Coloration négative d’exosomes purifiés : une procédure pour visualiser la morphologie des exosomes à l’aide de la microscopie électronique à transmission

Pour effectuer une coloration négative des exosomes - des vésicules sphériques de taille nanométrique - commencez par prendre une grille de microscopie électronique appropriée. Préparez la grille à l’aide d’un déchargeur de luminescence. Ce procédé rend la surface de la grille hydrophile pour une meilleure adhérence des échantillons.

Simultanément, prenez une suspension d’exosomes purifiés dans un tube. Complétez le tube avec du paraformaldéhyde - un fixateur d’échantillon - et incubez. Le paraformaldéhyde pénètre dans les exosomes et réticule, les protéines et les acides nucléiques. Cette étape est essentielle pour préserver la morphologie des exosomes.

Maintenant, chargez la suspension d’exosomes sur la grille pré-préparée et incubez pour permettre à l’adsorption de se produire. Ensuite, ajoutez quelques gouttes d’acétate d’uranyle, une tache de métal lourd, sur la grille. Les ions uranyle se lient aux protéines et aux lipides de la membrane, formant un dépôt autour de la limite de l’exosome.

Enfin, lavez la grille à l’eau pour enlever l’excès de tache. Laissez la grille sécher et imagez à l’aide de la microscopie électronique à transmission ou TEM.

Lorsqu’un faisceau d’électrons frappe les exosomes, la coloration entourant l’échantillon disperse plus d’électrons. Les exosomes étant moins denses en électrons, ils permettent au faisceau de passer à travers. Ces électrons dispersés différemment sont capturés par le système d’imagerie pour former une image à contraste élevé.

Les exosomes colorés négativement apparaissent plus clairs, avec une limite sombre autour d’eux.