Isolement des neurones sensoriels et co-culture avec des cellules tueuses naturelles

Prenez un ganglion de la racine dorsale ou DRG, un groupe de neurones sensoriels, dans un milieu froid contenant du sérum pour protéger les neurones pendant le traitement ultérieur.

Centrifugez, puis retirez le surnageant.

Ajoutez un tampon phosphate contenant des enzymes digestives et incubez avec une légère agitation.

Les enzymes dissocient la matrice extracellulaire, ou ECM, et le tissu DRG, relâchant ainsi les cellules.

Ajoutez un milieu contenant du sérum pour inactiver les enzymes.

Centrifugez, puis jetez le surnageant.

Remettre le DRG en suspension et dissocier mécaniquement le tissu à l’aide de pipettes de tailles progressivement plus petites pour obtenir une suspension cellulaire.

Superposez les cellules sur un gradient de densité d’albumine sérique bovine.

centrifugeuse. Les neurones se déposent au fond, formant une cuille.

Jetez les couches contenant des débris de tissus.

Remettez les neurones en suspension dans un milieu de culture.

Ajoutez les neurones dans une boîte de culture recouverte d’ECM et incuber.

Retirez le milieu et ajoutez des cellules tueuses naturelles ou NK.

Ajoutez un milieu de co-culture et étudiez l’interaction entre ces cellules.

Récoltez les DRG dan