Implantation guidée par ultrasons : une technique pour implanter des cellules d’adénocarcinome canalaire pancréatique dans une souris adulte

- L’échographie fournit des images haute résolution qui aident à implanter des cellules cancéreuses dans un site tissulaire spécifique avec une inflammation minimale lors de l’injection de cellules tumorales. Nous utilisons principalement des modèles orthotopiques pour greffer des cellules tumorales dans un organe pertinent d’origine tumorale. L’organe imite le microenvironnement tumoral d’origine et facilite les métastases.

Commencez par suspendre les cellules tumorales dans du PBS froid pour maintenir le pH et placez le tube sur de la glace. Ensuite, placez la souris anesthésique sur la platine d’échographie et fixez les membres avec du ruban adhésif de laboratoire. Appliquez la quantité requise de gel à ultrasons sur l’abdomen rasé et ajustez la position de la sonde à ultrasons jusqu’à ce que le pancréas soit clairement visible. Chargez la seringue avec une suspension de cellules tumorales et injectez soigneusement les cellules dans le pancréas.

Une bulle de liquide apparaît sur l’image échographique, confirmant la réussite de l’implantation. Attendez 5 secondes pour éviter le reflux des cellules et retirez délicatement l’aiguille. Remettez l’animal dans une cage propre et surveillez-le jusqu’à ce qu’il se remette de l’anesthésie. Quelques semaines après l’injection, les cellules cancéreuses injectées dans le pancréas se divisent rapidement et forment une tumeur. Dans le protocole suivant, nous effectuerons l’implantation guidée par échographie de cellules d’adénocarcinome canalaire pancréatique dérivées de souris dans le pancréas du modèle orthotopique.

- Avant de commencer l’intervention, remettre en suspension la lignée cellulaire d’adénocarcinome canalaire pancréatique d’intérêt dans un volume approprié de PBS froid stérile sur glace. Placez les cages sur une plaque chauffante à 37 degrés Celsius et nettoyez soigneusement l’enceinte de sécurité biologique, la chambre d’induction et l’étage d’échographie avec un stérilisant approprié. Réglez la fonction de réchauffement de la platine d'échographie à 37 degrés Celsius et, après l'induction de l'anesthésie, appliquez une pommade sur les yeux du premier animal.

Placez la souris en position dorsale sur la platine d’échographie et fixez doucement les membres supérieurs et inférieurs à la platine avec le ruban adhésif. À l’aide d’un coton-tige stérile, appliquez une couche généreuse de crème dépilatoire dans le quadrant supérieur gauche de l’abdomen, sur la région de la rate jusqu’à la ligne médiane. Après 1 minute, utilisez un tampon de gaze sèche pour retirer délicatement les poils avant d’enlever l’excès de crème dépilatoire avec la gaze humide saline. Ensuite, placez la souris dans l’une des nouvelles cages propres du réchaud.

Pour l’implantation de cellules tumorales guidée par échographie, ajustez la plate-forme d’échographie de manière à ce que la surface soit parallèle au sol et placez-vous sur le côté gauche de l’animal avec la tête de la souris tournée vers la droite. Ajustez la position de la sonde de manière à obtenir une image abdominale transversale et fixez les membres de la souris à la plate-forme avec du ruban adhésif. Abaissez doucement le transducteur pour entrer en contact avec l’abdomen de la souris et ajustez le transducteur jusqu’à ce que le pancréas soit clairement visible. Localisez le rein et la rate gauches pour fournir une orientation précise dans la cavité abdominale.

Lorsque le site d’injection a été localisé, chargez une seringue à insuline d’un demi-pouce de calibre 29 avec 25 microlitres de suspension de cellules tumorales et essuyez la pointe de l’aiguille avec un tampon de préparation à l’alcool stérile. Utilisez une pince à bord émoussé pour saisir la peau de la souris et la paroi péritonéale afin d’augmenter la tension au site d’injection. En tenant la seringue à un angle d’environ 25 à 45 degrés par rapport à la surface de la plate-forme d’échographie, faites lentement avancer l’aiguille à travers la peau et la paroi péritonéale. Confirmez que l’aiguille a percé la paroi péritonéale avant d’utiliser la visualisation par ultrasons pour guider l’aiguille directement dans le pancréas.

Lorsque l’aiguille est en place, injectez lentement les cellules tumorales. La formation d’un bolus de liquide à l’intérieur du pancréas sera évidente dans un pancréas correctement injecté par échographie. Une fois que tout le volume de suspension a été injecté et qu’un bolus de liquide peut être observé à l’échographie, maintenez la seringue très immobile pendant plusieurs secondes avant de rétracter lentement l’aiguille de l’abdomen de la souris, en prenant soin de ne pas perturber les cellules injectées. Ensuite, placez la souris dans une nouvelle cage propre sur le réchauffeur avec surveillance jusqu’à récupération complète.

- Le bon placement de l’aiguille dans le pancréas, y compris la profondeur et l’angle de l’aiguille, est une étape essentielle de ce protocole. La visualisation du bolus de liquide permet de confirmer la réussite de l’injection tumorale. Le contrôle de la profondeur d’injection est l’aspect le plus difficile. Mon conseil est de pratiquer avec des injections de trypan-blue et de confirmer le bolus de liquide à la fois par échographie et par nécropsie.