Microinjection d'embryons aegypti a. Pour obtenir les moustiques transgéniques

Je suis vous. Je travaille dans le laboratoire d’Anton James. Aujourd’hui, je vais vous montrer comment faire de la micro-injection dans des embryons d’ADI en Égypte dans le but d’obtenir des moustiques transgéniques.

Pour obtenir les embryons pour les micro-injections, nous devons avoir une femelle nourrie au sang. Les femelles sont censées être nourries le jeudi. Si vous souhaitez faire une micro-injection du lundi au vendredi, c’est aussi une ignoble.

Je prends le coton, je le mets et je verse l’eau. Le coton est censé être mouillé et prendre un cercle de whiteman de trois mm, mettre sur le dessus et pousser vers le bas. Et je dois verser l’eau, nettoyer le toit, la serviette et fermer avec du coton.

C’est prêt En ce moment, je vais rassembler six 10 femelles et je transfère les femelles pour qu’elles se retirent pendant un petit moment et je vais les mettre dans des conditions sombres et les mettre dans la chambre, qui a une température de 27 degrés pendant une heure et 15 minutes. Je fabrique des aiguilles pour la micro-injection à l’aide d’aiguilles en verre et nous utilisons la société d’instruments de navette polaire et le modèle P 87. Je place une aiguille de verre dans l’anneau et je fixe des deux côtés.

Fermez le couvercle et poussez l’aiguille de traction est rouge. Maintenant, je vais vous montrer comment faire le lien des aiguilles. Les aiguilles après avoir tiré sont fermées et nous devons rouvrir les aiguilles.

Il y a deux façons de le faire. Une façon est d’être lié et une autre façon de toucher simplement l’embryon avant les injections. D’accord, c’est la façon de Lin.

J’ai l’aiguille et je fixe cette aiguille ici. Voici un au-dessus de l’embout que nous ne pouvons pas utiliser pour la micro injection. Cet embout pour la micro injection, nous devons avoir un embout ouvert.

C’est la roue. J’essaie de toucher la surface de la roue avec l’aiguille et les pointes des aiguilles doivent toucher la surface de la roue. Lorsque la pointe touche la surface, vous devez mettre la roue.

Ici, vous pouvez voir que l’aiguille est prête pour la micro-injection. La pointe de l’aiguille est être et vous pouvez voir que la pointe brille. Cela signifie que l’aiguille est ouverte et prête pour la micro-injection.

N’oubliez pas que seule l’extrémité du tube doit être cassée. Si vous faites un gros trou, l’aiguille n’est pas bonne. Le trou doit être très petit.

Une heure et 15 minutes se sont écoulées et les embryons devraient être prêts pour les micro-injections que je prends dans la chambre. Prenez un moment et vous pouvez voir des embryons, une dose noire sur le papier et en ce moment, je transfère les femelles dans la cage. Laissez-les simplement voler.

Je vais maintenant vous montrer les outils que je vais utiliser pour aligner les embryons. Cela force que j’utilise pour prendre X papier dans la nature. Ces forces que j’utilise pour faire la ligne de l’embryon.

Le César, nous devons couper du ruban adhésif double et cela force que j’utilise pour retirer les œufs après les micro-injections. Il s’agit du bordereau de couverture. À ce bordereau de couverture.

J’attache un double ruban adhésif pour ramasser les embryons sur le papier watman. Maintenant, je vais aligner les embryons. Le premier, je prends X papier de l’époque.

Vous devez vous rappeler que le papier doit être mouillé tout le temps. Je vais tracer des embryons de gris à gris foncé. C’est une bonne étape pour les injections.

Ne prenez pas d’embryons blancs et noirs, tous les embryons doivent être dans la même orientation. Nous avons deux pôles, l’Ontario et l’affiche que nous allons injecter dans Posterial.End. Le côté de l’Ontario est un peu plus large que l’arrière.

Il s’agit d’un bordereau de couverture. Je vais faire une lamelle prête à ramasser les embryons. Pour cela, j’ai besoin de double ruban adhésif attaché à la couverture.

Le slip, la coupe, les âges et le cover slip sont prêts. À l’heure actuelle, je dois très bien sécher le papier X car si les embryons sont mouillés, ils ne collent jamais au ruban. Pour cela, j’utilise du MV sans sec.En ce moment, je prends une feuille de couverture et du ruban adhésif à double steak et j’appuie très légèrement sur les embryons.

Et j’ai des embryons sur la housse. Et c’est maintenant que se trouve cette étape de dication. Cette étape de dication devra principalement attendre dans cette position environ une minute peut-être.

Mais vous devez regarder au microscope et vous pouvez voir que les œufs commencent à rétrécir. Ces embryons sont desséchés. Vous pouvez voir les fossettes et lorsque vous voyez ces fossettes, vous devez mettre de l’huile immédiatement et arrêter la dessiccation.

Lorsque les embryons sont desséchés, vous devez mettre de l’huile immédiatement. Les embryons sont prêts pour la micro-injection Et je mets des embryons en ligne sur la scène et je vais remplir des aiguilles, de l’ADN pour cela. J’utilise le tuyau d’ajout et je charge l’aiguille également à partir d’ici.

Et je prends mon ADN en prenant 1,5 microlitre. D’accord et chargez et l’aiguille et j’ai fixé l’aiguille au support. Et hol est connecté au micro-injecteur.

Nous utilisons un micro-injecteur einor, appelé Femto jet. Maintenant, je suis prêt à injecter les embryons. Pour ces papiers, nous utilisons une pression d’injection de 600, une contre-pression de 250 et le temps est manuel.

En ce moment, je vois des embryons très parfaits au microscope. Et après cela, je déplace l’aiguille et je dois aussi voir très parfaitement et focaliser l’aiguille dans le microscope. Après cela, je remets des embryons et je peux voir des embryons et des aiguilles dans le même champ.

Et à l’heure actuelle, fixez l’aiguille très près de l’extrémité postérieure des embryons. Et je fais une injection à une extrémité postérieure des embryons. Et d’abord, ce que je fais, c’est d’abord voir des embryons très clairs au microscope.

Je déplace la platine du microscope et je vois toujours où l’aiguille ne bouge pas. Bonne injection. L’injection parfaite.

Lorsque vous voyez l’extrémité postérieure et que vous atteignez une aiguille, touchez l’extrémité postérieure et vous la pénétrez et vous ne pouvez voir aucun rétrécissement du X, aucun rétrécissement de ce genre. Si vous aimez ça, ce n’est pas très bon. Mais si x est toujours dans la position comme ça et que vous pénétrez l’aiguille, cela signifie que votre aiguille est très bonne et que l’injection est très bonne.

Après la microinjection, je dois transférer les EMRE, dans des conditions humides. Pour cela, j’utilise une chambre en plastique avec du coton humide sur le fond et du papier humide. Je le mets sur le coton et je m’assure que ce papier est humide.

C’est prêt. Je prends mon forcet. J’enseigne les embryons sous l’huile et je les mets sur le mur sur le papier.

S’il vous plaît, ne mettez pas sur le fond parce que l’huile doit descendre de l’embryon et je, je prends 2, 3, 5 embryons en une fois ou une, c’est aussi bien. Maintenant, je vais préparer les embryons pour qu’ils soient prêts pour l’insectarium. Pour cela, je prends de la lingette, je couvre les embryons et je les fixe avec du caoutchouc.

Et c’est prêt pour les insectes pendant cinq jours. Ensuite, nous restons dans l’inspection pendant cinq jours et après cela, nous allons éclore avec l’embryon, hein, et obtenir les transgéniques. Maintenant, je suis en ECT et je vais vous montrer comment faire éclore les embryons.

Et le premier, je vais verser de l’eau dans la chambre en plastique et ajouter la nourriture. Quelques gouttes, prenez les embryons, qui restent dans une nourriture insectivore cinq jours. Prenez le papier d’œuf, faites un petit trou et déposez les embryons.

Voilà. Les embryons commencent à éclore les uns après les autres au cours de la première semaine. Et aussi certains embryons commencent à éclore après quatre semaines.

Et nous avons toujours dans le sable, différents stades de la larve et du pu, je viens de vous montrer comment faire de la micro-injection dans un embryon de dete. Et je tiens à dire que les trois étapes sont très importantes dans cette procédure. Il faut faire de très bonnes aiguilles.

Vous devez prélever les embryons au bon stade. La dessication doit être faite aussi très précisément, pas trop. Dans environ quatre semaines, nous aurons des moustiques transgéniques.