L’élimination des pupariums d’insectes : une méthode d’investigation des nymphes

-Pour accéder à la nymphe en développement, retirez la puparie après que l’épithélium de la nymphe se soit séparé de la cuticule ou après le stade de nymphe P5. Pour commencer, placez la chrysalide intacte avec sa face ventrale tournée vers vous. À l’aide d’une pince, maintenez le puparium dans l’espace vide entre l’extrémité antérieure du boîtier et la tête de la nymphe. Ensuite, cassez doucement et retirez la partie antérieure du puparium pour exposer la tête.

Tout en gardant l’orientation ventrale, utilisez la pince pour créer de petites cassures le long de l’axe antéro-postérieur du puparium et assurez-vous qu’un espace continu se forme dans le processus. Veillez à ne pas endommager le tissu de la chrysalide directement en dessous. Continuez ensuite à casser le puparium de l’espace vers l’extérieur, une portion à la fois, et étalez le boîtier déchiré dans le processus. À l’aide d’un pinceau fin et humide, ramassez la chrysalide exposée pour une enquête plus approfondie. Dans l’exemple de protocole, nous verrons comment enlever le puparium de Drosophila guttifera et préparer la chrysalide pour l’imagerie.

-Pour commencer l’élimination du puparium, fixez un morceau de ruban adhésif double face sur un morceau de papier absorbant. Placez la chrysalide sur le ruban adhésif double face, côté ventral vers le haut. Localisez l’espace entre la face antérieure du puparium et la nymphe interne. Saisissez et retirez le puparium autour de cet espace à l’aide d’une pince et exposez la face antérieure de la tête de la nymphe.

Insérez la pointe d’une pince en la déplaçant parallèlement à l’axe antéro-postérieur. Soulevez la pointe de la pince pour briser localement le puparium. Répétez cette action jusqu’à ce que la rupture atteigne la partie postérieure du puparium. Assurez-vous qu’un espace est formé entre le puparium et les pattes de la nymphe, et cassez la face ventrale du puparium tout en minimisant les dommages à la nymphe interne. Après avoir cassé le puparium autant que possible, sortez la chrysalide à l’aide d’un pinceau fin. Placez la chrysalide sur un morceau de papier de soie qui a été humidifié avec du ddH2O et placé dans une boîte de Pétri en plastique. Prenez immédiatement des photos car la chrysalide exposée est vulnérable et sèche facilement.