Western Blot unicellulaire pour déterminer l’hétérogénéité cellulaire

Les sites d’inflammation contiennent diverses cellules immunitaires, notamment des monocytes, des macrophages et des leucocytes.

Pour identifier une population cellulaire hétérogène par western blot unicellulaire, prenez une puce de transfert pré-hydratée, composée d’un gel de polyacrylamide photoactivable modelé en blocs. Chaque bloc comporte de nombreux micropuits. La mise en réseau en plusieurs blocs capture plusieurs cellules en parallèle.

Ajouter une suspension contenant une population cellulaire hétérogène. Les dimensions du puits permettent à des cellules individuelles de se déposer. Plongez la puce dans une chambre d’électrophorèse remplie d’un tampon approprié. Les molécules détergentes du tampon perturbent la membrane de la cellule, libérant le contenu cellulaire.

Appliquez un champ électrique. Les protéines libérées migrent à travers le gel, se séparant en bandes de taille distincte. Lavez la puce avec un tampon de lavage pour éliminer les molécules non spécifiquement liées, ne laissant que les protéines cellulaires, y compris les protéines marqueurs souhaitées.

Exposez le gel à la lumière UV, activant sa surface et immobilisant les protéines.

Ajoutez un cocktail d’anticorps primaires qui se lient spécifiquement aux protéines marqueurs distinctives de chaque type de cellule, formant des complexes protéine-anticorps primaires. Distribuez un mélange d’anticorps secondaires marqués fluorescents, qui se lient à leurs anticorps primaires respectifs, marquant la protéine marqueur spécifique de la cellule correspondante.

Placez la puce dans un scanner. Mesurer l’intensité de la fluorescence qui est proportionnelle au niveau d’expression du marqueur protéique correspondant spécifique à une seule cellule de la suspension de cellules de l’échantillon.