Les blessures du nerf Epargnée (SNI) Modèle d'allodynie mécanique induite chez la souris

L’objectif global de cette procédure est d’établir un modèle murin de douleur neuropathique suite à une lésion des nerfs périphériques. Ceci est accompli en anesthésant d’abord la souris, en plaçant la patte arrière dans la position appropriée et en exposant le nerf sciatique. Ensuite, une lésion nerveuse définie est introduite en suturant deux branches du nerf sciatique, laissant la troisième branche intacte.

Dans cette vidéo, les nerfs tibial et périnéal commun sont suturés et coupés tandis que le nerf sorel est épargné. Cependant, d’autres combinaisons peuvent être appliquées après une lésion nerveuse. La Misa placée dans un récipient cylindrique sur une table en treillis métallique et laissée habituer la Misa puis testée à l’aide du test de Von Fray, qui permet une mesure quantitative de l’allodynie mécanique induite.

Les filaments Von Fray calibrés sont appliqués dans l’ordre croissant sur la zone latérale du pore opéré. Afin de détecter le seuil mécanique dans le membre postérieur opéré par rapport au membre postérieur non classé, une réponse douloureuse est définie comme un retrait rapide des pores, un tressaillement et/ou un léchage des pores lors de la stimulation du filament. En fin de compte, le développement de l’allodynie mécanique dans la jambe opérée par rapport au côté non évalué peut être visualisé en traçant le seuil mécanique au fil du temps, ce qui permet d’étudier diverses voies moléculaires ou traitements médicamenteux après une lésion nerveuse périphérique.

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des lésions nerveuses périphériques, telles que les voies moléculaires impliquées dans le développement de la douleur neuropathique. De plus, des médicaments visant à entraver le développement de la douleur ou à soulager les symptômes de la douleur peuvent également être testés Deux jours avant l’opération, placez les souris dans des cylindres en plastique de couleur rouge positionnés sur une table en treillis métallique dans une pièce calme, habituez les souris dans les cylindres pendant 15 minutes avant de tester après 15 minutes, vérifiez que les souris sont calmes, puis appliquez les filaments de von fray dans l’ordre croissant, en commençant par le filament de 0,02 gramme. Appliquez d’abord une force sur la zone latérale du pore gauche cinq fois sur une période totale de 30 secondes, et évaluez la réaction de la souris après chaque application, répétez avec le même filament et le pore gauche de l’autre souris, puis recommencez avec le pore droit avant de passer au filament suivant.

Une réaction positive à la douleur est définie comme un retrait soudain des pores, une expansion des orteils et/ou un léchage excessif des pores induit par le filament et une réponse positive dans trois stimuli répétitifs sur cinq est définie comme le seuil de douleur. Anesthésier les animaux par injection intrapéritonéale d’un mélange de kétamine et de xylazine et placer les animaux dans un endroit calme jusqu’à ce qu’ils soient complètement anesthésiés. Vérifiez les réflexes en pinçant le bout de la queue et la pause à l’aide d’une pince à épiler, en vous assurant que les animaux ne réagissent pas avant de continuer.

Ensuite, injectez par voie sous-cutanée 0,5 millilitres de solution saline isotonique avec des antibiotiques afin d’éviter la déshydratation et de prévenir l’infection à l’aide d’un rasoir électrique, rasez le champ opératoire de légèrement en dessous de la zone du genou jusqu’à la zone de la hanche pour les droitiers. Les personnes travaillant avec le membre postérieur gauche peuvent être les plus pratiques. Appliquez la pommade sur les yeux à l’aide d’un coton-tige.

Placez l’animal sur son côté droit et placez le membre postérieur gauche sur une petite plate-forme pour le maintenir surélevé et fixez la patte avec du ruban adhésif. Une fois l’animal positionné, désinfectez le champ opératoire avec des gommages alternés d’éthanol et de bétadine du site chirurgical et laissez sécher, localisez le genou avec le pouce de votre main gauche et utilisez un scalpel pour faire une petite incision dans le sens longitudinal proximal au genou. Ouvrez la peau par dissection émoussée à l’aide de la pointe d’une paire de ciseaux.

Ensuite, placez la souris sous un stéréomicroscope et localisez le vaisseau sanguin clairement visible près du fémur. Séparez ensuite la couche musculaire par dissection émoussée. Si cela est fait correctement, les couches musculaires se sépareront facilement sans aucun saignement, révélant le nerf sciatique juste en dessous des muscles.

Si un saignement se produit en raison d’une lésion d’un vaisseau sanguin voisin, utilisez des cotons-tiges ou des morceaux de gaze pour absorber le sang en appuyant jusqu’à ce que le saignement cesse. Étalez soigneusement les couches musculaires séparées à l’aide d’une pince à épiler numéro deux. Pour visualiser le nerf sciatique, appliquez des écarteurs si nécessaire, identifiez la zone où le nerf sural se ramifie à partir du nerf sciatique.

Le nerf sural est la plus petite des trois branches qui se ramifient vers la droite dans la jambe gauche. Dans C 57 noir, six souris appliquent six sutures zéro étroitement autour des deux autres branches, qui fonctionnent toujours en parallèle. En faisant très attention à ne pas toucher la branche de Sorel.

Saisissez les nerfs à couper sous la suture à l’aide d’une pince à épiler numéro cinq, puis coupez les nerfs d’abord au-dessus puis en dessous de la pince à épiler avec une petite paire de ciseaux pour éviter de tirer sur les nerfs. Une fois les nerfs coupés, coupez les extrémités de la suture à l’aide d’une paire de ciseaux, puis fermez doucement la couche musculaire. L’anneau de suture n’est normalement pas nécessaire.

Ajoutez une goutte de lidocaïne sur la plaie et suturez avec des nœuds chirurgicaux. Vérifiez si la pommade oculaire est toujours suffisante, puis placez la souris dans une cage propre et une serviette en papier. Dans une posture confortable, fournissez de l’eau et de la nourriture facilement accessibles.

Si la pièce est froide. Placez un coussin chauffant sous une partie de la cage après un jour de récupération post-chirurgicale, collectez les mesures de von fray des souris opérées et simulées comme décrit pour la collecte des mesures de base Ici, les résultats du test de Von Fre sur des groupes de quatre à six souris sont présentés à la fois un jour avant la chirurgie, puis tous les jours pendant deux semaines après la chirurgie. Le lendemain de l’opération, les animaux ont développé une hypersensibilité mécanique importante sur le pore opéré ou ipsilatéral, tandis que le pore non opéré ou controlatéral n’est pas affecté.

Le seuil du côté controlatéral est légèrement diminué par rapport aux souris simulées, ce qui indique que l’allodynie de l’IM pourrait survenir à un degré mineur chez les souris opérées. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de localiser et de manipuler les branches du nerf S chez une souris anesthésiée. Le test d’effilochage permet en outre une lecture fonctionnelle quantitative pour tester la réponse d’animaux transgéniques ou de médicaments après une lésion partielle des nerfs périphériques.