Isolement et culture de motoneurones oculomoteurs, trochléaires et spinaux à partir d’un embryon de souris

Prenez une souris transgénique enceinte et retirez chirurgicalement l’utérus avec des embryons contenant des motoneurones marqués par fluorescence.

Transférez l’utérus dans une boîte avec un tampon glacé sous un microscope à fluorescence.

Utilisez la lumière visible pour isoler les embryons.

Retirez le visage et la queue des embryons et orientez-les en position couchée.

À l’aide du signal de fluorescence, faites une incision au niveau du mésencéphale pour exposer les noyaux oculomoteur et trochléaire, qui contiennent des motoneurones.

Isolez le mésencéphale contenant les noyaux.

Ouvrez la face dorsale du cerveau postérieur et de la moelle épinière. Isolez la moelle épinière, excisez les deux extrémités et collectez les colonnes contenant les motoneurones de la colonne vertébrale.

Traitez les tissus collectés avec des enzymes pour dissocier la matrice tissulaire. Récoltez les cellules uniques et isolez les neurones marqués par fluorescence à l’aide de FACS.

Ajoutez un milieu de culture aux neurones isolés, transférez les cellules sur une microplaque recouverte d’un substrat de culture et incubez, permettant aux cellules d’adhérer et de se développer.

Maintenir les motoneurones en cu