Recouvrement des adultes coeurs de poisson zèbre à haut débit pour des applications

L’objectif global de cette procédure est de disséquer rapidement et de manière fiable les cœurs de poissons-zèbres adultes pour des applications en aval. Pour ce faire, il faut d’abord euthanasier le poisson-zèbre adulte et le réparer si nécessaire. Ensuite, le poisson est décapité.

Ensuite, l’aorte dorsale est coupée et les nageoires avec les os sous-jacents sont retirées. Enfin, le cœur est retiré du tissu restant et placé dans un tampon de destination de son choix. En fin de compte, la microscopie est utilisée pour montrer la récupération de cœurs intacts pour une analyse plus approfondie.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes est qu’elle permet d’obtenir rapidement et de manière reproductible des cœurs entièrement intacts. Avant d’effectuer la dissection, préparez les tampons et les solutions suivants. 500 millilitres d’eau d’œuf, 200 millilitres de trica à 0,03 % dans l’eau d’œuf, 100 millilitres d’une lyse X-P-B-S-R-B-C, un tampon et un tampon de destination de choix dans un tube de micro-fuge sur glace.

Pour la configuration de la dissection. Commencez par positionner une source lumineuse en col de cygne au-dessus d’un microscope à dissection. Placez le couvercle d’une boîte de Pétri de neuf centimètres sur la platine du microscope de dissection et versez-y une fine couche d’un XPBS pour laver le cœur après la dissection, placez le fond de la boîte de Pétri avec environ 15 millilitres d’un XPBS sur le comptoir.

Près de la lunette de dissection, placez une lame de rasoir, deux paires de pinces, des micro-ciseaux en option et une pipette de transfert. À côté du microscope, préparez un récipient de glace si l’euthanasie par refroidissement rapide doit être effectuée pour euthanasier à l’aide de trica. Versez 200 millilitres de trica dans de l’eau d’œuf dans un haut-parleur en verre de 250 millilitres. Préparez un sac à risque biologique pour l’élimination des carcasses de poisson-zèbre.

Après avoir euthanasié un poisson par refroidissement rapide ou trica, prenez rapidement le poisson par sa nageoire caudale et posez-le sur le côté dans le couvercle de la boîte de Pétri remplie d’un XPBS. Utilisez la pince pour soulever une nageoire pectorale d’une main tandis que l’utilisation de la lame de rasoir dans l’autre main, positionnez-la juste derrière l’attache du pectoral. Nageoire pour décapiter le poisson tout en visualisant la tête du poisson au microscope.

Placez une pince dans la bouche du poisson à travers le cerveau, et positionnez l’autre pince à l’extérieur de la tête en travers de l’œil pour la stabiliser avec la boîte de Pétri contre le fond de la boîte de Pétri et la surface ventrale de la tête vers le haut. À l’aide d’une deuxième pince, coupez l’attache ventrale de l’opercule au corps. Ensuite, soulevez légèrement le tissu pour exposer l’aorte dorsale en dessous, qui apparaît comme une structure blanche avec une bande rouge de sang dans la lumière aortique.

Ensuite, à l’aide d’une pince, vous coupez l’aorte dorsale en pinçant l’aorte et en tirant vers le haut. Utilisez la deuxième pince pour saisir la nageoire pectorale à partir de sa base, y compris le cartilage du corps à la base de la nageoire, et soulevez-la, en examinant soigneusement la nageoire pour vous assurer que le cœur n’est pas sorti avec. Le cœur devrait maintenant être visible, toujours intact et relié à la tête de poisson restante.

Relâchez maintenant la tête du poisson avec la première pince et utilisez les deux pinces pour éloigner le cœur du péricarde avant de saisir le reste de l’aorte dorsale à l’aide d’une pince. Saisissez le cœur par le bord de l’aorte dorsale ou de l’artériose bulbeuse et placez-le dans le plat frais d’un XPBS, en le déplaçant d’avant en arrière dans le tampon pour éliminer autant de sang que possible. Alternativement, pour éliminer toutes les cellules sanguines possibles, utilisez une boîte de tampon de lyse RBC pour laver le cœur de la même manière.

Si la préservation du cœur n’est pas nécessaire pour les applications en aval, utilisez des pinces ou des micro-ciseaux pour ouvrir la cavité cardiaque avant de rincer les cellules sanguines. Si des cavités cardiaques séparées sont nécessaires, disséquez le ventricule de l’oreillette et le bulbus artériel à l’écart l’un de l’autre. Enfin, transférez le cœur ou les cavités séparées dans leur prochain tampon sur de la glace.

En utilisant la méthode décrite dans cette vidéo, un cœur de poisson-zèbre adulte peut être disséqué en moins d’une minute et est intact de manière fiable. Les méthodes traditionnelles peuvent prendre plus de cinq minutes et nécessitent de couper à l’aveuglette dans le péricarde. Cela provoque généralement des dommages ou une perte de l’oreillette ou de l’artériose bulbeuse en utilisant la méthode décrite. Ici.

Les cœurs conservent leur intégrité structurelle et conviennent à l’histologie. Par exemple, les valves ventriculaires extraterrestres et auriculaires sont identifiables dans cette section. De plus, comme on le voit ici, les cœurs conviennent aussi bien à la microscopie électronique qu’aux applications où le cœur est dissocié ou pulvérisé.

Cette technique est rapidement maîtrisée et convient aux poissons-zèbres juvéniles de plus d’un mois, et aux adultes de tous âges. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de disséquer efficacement les cœurs de poissons-zèbres adultes.