Encyclopédie des expériences JoVE
Recherche sur le cancer
0 vues • 3:18 min • April 30th, 2023
L’épiploon, un tissu riche en tissu adipeux dans la cavité péritonéale, se compose de dépôts de graisse qui fournissent un microenvironnement approprié pour que les cellules cancéreuses métastatiques colonisent et forment des tumeurs secondaires. Pour étudier cette colonisation ex vivo, il faut commencer par positionner un insert de culture cellulaire membraneux perméable à l’intérieur d’une plaque de culture.
Appliquez un adhésif tissulaire sur la région interne de la membrane d’insertion. Placez un explant omental de souris sur l’adhésif pour immobiliser le tissu. Ensemencez doucement une suspension de cellules cancéreuses de l’ovaire marquées par fluorescence sur le dessus de l’épiploon.
Ensuite, remplissez les côtés du puits avec un milieu approprié pour compléter la croissance cellulaire et incubez pendant le temps souhaité. Le tissu omental contient des structures spécialisées appelées taches laiteuses, qui sont des amas de cellules immunitaires regroupées autour de réseaux de vaisseaux sanguins. Ces cellules immunitaires sécrètent certains facteurs chimiques qui attirent les cellules cancéreuses et favorisent leur implantation. Les cellules cancéreuses colonisées prolifèrent, simulant des conditions métastatiques.
Enfin, jetez les supports usagés. Observez la culture à l’aide d’un microscope fluorescent pour évaluer les colonies de cellules cancéreuses fluorescentes dans le tissu omental.
Cultivez et préparez des cellules marquées par fluorescence et remettez-les en suspension à une concentration de 2 millions de cellules par millilitre. Appliquez environ 6 microlitres d’adhésif tissulaire sur la membrane de l’insert de culture et laissez-le sécher à l’air. Ensuite, lavez deux fois la membrane à l’eau stérile pour enlever tout excès d’adhésif avant de sécher les membranes à l’air libre sous un capot laminaire.
Excise soigneusement l’épimenton et fixe-le à la membrane enduite d’adhésif à l’aide d’une pince stérile. Après avoir laissé le tissu adhérer à la membrane pendant une minute, ajoutez 500 microlitres de suspension cellulaire sur chaque épiploon dans chaque insert de culture.
Ensuite, remplissez la zone autour de la chambre de transpuits avec 2,5 millilitres de DME/F-12. Incuber l’épimenta avec une suspension cellulaire pendant six heures à 37 degrés Celsius dans un environnement à 5 % de CO2. Retirez délicatement et lavez l’olémenta avec environ 10 millilitres de PBS. Enfin, visualisez les foyers des cellules cancéreuses fluorescentes à l’aide d’un système d’imagerie fluorescente approprié.