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DOI: 10.3791/53877-v
Leigh Ann Samsa1,2, Nicole Fleming2,3, Scott Magness1, Li Qian2,3, Jiandong Liu2,3
1Department of Cell Biology and Physiology,University of North Carolina at Chapel Hill, 2McAllister Heart Institute,University of North Carolina at Chapel Hill, 3Department of Pathology and Laboratory Medicine,University of North Carolina at Chapel Hill
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol describes a method for isolating single cells from zebrafish embryos, enriching for cells of interest, and assessing gene expression from single cells using a microfluidic-based system. This technique reveals cellular heterogeneity that is often masked in traditional population-based methods.
Ce protocole décrit une méthode pour isoler des cellules uniques à partir d’embryons de poisson-zèbre, enrichir pour des cellules d’intérêt, capturer des cellules de poisson-zèbre dans des systèmes de multiplexage de cellules uniques basés sur la microfluidique, et évaluer l’expression génique à partir de cellules uniques.
L’objectif global de cette expérience est d’isoler des cellules uniques d’embryons de poisson-zèbre à un stade précoce pour leur capture dans un système multiplex de cellules uniques basé sur la microfluidique afin d’évaluer l’expression génique des cellules individuelles. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie du développement, telles que les changements transcriptionnels que subissent les cellules lors de la spécification et de la différenciation. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une approche impartiale pour révéler l’hétérogénéité qui est masquée dans les techniques conventionnelles basées sur la population.
En général, les personnes qui ne connaissent pas cette technique auront du mal, car la génération de préparations viables de cellules uniques est techniquement difficile, mais essentielle pour l’analyse en aval. Une fois maîtrisé, le traitement des échantillons d’embryons entiers en cellules lysées uniques sur une puce microfluidique intégrée peut être terminé en six heures si les étapes sont effectuées correctement. Lors de la tentative de cette procédure, il est important de ne pas oublier de s’assurer que seules des cellules uniques sont capturées sur le dispositif microfluidique.
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