Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

Miguel A. Lopez-Ramirez; Charles-F&#233;lix Calvo; Emma Ristori; Jean-L&#233;on Thomas; Stefania Nicoli

doi:10.3791/53617

Isolement et culture de neurosphères Adult Zebrafish Brain-dérivés

JoVE Journal
Developmental Biology

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Isolation and Culture of Adult Zebrafish Brain-derived Neurospheres

Isolement et culture de neurosphères Adult Zebrafish Brain-dérivés

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11:01 min

February 29, 2016

DOI: 10.3791/53617-v

Miguel A. Lopez-Ramirez*^1,2, Charles-Félix Calvo*³, Emma Ristori¹, Jean-Léon Thomas^1,3, Stefania Nicoli¹

¹Yale Cardiovascular Research Center, Internal Medicine,Yale University, ²Department of Medicine,University of California, San Diego, ³APHP Groupe Hospitalier Pitié-Salpètrière,Université Pierre and Marie Curie

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a reproducible method for examining adult neurogenesis through a neurosphere assay derived from the adult zebrafish brain. The procedure also includes techniques for manipulating gene expression in zebrafish neurospheres.

Key Study Components

Area of Science

Neuroscience
Neurogenesis
Gene Expression

Background

The study focuses on adult neurogenesis in zebrafish.
Neurosphere assays are utilized to derive neural stem progenitor cells.
The method adapts existing protocols from mouse models.
Understanding neural stem cell properties is crucial for neurogenesis research.

Purpose of Study

To investigate mechanisms driving neural stem cell self-renewal.
To explore the determination of neural stem cells.
To provide a reliable method for studying neurogenesis in vitro.

Methods Used

Preparation of a dissection bed using gel packs.
Incubation of the dissection setup at 20 degrees Celsius.
Isolation of neurospheres from various brain regions.
Manipulation of gene expression in derived neurospheres.

Main Results

The method successfully isolates neural stem progenitor cells.
Gene expression manipulation is feasible in zebrafish neurospheres.
The technique is simple and reliable for neurogenesis studies.
Insights into epigenetic regulation in the zebrafish brain are gained.

Conclusions

This method enhances understanding of adult neurogenesis.
It provides a platform for further research on neural stem cells.
Future studies can build on this technique for various applications.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this neurosphere assay?

The main advantage is its simplicity and reliability in isolating neural stem progenitor cells from the zebrafish brain.

How does this method contribute to neurogenesis research?

It allows researchers to manipulate gene expression and study the mechanisms of neural stem cell self-renewal.

What temperature is required for the dissection setup?

The dissection setup should be incubated at 20 degrees Celsius.

Can this method be adapted for other species?

While this method is specifically designed for zebrafish, adaptations may be possible for other species based on existing protocols.

What regions of the zebrafish brain can be used for the assay?

The assay can be derived from the whole brain or specific regions such as the telencephalic, tectal, or cerebellar areas.

What insights can be gained from this research?

The research can provide insights into the epigenetic regulation of neural stem cells and their properties in vitro.

Ici, nous fournissons une méthode reproductible pour examiner la neurogenèse adulte en utilisant un essai de neurosphères dérivées de l'ensemble du cerveau ou de l'une ou l'autre télencéphalique, tectale ou des régions cérébelleuses du cerveau adulte de poisson zèbre. En outre, nous décrivons la procédure de manipuler l'expression des gènes dans les neurosphères de poisson zèbre.

L’objectif global de cette procédure est d’examiner la neurogenèse adulte à l’aide d’un test de neurosphère dérivé du cerveau du poisson zèbre adulte, et de manipuler l’expression des gènes dans les neurosphères du poisson-zèbre. Ainsi, cette méthode peut aider à répondre à une question clé de la neurogenèse, et, en particulier, au mécanisme clé qui conduit à l’auto-renouvellement des cellules souches neurales et à la détermination de cette cellule. Le principal avantage de cette technique est qu’elle est assez simple, qu’elle est fiable et qu’elle aidera à obtenir une cellule progénitrice neurale à partir du cerveau du poisson-zèbre et à comprendre leurs propriétés in vitro.

Nous avons donc d’abord ajouté l’idée de cette méthode, lorsque nous étudiions la régulation épigénétique dans le cerveau en développement du poisson zèbre, et en utilisant nos précédents experts, nous avons adapté le protocole de la neurosphère de la souris au poisson zèbre. Pour commencer, préparez un lit de dissection en remplissant une boîte de Pétri avec des packs de gel. Ensuite, couvrez le plat avec son couvercle correspondant et incubez-le à 20 degrés Celsius.

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