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DOI: 10.3791/51579-v
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Les niveaux d’hème intracellulaire modifiés sont associés à des maladies courantes telles que le cancer. Il est donc nécessaire de mesurer les niveaux de biosynthèse de l’hème dans diverses cellules. L’objectif de ce protocole est de fournir une méthode rapide et sensible pour mesurer et comparer les niveaux de synthèse de l’hème dans différentes cellules.
L’objectif global de cette procédure est de mesurer les niveaux de synthèse de l’hème dans les cellules de mammifères en utilisant un précurseur radioactif spécifique de la synthèse de l’hème. Ceci est accompli en incubant d’abord les cellules avec cinq acides immuno-liline marqués au C-14, qui seront incorporés dans l’hème. La deuxième étape consiste à collecter les cellules par grattage, puis à les poux à l’aide d’un tampon d’extraction d’hème.
Ensuite, l’éther dathylique est ajouté pour extraire l’hème et la phase éther est collectée. La dernière étape consiste à laver la phase éther avec de l’acide chlorhydrique pour séparer les porphyrines de l’hème. En fin de compte, les niveaux de synthèse de l’hème peuvent être mesurés dans les lignées cellulaires, et les résultats montrent les niveaux différentiels de synthèse de l’hème et de diverses cellules cancéreuses et cellules T HK 2 93.
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