Injection de cellules tumorales intracécales : une technique d’administration de cellules cancéreuses pour l’établissement d’un modèle murin de cancer colorectal orthotopique

- L’injection tumorale orthotopique intra-vasculaire délivre des cellules tumorales correspondant à l’histotype du tissu cæcal directement dans le cæcum de l’animal receveur. Pour commencer, préparez une souris anesthésiée pour la chirurgie. Inciser sa paroi abdominale pour extérioriser le caecum. Grattez la paroi cæcale pour diminuer tout mouvement péristaltique intestinal. Alignez une seringue contenant une cellule cancéreuse colorectale ou une suspension de CCR parallèlement sur le cæcum.

Ensuite, étirez le caecum pour éliminer les plis. Tirez doucement le caïcum sur la canule de sorte que l’extrémité ne perfore que la membrane intestinale externe mince et translucide, ou séreuse. Ensuite, injectez la suspension de cellules cancéreuses dans l’espace entre la séreuse et la couche musculaire interne. Assurer la distribution complète de la suspension cellulaire et rétracter la canule. Remettez le cæcum dans la cavité abdominale et suturez l’incision chirurgicale. Laissez la souris récupérer.

Dans les jours qui suivent l’injection, une tumeur orthotopique se développe au site d’injection ou métastase à des tissus ou des organes distants. Dans le protocole suivant, nous démontrerons une technique d’injection intra-tricecale de cellules cancéreuses colorectales pour développer un modèle murin orthotopique de CCR.

- Commencez par utiliser des pinces atraumatiques pour extérioriser soigneusement le cæcum d’une souris immunodéprimée de six à huit semaines, en plaçant l’extrémité aveugle du cæcum sur l’abdomen de manière à ce que la poche pointe vers le crâne. Pour l’injection intracale, montez une seringue standard de 1 millilitre équipée d’une canule de calibre 30 et chargée avec les cellules tumorales sur une pompe de micro-injection montée sur un micromanipulateur. Ensuite, utilisez la pince atraumatique pour saisir soigneusement l’extrémité du caecum et utilisez une deuxième pince imbibée de solution saline chaude pour lisser doucement le caecum avec des mouvements vers le bas.

Maintenant, déplacez l’animal sous un microscope chirurgical binoculaire et, avec la canule directement parallèle et au-dessus du caecum à l’aide de deux pinces atraumatiques pour étirer soigneusement le tissu aux deux extrémités de l’extrémité extériorisée du caecum Tirez lentement le caecum sur la canule, en prenant soin de ne pas perforer toute la paroi intestinale ou la séreuse au-delà du point de pénétration initial, et placez la canule au-dessus des vaisseaux sanguins et sous la fine membrane translucide à l’intérieur de la paroi intestinale. Lorsque la canule est en place, à l’aide d’une pédale, injectez 20 microlitres de cellules sur une période de 20 secondes entre la fine muqueuse séreuse translucide au-dessus des vaisseaux sanguins intramuraux et la musculaire.

Lorsque toutes les cellules ont été injectées, retirez soigneusement la canule et placez un écouvillon sec sous le caecum Pour prévenir la dissémination péritonéale artificielle, lysez toutes les cellules qui fuient avec un rinçage abondamment à l’eau distillée et renvoyez doucement le cæcum dans la cavité abdominale. Fermez la paroi abdominale à l’aide de sutures de course 6-0 rapidement résorbables et la peau à l’aide de clips chirurgicaux. Ensuite, placez la souris sur un tapis chauffant réglé à 38 degrés Celsius avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit complètement couchée.