्ष के ऊपरी हिस्से तक पहुंच; तो समाधान बाहर निकलने के कुओं में समाधान बता देते हैं कि लेंस ऊतक, साथ केशिका क्रिया के माध्यम से बाहर निकलता है.
- Preoxygenated माध्यम के साथ स्लाइस की निरंतर छिड़काव अनुमति देने के लिए, एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप करने के लिए इंटरफ़ेस चैम्बर के PTFE ट्यूब कनेक्ट करें.
- चीनी मिट्टी bubbler के माध्यम से carbogen (95% 2 हे और 5% सीओ 2) के साथ oxygenating द्वारा उच्च ऑक्सीजन तनाव बनाए रखें. नोट: यह गर्म और सिक्त गैस मिश्रण पहुँचताउचित छेद के माध्यम से कक्ष के ऊपरी भाग में स्लाइस.
- चैम्बर हीटिंग तत्व के लिए एक कनेक्टर और एक छोर पर एक बाहरी तापमान संवेदक होने, एक विशेष डबल समाप्त केबल के माध्यम से, एक तापमान नियंत्रक कक्ष को जोड़ने के द्वारा चैंबर के ऊपरी हिस्से में तापमान बनाए. ऊष्मायन (चित्रा -2) के दौरान तापमान की जाँच करने के स्लाइस के पास सेंसर रखें.
- मल्टी इलेक्ट्रोड सरणी रिकॉर्डिंग
- 200 माइक्रोन केंद्र के लिए केंद्र अंतर के साथ एक 12 एक्स 12 मैट्रिक्स में व्यवस्था की सिलिकॉन नाइट्राइड और आंतरिक संदर्भ इलेक्ट्रोड से अछूता 120 टाइटेनियम नाइट्राइड इलेक्ट्रोड (30 माइक्रोन व्यास), के साथ तलीय बहु इलेक्ट्रोड सरणियों का प्रयोग करें. नोट: विभिन्न इलेक्ट्रोड व्यास और अंतर के साथ अन्य विन्यास संभव हो रहे हैं. विशेष रूप से, विदेश मंत्रालय चिप मानव ऊतकों के बड़े स्लाइस नमूने को चौड़ा किया जा सकता.
- (पूर्व और फाई एक MEA2100-120 प्रणाली का उपयोग करते हुए 10 kHz पर विद्युत संकेतों मोलएक समर्पित सॉफ्टवेयर (MC_Rack) के माध्यम से एकीकृत डाटा अधिग्रहण और एनालॉग से डिजिटल कनवर्टर, 16 बिट डेटा संकल्प, इनपुट वोल्टेज रेंज और बैंडविड्थ सॉफ्टवेयर के माध्यम से समायोज्य) के साथ lter एम्पलीफायर. नोट: MEA2100 headstage लगातार रिकॉर्डिंग सत्र के दौरान स्लाइस छिड़कना के लिए, चुंबकीय धारकों के माध्यम से heatable छिड़काव तत्व की फिक्सिंग के लिए एक धातु की थाली से संपन्न होता है.
- टुकड़ा और इलेक्ट्रोड के बीच एक अच्छा बिजली के युग्मन जो यह सुनिश्चित करता एक छोटे से घर का बना प्लैटिनम लंगर ने विदेश मंत्रालय पर ऊतक को दबाए रखें.
4. इंटरफ़ेस चैंबर की तैयारी और विच्छेदन और टुकड़ा करने की क्रिया के लिए उपकरण
- इंटरफ़ेस कक्ष
- आसुत जल के साथ इंटरफेस कक्ष के निचले खंड भरें. पानी का स्तर पूरी तरह से हीटिंग तत्व immerses और चैंबर के निचले और ऊपरी खंड के बीच जंक्शन नीचे 2 से 4 मिमी है कि सुनिश्चित करें. दैनिक हीटिंग पर स्विच करने से पहले इस स्तर की जाँच करें,आदेश में हीटिंग तत्व के नुकसान से बचने के लिए.
- गैस के दबाव के ठीक समायोजन के लिए एक माध्यमिक प्रवाह नियामक के साथ संपन्न एक carbogen स्रोत, के लिए कक्ष कनेक्ट करें.
- टुकड़ा चैम्बर के फ्लैट क्षेत्र को फिट करने के क्रम में लेंस ऊतक के एक पत्रक कट, और स्लाइस तक पहुँचने से पहले इनपुट लाइन से किसी भी बुलबुले बच जाने के लिए, इनपुट समाधान ट्यूबों के करीब यह स्थिति.
- लेंस ऊतक के टुकड़े के रूप में लंबे समय असहाय सूती धागे के दो टुकड़े काटें, और चैंबर के फ्लैट क्षेत्र की मुख्य पक्षों के साथ उन्हें स्थिति. नोट: यह थोड़ा कक्ष में छिड़काव समाधान के स्तर को बढ़ाने में मदद करता है.
- 1 मिलीग्राम / मिनट पर क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप के प्रवाह की दर निर्धारित और पंप को सक्रिय करें.
- चैम्बर के नीचे हिस्से में पानी की oxygenation शुरू करो.
- 37 डिग्री सेल्सियस तापमान नियंत्रक का तापमान सेट और यह मोड़ पर. Parafilm का एक टुकड़ा के साथ इंटरफेस कक्ष के ऊपरी हिस्से को कवर और temperat के लिए कम से कम 30 मिनट इंतजारure बढ़ाने के लिए और स्थिर करने के लिए.
- विच्छेदन और टुकड़ा करने की क्रिया के लिए उपकरण
- दो ठीक संदंश, एक रंग, एक छोटा चम्मच और एक ब्लेड से मिलकर एक विच्छेदन किट तैयार करें; दो गिलास पेट्री डिश, दो ब्रश के साथ-साथ cyanoacrylate गोंद.
- Vibratome के मापदंडों सेट: मोटाई, 400 माइक्रोन; आवृत्ति, 70-90 हर्ट्ज; आयाम, 0.9-1 मिमी, गति: 0.1 मिमी / सेक.
5. मानव Cortical टुकड़ा तैयारी
- -80 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर से सूक्रोज आधारित ACSF निकालें और कीचड़ का एक तरह से प्राप्त करने के क्रम में यह मिश्रण. अस्पताल के सर्जरी कमरे में जा रही ऊतक प्राप्त करने के लिए, जबकि एक कांच की बोतल में ~ 250 मिलीलीटर डाला और बर्फ से भरा एक देवर बोतल में रख, carbogen साथ यह आक्सीजन. इस बीच, -20 डिग्री सेल्सियस पर बाकी रखना.
नोट: सर्जरी के दौरान, न्यूरोसर्जन cortical ऊतक का एक छोटा सा ब्लॉक dissects. इसके तत्काल बाद प्रयोगशाला को हस्तांतरण के लिए ठंडा सूक्रोज aCSF में नमूना जगह है. - 30 मिनट की एक अधिकतम करने के लिए प्रयोगशाला को अस्पताल से स्थानांतरण के लिए आवश्यक समय रखें. प्रयोगशाला में, एक कीचड़ है करने के लिए यह मिश्रण, -20 डिग्री सेल्सियस फ्रीजर के बाहर सूक्रोज आधारित ऑक्सीजन ACSF ले एक पेट्री डिश और vibratome बफर ट्रे भरने और carbogen साथ दोनों oxygenating शुरू करते हैं. ध्यान से एक चम्मच के साथ बोतल से मानव ऊतक का टुकड़ा बाहर ले और पेट्री डिश (चित्रा 2 डी) में डाल दिया.
- संदंश का प्रयोग, ध्यान से टुकड़ा करने की क्रिया के दौरान प्रतिरोध से बचने के लिए रक्त के थक्के, जहाजों और तानिका हटा दें. Cortical सतह को नुकसान नहीं ध्यान दे, ऊतक ब्लॉक की तरफ से शुरू, पिया-बात में मिलकर, तानिका निकालें. एक ब्लेड के साथ, vibratome नमूना थाली पर चिपका दिया जाएगा जो एक फ्लैट सतह प्राप्त करने के लिए ऊतक, के पक्ष में कटौती. नोट: पिया-बात में मिलकर तानिका, cortical सतह को नुकसान नहीं ध्यान दे, ऊतक ब्लॉक की तरफ से शुरू कर हटा रहे हैं.
- यदि तिवारी के ब्लॉकssue विदेश मंत्रालय के कक्ष से भी बड़ा है, नमूना प्लेट (चित्रा 2 ई) पर यह gluing से पहले उचित आयाम का एक टुकड़ा काट.
- , अनुप्रस्थ कॉर्टिकल स्लाइस प्राप्त करने के लिए ऊतक गोंद बफर ट्रे में डाल दिया और कम गति (0.1 मिमी / सेक) (चित्रा 2 एफ) में 400 माइक्रोन मोटी स्लाइस काट लें.
- टुकड़ा आयामों के साथ लेंस ऊतक के टुकड़े काट; एक रंग और एक ब्रश के साथ, इन लेंस ऊतकों पर स्लाइस हस्तांतरण और रिकॉर्डिंग (चित्रा 2 जी - मैं) शुरू करने से पहले कम से कम 1 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इंटरफेस कक्ष में उन्हें सेते हैं. लगातार उपयोग करें जब तक एक ही स्थिति में स्लाइस की दुकान. नोट: लेंस कागज पर स्लाइस रखकर स्लाइस के नीचे की ओर का छिड़काव और रिकॉर्डिंग से पहले इंटरफ़ेस कक्ष से स्लाइस को हटाने दोनों की सुविधा के लिए एक महत्वपूर्ण कदम है.
- लेंस ऊतक पर स्लाइस स्थानांतरित करते हैं, साथ cortical परत क्षेत्र को छूने के लिए परहेज, बहुत ध्यान से उन्हें प्रबंधितब्रश.
- एक समय में स्लाइस एक तैयार है और तुरंत उचित ऑक्सीजन की आपूर्ति और तापमान सुनिश्चित करने के क्रम में, इंटरफ़ेस चैम्बर के लिए उनमें से प्रत्येक हस्तांतरण; जितना ज्यादा हो सके resected ऊतक के ब्लॉक टुकड़ा.
रिकॉर्डिंग के लिए विदेश मंत्रालय के सेटअप के 6. तैयारी
- एक कंप्यूटर के लिए एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप और विदेश मंत्रालय प्रणाली के लिए छिड़काव प्रणाली प्लग. रिकॉर्डिंग ACSF आक्सीजन के साथ मिलना. एम्पलीफायर के अंदर एक खाली विदेश मंत्रालय चिप रखें.
- हीटिंग प्रवेशनी तत्व विदेश मंत्रालय के कक्ष में 37 डिग्री सेल्सियस तक पहुंचने और 5-6 मिलीग्राम / मिनट पर छिड़काव शुरू करने के लिए तापमान नियंत्रक सेट करें. नोट: यह तापमान सेट करने के लिए आम तौर पर आवश्यक है 3-4 डिग्री सेल्सियस कमरे के तापमान और प्रवाह की दर पर निर्भर करता है, वांछित एक से अधिक है.
- इलेक्ट्रोड क्षेत्र को छूने के बिना, यह केंद्र के लिए संभव सबसे करीब रखने, ठीक एक थर्मामीटर के साथ विदेश मंत्रालय के कक्ष में तापमान की जाँच करें.
- Softwar रिकॉर्डिंग शुरूई और सब विदेश मंत्रालय इलेक्ट्रोड अच्छी तरह से जुड़े हुए हैं कि जाँच और छिड़काव के कारण कोई शोर नहीं है.
- कैमरा तालिका के कामकाज की जांच करने के लिए MEA_Monitor शुरू करो.
रिकॉर्डिंग के लिए विदेश मंत्रालय चिप के लिए इंटरफ़ेस कक्ष से एक टुकड़ा 7. स्थानांतरण
- कुछ एक गिलास पेट्री डिश में ACSF रिकॉर्डिंग गरम डालो; एक संदंश के साथ, लेंस के ऊतकों के माध्यम से इसे हथियाने के द्वारा, इंटरफ़ेस कक्ष से एक टुकड़ा ले, और पेट्री डिश में डाल दिया. ध्यान से ऊतक से टुकड़ा अलग. इंटरफ़ेस कक्ष में समाधान के स्तर को ध्यान से ऊष्मायन समय के दौरान निकाला जाता है, तो टुकड़ा एकमात्र समाधान में यह जलमग्न द्वारा लेंस ऊतक से अलग होगा; अन्यथा, सेना की टुकड़ी की सुविधा के लिए एक छोटा सा ब्रश का उपयोग करें.
- कुछ ACSF के साथ एक विदेश मंत्रालय चिप भरें और एक रंग के साथ, इसे में टुकड़ा हस्तांतरण. एक प्लास्टिक पाश्चर विंदुक के साथ, धीरे टुकड़ा इलेक्ट्रोड क्षेत्र पर पालन करने के लिए और एक प्लैटिनम anch साथ जगह में रखने के लिए समाधान निकालनेया. रिकॉर्डिंग ACSF के 1 मिलीलीटर जोड़ें एम्पलीफायर में विदेश मंत्रालय चिप डाल दिया और 5-6 मिलीग्राम / मिनट पर छिड़काव शुरू (चित्रा 2J - एल).
- , MEA_Monitor का उपयोग करके विदेश मंत्रालय रिकॉर्डिंग क्षेत्र पर टुकड़ा स्थिति की जांच आवश्यक हो तो cortical परतों से रिकॉर्ड और एक तस्वीर लेने के क्रम में इसे समायोजित. रिकॉर्डिंग प्रारंभ करें.
Representative Results
(पहले वर्णित) सामान्य रिकॉर्डिंग ACSF के साथ ऊतक 7,8 perfusing जबकि मानव कॉर्टिकल टुकड़ा गतिविधि की रिकॉर्डिंग शुरू होता है. ऊतक अच्छी तरह से अस्पताल और टुकड़ा तैयारी से ऊतक स्थानांतरण के दौरान बाद में सर्जरी के दौरान संरक्षित है और जब इस हालत में, एक विदेश मंत्रालय इलेक्ट्रोड के छोटे समूहों से पता चला छोटे interictal-तरह की घटनाओं के रूप में, सहज गतिविधि का निरीक्षण कर सकते हैं. Interictal तरह निर्वहन मिसे के कई दसियों तक चलने वाले एक लंबी विपरीत लहर द्वारा पीछा microvolts के दसियों, तक पहुँचने, एक प्रारंभिक तेज नकारात्मक विक्षेपन, जिसमें एक क्षेत्र क्षमता, आमतौर पर Biphasic में शामिल थे. फास्ट बहु इकाई गतिविधियों आमतौर पर मुख्य रूप से प्रारंभिक भाग में क्षेत्र की क्षमता में एम्बेडेड रहे हैं. Interictal-तरह की गतिविधि का एक प्रतिनिधि उदाहरण एक विदेश मंत्रालय इलेक्ट्रोड द्वारा दर्ज ट्रेस दिखाया गया है जहां चित्रा 3Aii, में सचित्र है.
में से मिरगी दौरे रिकॉर्ड करने के लिएमानव कॉर्टिकल स्लाइस इन विट्रो, यह एक "मिगी उत्पन्न करने वाला" ACSF के साथ उन्हें छिड़कना करने के लिए आवश्यक है, जिसमें 2 मिलीग्राम + अनुपस्थित है और कश्मीर + ऊतक excitability के 1 (+ K 3-6 मिमी की वृद्धि को बढ़ावा देने के लिए, 6 मिमी के लिए उठाया है अकेले बरामदगी प्रेरित करने के लिए पर्याप्त नहीं है, नहीं दिखाया डेटा). 0 मिलीग्राम 2 + 6 मिमी + K ACSF के साथ छिड़काव शुरू कर दिया है एक बार, 5 रोगियों से, cortical स्लाइस की गतिविधियाँ धीरे-धीरे बढ़ता है और पहली जब्ती 20 मिनट (15.4 ± 1.7 मिनट 15 भीतर प्रकट होता है, N = 10; चित्रा 3 ऐ ). जांच की रोगियों के 75% में और सभी रिकॉर्ड स्लाइस की 66.7% में, 3 चित्र में दिखाया के रूप में हम ictal-तरह की गतिविधि पैदा की.
मिरगी गतिविधियों विदेश मंत्रालय चिप के आसन्न इलेक्ट्रोड से दर्ज की गई हैं, और क्षेत्र संभावित घटनाओं की शुरुआत की गतिशीलता की तुलना उत्पत्ति और प्रसार की अपनी साइट का अध्ययन की अनुमति देता है. गुंजन का एक टुकड़ा से दर्ज एक प्रतिनिधि जब्तीविदेश मंत्रालय प्रणाली के साथ एक सेरेब्रल कॉर्टेक्स (चित्रा 3 Aiii में उच्च अस्थायी समाधान में दिखाया गया है एक भी विदेश मंत्रालय इलेक्ट्रोड द्वारा दर्ज एक जब्ती के एक प्रतिनिधि ट्रेस) चित्रा 3B में दिखाया गया है. जब्ती इस प्रकार यह एक बड़ी cortical क्षेत्र के लिए प्रचार करने में सक्षम है यह दर्शाता है कि विदेश मंत्रालय चिप के लगभग सभी इलेक्ट्रोड से दर्ज की गई है कि ध्यान दें. इसके अलावा, प्रत्येक इलेक्ट्रोड से दर्ज एक निशान को देखकर, यह ऊतक भर जब्ती की प्रगतिशील प्रचार निरीक्षण करने के लिए संभव है: वास्तव में, यह इलेक्ट्रोड सरणी के ठीक आधे कवर cortical क्षेत्र में पहले शुरू होता है, और यह धीरे-धीरे को फैलाता है बाएं आधा कवर क्षेत्र (.. मैं ई, इलेक्ट्रोड L6 के और बी 6 से निशान तुलना; 3B चित्रा).
चित्रा 1: एक cortical dysplasia के एक. एक छोड़ दिया ललाट पालि परिखा में एम्बेडेड डी अपनी शल्य हटाने की एक टेलर प्रकार फोकल कॉर्टिकल dysplasia (सफेद तीर) preoperative एमआरआई (ए) पर कल्पित, और बाद में ऊतकीय परीक्षा (बी) मानचित्र काइनेज लेबलिंग द्वारा पुष्टि की है; पैमाने पर पट्टी: 200 माइक्रोन) कम सफेद पदार्थ में एक अधूरी प्रवास के साथ न्यूरॉन्स पर एक कॉर्टिकल dyslamination, असामान्य न्यूरॉन्स और एक ट्रैक दिखा. सर्जरी के दौरान, dysplasia के एक neuronavigation प्रणाली (सी) के साथ एमआरआई आंकड़ों के अनुसार स्थानीय है. सर्जरी (डी) के दौरान dysplasia युक्त गाइरस के दृश्य.
चित्रा 2:. मानव कॉर्टिकल टुकड़ा तैयारी के लिए उपकरण और प्रक्रिया एक इंटरफेस कक्ष मानव कॉर्टिकल स्लाइस बनाए रखने के लिए प्रयोग किया जाता है पूर्व vivo (ए); एक तापमान संवेदक (बाएं सी,), एक डबल के माध्यम से एक तापमान नियंत्रक (अप सी, सही,) से जुड़ा जहां कक्ष (बी), के ऊपरी भाग में फ्लैट क्षेत्र में लेंस ऊतक के एक पत्रक पर स्लाइस बाकी एंडेड केबल (सी, सही, नीचे), टुकड़ा ऊष्मायन समय के दौरान 37 डिग्री सेल्सियस बनाए रखने के लिए रखा गया है. एक बार ठंडा सूक्रोज आधारित ACSF (डी) से भरा एक पेट्री डिश में ऊतक के resected ब्लॉक जगह और टुकड़ा करने की क्रिया की सुविधा के लिए, रक्त के थक्के, जहाजों और तानिका हटाने, प्राप्त की. ऊतक ब्लॉक विदेश मंत्रालय कक्षों से ज्यादा है, एक ब्लेड (ई) के साथ उपयुक्त आयामों का एक टुकड़ा अलग और vibratome नमूना प्लेट (एफ) पर यह गोंद. 400 माइक्रोन मोटी स्लाइस काटें और एक रंग (जी) की मदद से लेंस ऊतक (एच) के टुकड़े पर उन्हें स्थानांतरण और इंटरफेस कक्ष (मैं) में उन्हें सेते हैं. रिकॉर्डिंग, रेमो पहलेACSF से भरा एक पेट्री डिश में टुकड़ा जलमग्न द्वारा लेंस ऊतक है और एक रंग (जे) के साथ एक ACSF भरा विदेश मंत्रालय चिप को हस्तांतरण. टुकड़ा विदेश मंत्रालय (कश्मीर) पर पालन करना और एक प्लैटिनम लंगर का उपयोग करके स्थिति में रख दें का हल निकालें. एम्पलीफायर (एल) में विदेश मंत्रालय, जगह छिड़काव और रिकॉर्डिंग शुरू करते हैं.
चित्रा 3: मानव कॉर्टिकल स्लाइस में मिरगी दौरे के विदेश मंत्रालय रिकॉर्डिंग (ए) एक विदेश मंत्रालय इलेक्ट्रोड द्वारा दर्ज की गई मानव कॉर्टिकल टुकड़ा गतिविधि का एक प्रतिनिधि ट्रेस पैनल मैं में दिखाया गया है.. सामान्य ACSF की उपस्थिति में, यह (पैनल द्वितीय में तेजी से बढ़ी छोटे ग्रे आयत,) interictal की तरह सहज गतिविधि का निरीक्षण करने के लिए संभव है; तो, 0 मिलीग्राम 2 + 6 मिमी + K ACSF के साथ छिड़काव शुरू कर दिया है, जब पहली seizuफिर एक ~ 15 मिनट की देरी के बाद दिखाई देता है और 2-3 मिनट के अंतराल में अन्य घटनाओं के बाद है. पैनल III एक जूम पैमाने के साथ पैनल मैं में बड़ा ग्रे आयत में जब्ती से पता चलता है. ब्लू लाइन और तीर द्वारा संकेत के रूप में नीले रंग का पता लगाने, गतिविधि का एक जूम दिखाता है. पैनल चतुर्थ) (नीला ट्रेस) तेजी से बढ़ी जब बहु इकाई गतिविधि प्रकट जो 250 हर्ट्ज पर फ़िल्टर्ड पैनल III में सचित्र डेटा) उच्च मार्ग दिखाती है. (बी) 0 की उपस्थिति मिलीग्राम 2 + 6 मिमी कश्मीर में एक जब्ती के प्रतिनिधि रिकॉर्डिंग + सब विदेश मंत्रालय इलेक्ट्रोड से ACSF. प्रत्येक वर्ग 12 X 12 विदेश मंत्रालय सरणी के एक इलेक्ट्रोड का प्रतिनिधित्व करता है और एक 80 सेकंड समय खिड़की से पता चलता है; बिंदीदार रेखा अपेक्षाकृत विदेश मंत्रालय सरणी के लिए cortical सतह की स्थिति को इंगित करता है.
Discussion
Pharmacoresistant मिर्गी इन विट्रो में मानव ऊतक में पता लगाया जा सकता है जो एक दुर्लभ हालत है. यह केवल आंशिक रूप से पशु मॉडल में प्रतिलिपि हैं कि विशिष्ट दोषों को प्रदर्शित करता है जो मिरगी मानव कॉर्टेक्स, अध्ययन की अनुमति देता है. यहाँ वर्णित विधि तैयारी और मानव पश्चात ऊतकों रिकॉर्डिंग की अनुमति देता पूर्व vivo संरक्षित सेलुलर व्यवहार्यता और नेटवर्क वे अनायास मिरगी गतिविधियों का उत्पादन इतना है कि साथ. विवो में दर्ज उन लोगों से इसी तरह की गतिविधियों को बनाए रखना रोग गतिविधियों की उत्पत्ति के तंत्र का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण है. इसके अलावा, इस तरह के तरीकों मानव ऊतकों की खोज और रोग की गैर आदर्श पशु मॉडल से बचने अनुमति देते हैं. हालांकि, मानव ऊतक का अध्ययन न्यूरो सर्जन और प्रयोगात्मक प्रयोगशाला के बीच तुल्यकालन की आवश्यकता है. ऊतक परिवहन घाव होने के लिए नहीं विशेष देखभाल की आवश्यकता है. इसके अलावा, नमूना की मात्रा और ऊतक दोनों सीमित है. अंत में, उचित नियंत्रण ऊतकों के लिए उपयोग माई हैएन चिंता. इस तैयारी के साथ, पोस्ट ऑपरेटिव ऊतकों अनायास सामान्य ACSF 7,8 में interictal तरह निर्वहन का उत्पादन. बरामदगी के लिए interictal राज्य से जब्ती दीक्षा और संक्रमण के तंत्र की जांच की जा सकती है, ताकि Ictal-तरह की घटनाओं को भी संशोधित, proconvulsive aCSF में हासिल किया जा सकता है.
मानव ऊतक इंटरफ़ेस की स्थिति में अधिकतम 10 घंटे के लिए व्यवहार्य रखा जा सकता है. बहु इकाई गतिविधि या क्षेत्र क्षमता अनायास मनाया गया और जब इस तरह की गतिविधियों कोशिकी पोटेशियम बढ़ जाती है और / या मैग्नीशियम कमी के माध्यम से excitability में वृद्धि से पैदा हुए थे जब स्लाइस व्यवहार्य माना जाता था. गतिविधि में परिवर्तनशीलता संभावना विकृतियों और cortical क्षेत्रों में मतभेदों को परिलक्षित करती है, तब होता है, हम केवल सहज interictal दिखा स्वस्थ स्लाइस में एक ऊतक की मिगी उत्पन्न करने वाला विशेषताओं का पता लगाया और ictal निर्वहन पैदा की. ऊतक जीवन शक्ति और गतिविधि की रक्षा करने के लिए, एक अंतरफलक चैम्बर टी स्टोर किया जाता हैवह विदेश मंत्रालय प्रणाली के साथ रिकॉर्डिंग से पहले वसूली के लिए 36-37 डिग्री सेल्सियस स्लाइस. दरअसल, कई समूहों स्पष्ट रूप से ऐसे सहज तेज लहर-लहर या कोलीनर्जिक प्रेरित दोलनों 9,10 के रूप में मानक बीकर भंडारण और नेटवर्क गतिविधि के संरक्षण के लिए तापमान के महत्व की तुलना में इंटरफ़ेस आधारित भंडारण की व्यवस्था के लाभ का प्रदर्शन किया है. स्लाइस के इंटरफेस भंडारण पहले मानव हिप्पोकैम्पस और subicular स्लाइस 1,11 से मिरगी गतिविधि रिकॉर्ड करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. वर्तमान विदेश मंत्रालय तकनीक के साथ, इंटरफ़ेस की स्थिति में टुकड़ा करने की क्रिया से वसूली की अवधि के बाद, नेटवर्क गतिविधि विदेश मंत्रालय प्रणाली के साथ, 37 डिग्री सेल्सियस पर उच्च प्रवाह दर (5-6 मिलीग्राम / मिनट) की उपस्थिति में, जलमग्न की स्थिति में दर्ज की गई है. एक साथ वृद्धि हुई प्रवाह की दर के साथ, एक छोटी मात्रा कक्ष (<1.5 मिलीलीटर) delimits जो विदेश मंत्रालय चिप की कम व्यास (1.8 सेमी), सहज और पीएचए के लिए एक महत्वपूर्ण कारक हो प्रदर्शन किया गया है जो टुकड़ा, की ऑक्सीजन की आपूर्ति बढ़ाता हैनेटवर्क की गतिविधियों 9,10 rmacologically प्रेरित. इसके अलावा, घूम ACSF की कम राशि औषधीय परीक्षण की सुविधा.
टुकड़ा करने की क्रिया प्रक्रिया हालांकि ऊतकों 12 के लिए एक traumatism है. न्यूरोनल वास्तुकला और क्लोराइड समस्थिति दोनों ऊतक सतह (50 माइक्रोन) में परेशान होना दिखाई देते हैं. ज्यादातर अल्पज्ञता गहरी पैठ बिना ऊतक, आघात क्षेत्रों से उत्पन्न हो सकती है जो नमूना विदेश मंत्रालय के चिप्स, द्वारा दर्ज की गतिविधियों के मूल. हालांकि, हमारे डेटा हमारे तैयारी में दर्ज की बरामदगी होने की उम्मीद नहीं कर रहे हैं, सुझाव है कि बाह्य क्षेत्र क्षमता स्थानीय स्तर पर सबसे विदेश मंत्रालय इलेक्ट्रोड और वे रिकॉर्डिंग साइट 13 से 100 से 200 माइक्रोन दूरी पर एकीकृत कर रहे हैं कि पिछले काम शो में दर्ज कर रहे हैं पता चला कि दिखाने आघात क्षेत्रों से उत्पादित. इसके अलावा, गहरी पैठ को सक्षम करने टंगस्टन इलेक्ट्रोड के साथ प्रदर्शन अध्ययन में, मानव ऊतकों में दर्ज मिरगी गतिविधियों समान हैंमिरगी रोगियों 1,7,8 में मनाया वालों के लिए.
पूर्व vivo ऊतक रिकॉर्डिंग की एक और सीमा इस प्रकार गतिशील neuromodulations सीमित, अलग मस्तिष्क क्षेत्रों के बीच कनेक्शन का विघटन है. ऐसे ऊतक में कोई ictal-जैसे घटना अनायास दर्ज की, लेकिन आयनिक हेरफेर या औषधीय उत्तेजना बढ़ाने excitability के द्वारा शुरू किया जा करने की आवश्यकता है क्यों यह समझा जा सकता है. तदनुसार, इस प्रोटोकॉल में, जब्ती-तरह की घटनाओं के ऊतक excitability के बढ़ाने के लिए, कोशिकी + K 3 से 6 मिमी करने में एक परिवर्तन और मुक्त ACSF 2 + 1.3 मिमी से मिलीग्राम बाहरी मिलीग्राम 2 + की कमी के संयोजन के द्वारा प्रेरित कर रहे हैं और 2 मिलीग्राम + निर्भर NMDA रिसेप्टर ब्लॉक हटा दें. दरअसल, यह पहले से epileptiform गतिविधि मुक्त ACSF विवो 14 में दर्ज electrographic बरामदगी के जैसा 2 + मिलीग्राम का उपयोग मानव neocortical और हिप्पोकैम्पस स्लाइस में प्रेरित किया है कि प्रदर्शन किया गया है. इसके अलावा,यह टेम्पोरल लोब स्लाइस में प्राप्त epileptiform निर्वहन इस प्रकार इन विट्रो में pharmacoresistant जब्ती-तरह की घटनाओं की जांच के लिए एक मॉडल उपलब्ध कराने, 2 मिलीग्राम + मुक्त ACSF 15,16 करने के लिए लंबे समय तक निवेश करने के बाद चिकित्सकीय इस्तेमाल किया anticonvulsants के लिए प्रतिरोधी हो जाते दिखाया गया है.
Meas न्यूरोनल कार्रवाई क्षमता पूर्व vivo में मिलकर क्षेत्र क्षमता और बहु इकाई गतिविधियों दोनों की रिकॉर्डिंग की अनुमति है. इस प्रकार, meas विवो में neuronal ensembles के तुल्यकालिक गतिविधियों से उत्पन्न क्षेत्र क्षमता का पता लगाने, लेकिन एक न्यूरॉन के लिए उपयोग 17 व्यवहार नहीं देते जो EEGs, की तुलना में एक शक्तिशाली electrophysiological उपकरण हैं. अधिक हाल microelectrodes न्यूरोनल कार्रवाई क्षमता में मिलकर इन विवो बहु इकाई गतिविधियों को रिकॉर्ड कर सकते हैं हालांकि उनके उपयोग ज्यादातर intracranial रिकॉर्डिंग के दौरान अनुसंधान के उद्देश्य के लिए प्रतिबंधित है, ताकि वे आक्रामक हैं. विशेष रूप से, meas रिकॉर्डिंग विकल्प की एक तकनीक का प्रतिनिधित्वमिरगी घटनाओं के स्थानिक-सामयिक पैटर्न का अध्ययन करने के लिए, जब्ती शुरुआत और प्रसार और क्लासिक और नए antiepileptic दवाओं की कार्रवाई को नियंत्रित तंत्र. उल्लेखनीय है,, सेल प्रकार और मिरगी निर्वहन के संकेत आधार सुलझाना छँटाई तकनीक स्पाइक और औषधीय परीक्षण विदेश मंत्रालय तकनीक के साथ संयुक्त किया जाना चाहिए. Meas व्यक्ति spikes के लिए पहुँच प्रदान कर सकते हैं, वे अन्तर्ग्रथनी और biophysical गुणों के बारे में जानकारी प्रदान नहीं करते. भविष्य में, अन्य तकनीक बेहतर नमूना सेलुलर व्यवहार, नेटवर्क की गतिविधियों और synaptic संकेतन के क्रम में विदेश मंत्रालय रिकॉर्डिंग करने के लिए मिलकर किया जाना चाहिए. उदाहरण के लिए, प्रतिदीप्ति इमेजिंग meas रिकॉर्डिंग के साथ जोड़ा जा सकता है, न्यूरॉन्स या glial कोशिकाओं व्यवहार, साथ ही आयन गतिशीलता को सुलझाना. मिरगी गतिविधियों के स्थान के विशिष्ट rearrangements के साथ जोड़ा जा सकता है तो आगे की पोस्ट हॉक histological विश्लेषण भी प्रकार की कोशिकाओं, प्रोटीन या रिसेप्टर्स की विशिष्ट परिवर्तन प्रकट कर सकते हैंतंत्रिका संरचना. Meas प्रणाली भी जनसंख्या गतिविधियों के साथ एकल कक्षों या conductances सहसंबंधी एक पैच दबाना सेट अप में एम्बेड किया जा सकता है. भविष्य में, optogenetic उपकरण भी इस्तेमाल किया organotypic स्लाइस के लिए प्रदर्शन के रूप में विशिष्ट प्रकार की कोशिकाओं की कि अभिकर्मक या संक्रमण प्रदर्शन किया जा सकता है ताकि मानव स्लाइस, लंबी अवधि में संवर्धित किया जा सकता है कि उपलब्ध कराया जा सकता है.
Disclosures
Multichannel सिस्टम द्वारा प्रायोजन वीडियो और खुली पहुंच प्रकाशन के उत्पादन के लिए प्रदान किया गया था.
Acknowledgments
इस काम ANR (कार्यक्रम ब्लैंक न्यूरोसाइंसेस), एफआरसी (ला Recherche सुर ले Cerveau डालना संघ) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था, पेरिस (कार्यक्रम उभार) के शहर, INSERM और Neuropôle डे से एनआर ला Pitié Salpêtrière अस्पताल (शोधों अनुबंध), Université पियरे एट मैरी क्यूरी UPMC (कार्यक्रम कन्वर्जेंस) और इंस्टीट्यूट डु Cerveau एट ए ला Moelle epiniere (पेरिस) से जीएच करने से प्रवर्तन निदेशालय को अति सूक्ष्म Francilien (NERF),
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Slice Chamber-2: Interface | AutoMate Scientific, Inc. | S-BSC2 | It requires separate temperature controller |
| 2-channel Temperature Controller | Multichannel Systems, Germany | TC02 | It allows to plug in and use 2 interface chambers. |
| Special cable for connection of TC01 to S-BSC2 with external reference PT100 | Multichannel Systems, Germany | CA3 | The reference PT100 is placed near the slices |
| 6pin plug-connector with PT100 | Multichannel Systems, Germany | TS-PT100 | External reference for CA3 cable |
| MEA workstation for recording data from 120-electrode MEAs | Multichannel Systems, Germany | MEA2100-120 | It includes MEA2100-120 headstage and MEA2100 interface board. www.multichannelsystems.com |
| Microelectrode array for MEA2100-120 | Multichannel Systems, Germany | 120MEA200/30 | Electrode spacing: 200 µm; electrode diameter: 30 µm; glass ring: 6 mm high. Different configurations (spacing, diameter, ring) possible. |
| Video Microscope Table | Multichannel Systems, Germany | MEA-VMT-1 | Table with a video microscope underneath to image the electrode field of the MEAs in an amplifier placed on top of the table and transfer the image to a computer. |
| Perfusion cannula | Multichannel Systems, Germany | PH01 | Heatable perfusion cannula with temperature sensor; temperature can be programmed with TC02 controller |
| MC_Rack | Multichannel Systems, Germany | Software for data acquisition and recordings | |
| Magnetic Perfusion Holder | Multichannel Systems, Germany | MPH | Magnetic perfusion holder for PH01 element to fix the perfusion cannula and connect the perfusion system to the amplifier's ground |
| Neuroexplorer | Nex Technologies | Software for data analysis; info@neuroexplorer.com | |
| Peristaltic pump (drive unit) | Gilson | F155001 | 0,01 to 48 rp |
| Peristaltic pump (pump head) | Gilson | F117800 | R2 two channel |
| Ultrasonic aspirator | Integra Life sciences, USA | Cusa Excel + | It allows blunt subpial dissection of the cortex |
| Neuronavigation | Isis Solutions, France | Surgiscope | It allows real time identification of the brain structure on the preoperative MRI |
| Vibratome HM 650 V | Microm | Block slicing into 400 μm thick slices |
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