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Mesure des niveaux Heme synthèse dans des cellules de mammifères
Mesure des niveaux Heme synthèse dans des cellules de mammifères
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JoVE Journal Biology
Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Mesure des niveaux Heme synthèse dans des cellules de mammifères

Full Text
12,557 Views
09:43 min
July 9, 2015

DOI: 10.3791/51579-v

Jagmohan Hooda1, Maksudul Alam1, Li Zhang1

1Department of Molecular and Cell Biology, Center for Systems Biology,University of Texas at Dallas

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Les niveaux d’hème intracellulaire modifiés sont associés à des maladies courantes telles que le cancer. Il est donc nécessaire de mesurer les niveaux de biosynthèse de l’hème dans diverses cellules. L’objectif de ce protocole est de fournir une méthode rapide et sensible pour mesurer et comparer les niveaux de synthèse de l’hème dans différentes cellules.

L’objectif global de cette procédure est de mesurer les niveaux de synthèse de l’hème dans les cellules de mammifères en utilisant un précurseur radioactif spécifique de la synthèse de l’hème. Ceci est accompli en incubant d’abord les cellules avec cinq acides immuno-liline marqués au C-14, qui seront incorporés dans l’hème. La deuxième étape consiste à collecter les cellules par grattage, puis à les poux à l’aide d’un tampon d’extraction d’hème.

Ensuite, l’éther dathylique est ajouté pour extraire l’hème et la phase éther est collectée. La dernière étape consiste à laver la phase éther avec de l’acide chlorhydrique pour séparer les porphyrines de l’hème. En fin de compte, les niveaux de synthèse de l’hème peuvent être mesurés dans les lignées cellulaires, et les résultats montrent les niveaux différentiels de synthèse de l’hème et de diverses cellules cancéreuses et cellules T HK 2 93.

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