Spectroscopie UV-Visible pour la surveillance de la formation de caillots de fibrine

En réponse à une plaie, une série de réactions enzymatiques initie la formation d’un réseau protéique insoluble – un caillot de fibrine – qui scelle les vaisseaux sanguins et empêche la perte excessive de sang.

Pour surveiller la formation de caillots de fibrine in vitro, commencez par utiliser une plaque multipuits contenant un tampon de formation de caillots. Le tampon comprend des ions calcium – un cofacteur – et des fibrinogènes – des glycoprotéines solubles essentielles à la coagulation.

Traitez bien le puits avec les thrombines – une enzyme protéolytique qui initie la réaction.

Insérez la plaque dans un spectrophotomètre UV-visible. Illuminez le puits avec une lumière d’une longueur d’onde de 350 nanomètres et enregistrez l’absorbance de la solution à intervalles réguliers.

Initialement, la lumière incidente traverse la solution claire contenant des fibrinogènes solubles, montrant une absorbance lumineuse minimale et une transmittance maximale. Le détecteur collecte la lumière transmise et génère des spectres montrant l’absorbance en fonction du temps, en corrélation avec la turbidité de la solution.

Au fil du temps, en présence d’ions calcium, la thrombine clive les fibrinog