Dosage de l’immunofluorescence pour détecter les dommages à l’ADN médiés par les PM_2,5 chez les embryons de poissons

Chez le poisson-zèbre, les particules fines ambiantes, ou PM – un polluant atmosphérique – provoquent un dysfonctionnement cardiaque induit par le stress oxydatif.

Pour étudier l’impact des particules sur le poisson-zèbre, il faut commencer par exposer les embryons de poisson-zèbre à de la matière organique extractible dérivée des particules, qui déclenche la génération d’espèces réactives de l’oxygène, ou ROS.

ROS oxyde la guanine, base de l’ADN, en 8-hydroxy-2'-désoxyguanosine ou 8-OHdG, et provoque la phosphorylation de l’histone H2AX pour former γH2AX - un marqueur des cassures double brin de l’ADN.

Après l’exposition, disséquez le cœur du poisson-zèbre et placez-le sur une lame de verre. Traitez le cœur avec une solution fixatrice qui réticule les protéines, stabilisant ainsi la structure cellulaire.

Ensuite, ajoutez un réactif bloquant pour éviter les sites de liaison non spécifiques. Ajoutez des anticorps primaires qui ciblent γH2AX et 8-OHdG dans les cellules cardiaques.

Ensuite, ajoutez deux anticorps secondaires marqués par fluorescence de couleurs différentes qui se lient spécifiquement à la région Fc de leur anticorps primaire respectif. Enfin, colorez l’échantillon ave