Blessure chirurgicale au pancréas de souris par ligature du canal pancréatique tant que modèle de endocrines et exocrines Reprogrammation et prolifération

L’objectif global de cette procédure est d’induire des lésions graves dans le pancréas adulte du rongeur afin d’établir un environnement qui permet la néogenèse et la prolifération des cellules bêta. Ceci est accompli en effectuant d’abord une laparotomie médiane pour permettre l’exposition du pancréas. Le canal pancréatique principal dans la région du cou du pancréas est ensuite ligaturé à l’aide de deux nœuds chirurgicaux.

Dans la dernière étape, la ligature partielle du canal ou pancréas PDL est prélevée. Enfin, l’analyse immunohistochimique et Q-R-T-P-C-R sont utilisées pour étudier les facteurs impliqués dans le remodelage tissulaire, la prolifération endocrinienne et la néogenèse induites par la ligature partielle des canaux. Le principal avantage de cette technique par rapport à d’autres modèles de lésions pancréatiques, tels que la pancréatectomie et l’ablation chimique des cellules bêta, est que la ligature partielle du canal est une procédure simple qui n’implique pas l’ablation du tissu pancréatique ou la destruction des cellules bêta.

La ligature partielle des canaux due au pancréas des rats a été introduite dans notre institut il y a plus de 20 ans. Nous avons appliqué cette technique à des souris pour faciliter le traçage de la lignée cellulaire génétique, ainsi que les expériences de perte et de gain de fonction. Pour évaluer le mécanisme derrière la génération de cellules bêta dans ces conditions expérimentales, avant de commencer la procédure, désinfectez le thorax, un abdomen d’une souris anesthésiée de huit semaines avec une solution antiseptique de chlorhexidine.

Ensuite, rasez une section de l’abdomen de 2,5 x 1,5 centimètre et désinfectez le site chirurgical avec des gommages alternés d’antiseptique et d’éthanol. Après le dernier gommage, confirmez la profondeur appropriée de l’anesthésie par l’orteil. Pincez puis drapez l’animal.

Ensuite, utilisez une lame stérile pour faire une incision médiane supérieure dans la peau, s’étendant de l’apophyse xiphoïde à l’ombilic à l’aide de ciseaux stériles. Séparez le coude linéaire sous-jacent et le péritoine pour exposer le quadrant abdominal supérieur. Rétractez ensuite l’estomac vers le haut pour exposer la rate.

Ensuite, exposez le lobe splénique ou la région de la queue du pancréas. Ensuite, rétractez doucement le duodénum et une partie du jéjunum supérieur vers le quadrant abdominal supérieur droit pour exposer la tête, le cou et le corps du pancréas. Localisez le conduit principal du pancréas dans la région du cou du pancréas.

La région du corps et de la queue du pancréas est maintenant exposée pour ligaturer le canal pancréatique. Placez soigneusement une aiguille de suture 6.0 sous la région du cou et ligaturez le côté gauche de la veine porte, en séparant les lobes gastroduodénal et splénique. Placez une deuxième ligature à proximité de la première pour vous assurer que les lobes sont correctement séparés.

Ensuite, retournez les organes dans la cavité abdominale et utilisez quatre fils filamenteux de poly glycol zéro pour fermer la couche musculaire dans un motif de suture continu. Enfin, fermez la peau avec une suture discontinue et surveillez l’animal jusqu’à ce qu’il soit complètement rétabli. Le pancréas PDL sera réduit en taille et apparaîtra presque translucide.

Avec les œillets apparaissant comme de petits points blancs, la tête du pancréas apparaîtra de couleur rose opaque, permettant l’identification de la LOI exocrine distincte à l’aide de ciseaux stériles. Coupez le long de la rate pour séparer la queue ligaturée du pancréas de la rate et du tissu conjonctif reliant la queue du pancréas aux organes internes. Coupez ensuite la queue du L immédiatement devant l’ation.

Isolez le tissu de la queue factice de la même manière. Notez cependant que la région de la queue et de la tête du pancréas factice sont rose opaque. Pour isoler les deux parties séparément, coupez le pancréas ligaturé simulé dans la région du cou.

Lorsque la LDP est effectuée correctement, les souris semblent en bonne santé et ne présentent pas de différence significative de poids corporel ou de glycémie. Par rapport aux animaux opérés simulés, le tissu exocrine asar est perdu progressivement après la chirurgie L, ce qui entraîne une réduction de la taille et du poids de la queue ligaturée L trois jours après que la morphologie du tissu PDL Thein R soit perturbée avec une apoptose apparente des cellules asar. Au bout d’une semaine, le tissu pancréatique est englouti par l’infiltration de cellules immunitaires positives au CD 45.

Après deux semaines, de nombreux lobules RS de l’ASIN sont remplacés par du tissu fibreux et adipeux, ce qui provoque l’apparition translucide du pancréas de la queue L et permet aux œillets de devenir visibles à l’œil nu. Coïncidant avec l’initiation de l’apoptose asar, une augmentation de l’activité cellulaire de l’épithélium ductile est également observée. De plus, deux semaines après la PDL, le volume total des cellules bêta dans la queue de la PDL double par rapport à celui observé dans la queue fictive non ligaturée, ce qui s’accompagne d’une augmentation de la prolifération des cellules bêta, d’une activation du neurogène du marqueur progéniteur endocrinien embryonnaire chez trois.

Lors de la tentative de cette procédure, il est important d’utiliser la technique d’asepsie appropriée pour chaque étape de la chirurgie et d’effectuer la ligature du canal pancréatique avec le moins de dommages possible aux artères sous-jacentes et aux tissus environnants. Suite à cette procédure, d’autres méthodes telles que le traçage de la lignée chez des souris transgéniques ligaturées par canal partiel peuvent être effectuées afin de répondre à des questions supplémentaires sur le devenir et l’origine des cellules. Après le L.