Induire une lésion cérébrale traumatique pénétrante chez les mouches drosophiles adultes

Prenez des mouches Drosophila adultes nouvellement émergées, génétiquement modifiées.

Les corps de champignons dans le cerveau de la mouche contiennent des neurones qui expriment des protéines fluorescentes vertes.

Les corps champignon sont des structures contenant des réseaux neuronaux complexes essentiels à l’apprentissage et à la mémoire.

Anesthésie les mouches sur un tampon à dioxyde de carbone.

Sous un stéréomicroscope équipé des filtres requis, visualisez les corps des champignons exprimant la fluorescence verte.

Prenez une goupille Minutien aseptisée et poussez-la à travers la capsule céphalique dans le corps du champignon.

Cela endommage les neurones du corps des champignons et perturbe les réseaux neuronaux, infligeant des lésions cérébrales traumatiques pénétrantes.

Ensuite, retirez délicatement la goupille de la mouche.

Placez les mouches blessées dans un flacon avec de la nourriture et laissez-les récupérer pour des études ultérieures.

Après avoir anesthésié les mouches sur une plaque de dioxyde de carbone, triez les jeunes mouches mâles F1 nouvellement fermées dans les six heures suivant l’éclosion et placez-les dans des flacons propres contenant de la nourriture avec 40 mouches ou moins par flacon. Ensuite, désinfectez les broches minutien en plaçant environ 100 broches dans un tube de microcentrifugation de 1,5 millilitre rempli d’éthanol à 70 % pendant cinq minutes. Ensuite, désinfectez le tampon de dioxyde de carbone dans un pinceau en vaporisant de l’éthanol à 70 % et en l’essuyant avec un mouchoir propre et non pelucheux.

Une fois que les outils sont propres et secs, transférez 40 mâles F1 triés ou moins sur le tampon propre et séparez-les en deux groupes. Un groupe servira de témoin des mouches non blessées, et le deuxième groupe expérimental sera soumis à une lésion cérébrale traumatique pénétrante. Ensuite, à l’aide d’une pince, retirez quatre à cinq nouvelles broches minutieuses du tube de la microcentrifugeuse et placez-les près du bord du tampon de dioxyde de carbone. Ensuite, sous la lunette de dissection, choisissez une épingle minutien droite avec une pointe acérée. Réutilisez les broches pointues et placez les broches endommagées ou émoussées dans un tube séparé contenant 70 % d’éthanol pour une élimination en toute sécurité.

Ensuite, pour les mouches avec le génotype croisé standard, allumez la lampe LED du stéréomicroscope équipée des filtres d’excitation et d’émission appropriés pour la protéine fluorescente verte, qui permet l’excitation à 440 à 460 nanomètres et permet la visualisation à 500 à 560 nanomètres. Ensuite, choisissez une mouche dans le groupe expérimental et positionnez-la de manière à ce que l’expérimentateur ait une vue dorsale de la capsule céphalique avec la tête de la mouche vers la droite. À l’aide d’une pince, prenez et maintenez l’épingle de minutien sélectionnée dans une main et le pinceau dans l’autre main. Ensuite, placez la brosse à l’intérieur du thorax dorsal et appuyez doucement vers le bas pour stabiliser la mouche

Dirigez l’extrémité de l’épingle minutien vers les corps des champignons, les corps cellulaires du côté droit de la tête et pénétrez la capsule céphalique. Si vous utilisez des points de repère, ciblez la cuticule de la tête dorsale entre les ocelles et le bord dorsal de l’œil. Une fois la blessure terminée, utilisez le pinceau pour pousser doucement la tête hors de la goupille de minutie. Si vous utilisez le cerveau pour le séquençage de l’ARN ou la qRT-PCR, faites une deuxième blessure sur le côté gauche de la tête. Une fois que toutes les mouches expérimentales ont été blessées, placez les mouches témoins et les mouches blessées dans des flacons étiquetés séparés contenant de la nourriture.