Mise en place de la co-culture 3D de cellules stromo-endothéliales

Pour commencer, prendre la pastille des GFP-HUVECs cultivés à un niveau de confluence de 80 à 100% et remettre les cellules en suspension dans un volume approprié de milieu basal pour atteindre une concentration d’une fois 10 à la septième cellule par millilitre de solution mère. Préparer des tubes à centrifuger coniques de 50 millilitres contenant le volume requis de milieu basal complété par les facteurs de croissance respectifs. Ajouter les GFP-HUVECs de la solution mère à une dilution de un à 66,67 pour obtenir une concentration de 1,5 fois 10 à la cinquième cellule par microlitre.

Aspirez ensuite le milieu de la plaque contenant la monoculture stromale et ajoutez 200 microlitres par puits de la suspension GFP-HUVECs préparée. Incuber à 37 degrés Celsius dans 5% de dioxyde de carbone dans une atmosphère humidifiée, en changeant le milieu tous les trois à quatre jours. Surveiller le développement de la culture par microscopie à fond clair et à fluorescence à l’aide d’un objectif quintuple.

Des différences entre les cultures ont pu être observées à partir des images en champ clair et en fluorescence montrant uniquement les GFP-HUVEC. Les cultures semblaient moins développées sans aucun facteur de croissance, Cependant, un développement plus rapide a été observé en présence de FGF-2. En revanche, les images en champ clair ont montré les cultures les plus denses en présence de BMP-2.

Cependant, des réseaux vasculaires similaires se sont formés à la fois dans des conditions contenant des facteurs de croissance et les réseaux les plus étendus et interconnectés ont été formés avec FGF-2.