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Recherche sur le cancer
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L’autophagie est un processus intracellulaire qui facilite la dégradation des composants cytoplasmiques indésirables et des organites dans des compartiments digestifs spécialisés appelés lysosomes. Pour évaluer l’autophagie, il faut commencer par une culture adhérente de cellules cancéreuses de la prostate exprimant des protéines marqueurs autophagiques appelées LC3 couplées à des protéines fluorescentes vertes.
De manière inhérente, les cellules cancéreuses de la prostate sont dépourvues de l’enzyme argininosuccinate synthase nécessaire à la synthèse des acides aminés de l’arginine. Ces cellules dépendent donc de la supplémentation externe en arginine par le biais de milieux pour leur survie et leur prolifération.
Ensuite, traitez les cellules avec de l’arginine déiminase ou de l’ADI. L’ADI hydrolyse l’arginine libre dans le milieu, entraînant une appauvrissement en arginine. En conséquence, les cellules subissent un stress métabolique, initiant une réponse autophagique interne. Simultanément, traitez les cellules avec un colorant fluorescent rouge qui marque les lysosomes à l’intérieur des cellules.
Au cours de l’autophagie, des structures membraneuses en forme de coupe appelées
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