Extraction par sonication de biomarqueurs lipidiques de sédiments

1. rassemblez le matériel nécessaire

1. Échantillons (feuilles, terre, champignons, écorce, tissus), généralement congelé, lyophilisé, écrasés et homogénéisé avant l’extraction, extraite en groupes afin de maximiser l’efficacité. Extrait de trois échantillons.
2. Selon la taille de l’échantillon, les flacons avec des volumes allant de 4 à 60 mL peuvent être utilisés. Pour cette expérience, les flacons en verre de borosilicate (40 mL) et solvants sécuritaires casquettes sont utilisés. Flacons, pipettes en verre borosilicate et boîtes de pesage doivent être brûlé à 550 ° C pour garantir l’élimination des contaminants organiques possibles avant 6 h.
3. Dichlorométhane et le méthanol sont courantes dans les laboratoires de géochimie organiques plus. Ils sont utilisés individuellement pour rincer les outils de laboratoire et de la verrerie avant utilisation. Un mélange de dichlorométhane (DCM) de méthanol (MeOH ; 9:1) est utilisé dans nombreux laboratoires d’extraire efficacement des biomarqueurs avec un large éventail de polarités. Solvants doivent être exempts de contaminants organiques.
4. Utiliser un bain d’eau de sonication à température ambiante. Une gamme de tailles sonicateur et sonication avec ou sans chaleur sont disponibles auprès de revendeurs de matériel scientifique majeur.
5. Racks de flacon, qui doivent être imperméable à l’eau, seront placés dans le bain de la sonication.
6. Solvant approuvé hotte chimique.

2. préparation de l’échantillon

1. Placez une tible pesant étain sur l’échelle du laboratoire, puis tare.
2. Rincer la spatule de laboratoire avec le solvant, puis utilisez-la pour transférer une masse appropriée de l’échantillon dans l’étain pesage et enregistrer la masse.
   1. La masse de l’échantillon varie en fonction de sa teneur en matière organique. Matière organique relativement maigre matériel (boue marine) peut exiger plusieurs grammes, tandis que la matière organique riche matériel (tissus foliaires) peut-être nécessiter beaucoup moins.
3. Transférer la totalité de la matière dans l’étain pesage dans un consommé, flacon préalablement pesé et étiqueté. Boucher le flacon, puis jetez l’étain de pesage.
4. Effectuez les étapes 2.1 à 2.3 pour chaque échantillon à extraire.

3. extraction

1. À l’aide d’une pipette de pre-tible et ampoule, transférer environ 20 mL du mélange (9:1) DCM:MeOH dans chaque flacon (flacon devrait être environ moitié plein). Reboucher les flacons avant de passer à l’échantillon suivant, afin que les solvants volatils s’évapore pas.
   1. Les volatilités de DCM et MeOH sont différentes. Évaporation du solvant d’extraction en raison de l’échantillon non plafonnés flacons a la capacité de changer sa polarité et donc l’extraction.
2. Placer les flacons d’échantillon dans un support imperméable à l’eau flacon.
3. Vérifiez que le niveau d’eau dans le bain de sonication n’est pas assez profond pour submerger les flacons d’échantillon jusqu’au sommet du solvant d’extraction. Trop d’eau peut causer les flacons à flotter ; trop peu d’eau peut arrêter des échantillons provenant d’être agité correctement.
4. Placez la grille de flacon avec les échantillons à elle directement dans le bain de la sonication.
5. Laisser agir pendant 30 min à température ambiante.
6. Retirez le panier de l’échantillon du sonicateur. Si l’extraction des sédiments, laissez-le durcir durant 30 min permettre la décantation se produise. S’extraire un autre ensemble d’échantillons, mise en sonicateur en ce moment.
7. Retirez le mélange de DCM:MeOH de la fiole d’extraction, à l’aide d’une pipette de pre-tible et l’ampoule, et insérer dans une autre préalablement pesé, pré-tible et étiqueté flacon de 40 mL.
8. Répétez 3 3.1 à 3.7 x pour tous les échantillons.
9. Permettre des échantillons extraits sécher dans leurs flacons, bouchons et dans la hotte, couverts sans serrer avec un morceau de papier d’aluminium. Qualifier de « résidus extraits » et stocker.
10. Les extraits combinés pour chaque échantillon de qualifier de « TLE ».