Co-culture d’un explant de ganglion de la racine dorsale avec des cellules de Schwann pour la myélinisation des neurones

Commencez avec une plaque multipuits contenant une lamelle recouverte de poly-D-lysine et un milieu de croissance neuronale.

Placez le ganglion de la racine dorsale embryonnaire de souris, ou DRG, riche en neurones sensoriels, dans ce puits et incuber.

Les neurones DRG utilisent les nutriments et les facteurs de croissance qui facilitent leur croissance, suivie de l’extension des projections neuronales, formant les axones.

Ces axones se développent à partir du tissu DRG, établissant la culture d’explant DRG.

Remplacez le milieu par un milieu de co-culture enrichi en acide ascorbique avec des cellules de Schwann, une cellule gliale spécialisée.

Au fil du temps, les axones sécrètent des molécules de signalisation qui déclenchent la migration des cellules de Schwann vers les axones.

Pendant ce temps, l’acide ascorbique stimule diverses voies de signalisation dans les cellules de Schwann.

Ces cellules activées commencent à étendre leurs membranes plasmiques riches en lipides autour des axones, les enveloppant dans plusieurs couches pour former la gaine de myéline.

Cette myélinisation se traduit par une couverture isolante autour des axones, ce qui est essentiel pour une communication neuronale efficace.

Prenez une plaque à quatre puits contenant 190 microlitres de milieu de croissance DRG dans chaque puits et transférez soigneusement un seul DRG au centre de chaque puits à l’aide d’une pince fine et d’une spatule. Ensuite, placez les cultures d’explants DRG dans l’incubateur à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone. Le lendemain, ajoutez soigneusement 50 microlitres de milieu de croissance DRG dans chaque puits et observez quotidiennement l’adhérence de l’explant DRG et la croissance axonale à l’aide d’un microscope. Pour la co-culture le troisième jour de la culture d’explant DRG, remplacer soigneusement le milieu de croissance DRG par 250 microlitres du milieu de co-culture contenant 30 000 cellules de Schwann par puits.