Name: Isolement et caractérisation de cellules isolées à partir dembryons de poisson zèbre (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Apprenez à isoler des cellules uniques à partir d'embryons de poisson zèbre pour analyser l'expression génique individuelle. Cette méthode microfluidique révèle l'hétérogénéité cellulaire masquée dans les approches populationnelles classiques.

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Nous remercions le Dr C. Geoffrey Burns pour le stock de poissons. Les auteurs sont reconnaissants à l’UNC Flow Cytometry Core Facility, à l’UNC-CGIBD AAC pour les ressources qui ont permis ce projet, et à l’installation ZAC pour les soins aux animaux. L.S. est soutenu par la subvention NIH T32 HL069768-13 (PI, Nobuyo Maeda). N.F. est soutenu par la bourse de recherche supérieure NSF NSF-DGE-1144081. Cette étude a été financée par la subvention P30DK034987 des NIH (à UNC Advanced Analytics Core), la subvention de développement scientifique 13SDG17060010 de l’American Heart Association et la subvention de New Scholar de la Fondation Ellison Medical AG-NS-1064-13 (au Dr Qian) et la subvention HL109079 R00 du NIH (au Dr Liu).

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<li>de Pater, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+phases+of+cardiomyocyte+differentiation+regulate+growth+of+the+zebrafish+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct phases of cardiomyocyte differentiation regulate growth of the zebrafish heart.</a> Development. 136, 1633-1641 (2009).</li>
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<li>Yelon, D., Horne, S. A., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restricted+expression+of+cardiac+myosin+genes+reveals+regulated+aspects+of+heart+tube+assembly+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Restricted expression of cardiac myosin genes reveals regulated aspects of heart tube assembly in zebrafish.</a> Developmental biology. 214, 23-37 (1999).</li>
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</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le procédé décrit ici utilise l&#39;expression d&#39;une protéine fluorescente sous le contrôle d&#39;un promoteur spécifique de type cellulaire pour enrichir une population de cellules souches cardiaques à partir d&#39;embryons de poisson zèbre pour une utilisation dans microfluidique système assisté de capture de cellule unique pour évaluer l&#39;expression d&#39;un sous-ensemble de gènes cardiaques en simple cellules. À condition que FACS excitation laser et d&#39;émission de capacités sont compatibles avec le fluoro...

La plupart des études actuelles de biologie cellulaire et moléculaire sont basées sur des moyennes de la population. Cependant, les événements biologiques importants peuvent être masqués par ces analyses basées sur la population traditionnelle puisque les populations mineures peuvent jouer un rôle majeur dans les processus biologiques et les résultats de la maladie. Comprendre l&#39; expression des gènes dans les populations hétérogènes au niveau de la cellule unique peut (et a) conduire à des idées biologiques et cliniques pertinentes 1,2. Une préoccupation pour les études de développement embryonnaire, dans une plus grande population de cellules, les cellules progénitrices sont souvent sous - représentées, ce qui rend difficile de détecter les changements subtils dans l&#39; expression des gènes qui déclenchent finalement les décisions du destin cellulaire 3. De même, un seul type de cellule peuvent avoir des profils d&#39;expression différents en réponse au microenvironnement 4. Par exemple, les cellules endothéliales résidentes dans le même organe ou dans différents organes (par exemple., De l&#39; aorte ou des reins) présentent une hétérogénéité significative malgré le partage MORP communhological caractéristiques fonctionnelles et 5. En outre, les cellules cancéreuses qui peuplent la même tumeur peuvent également avoir des profils variés ou des mutations moléculaires au niveau cellulaire unique 6. Dans des systèmes modèles, transcriptomique dans des cellules individuelles a réussi à identifier de nouvelles populations de cellules, caractérisé par des états intermédiaires qui se produisent au cours de la différenciation cellulaire, et ont révélé des réponses cellulaires à des stimuli différentielles 7,8,9. Ces idées auraient été masqués dans des études basées sur la population classiques. embryons de poisson zèbre sont une source extrêmement sous-utilisées de la tige, progéniteurs et la différenciation des cellules pour explorer des questions d&#39;hétérogénéité cellulaire unique et la régulation moléculaire des identités cellulaires au cours du développement. Leur très stéréotypée, ex vivo le développement et la facilité de manipulation génétique font un excellent système modèle pour cette approche 10,11. Plus précisément, une limitation majeure à l&#39;interprétation de la cellule unique genles données e d&#39;expression est que l&#39; identification fiable des nouveaux états de cellules intermédiaires au cours du développement exige une synchronisation très prudent de la collecte des tissus 9. Cela est nécessaire pour assurer que l&#39;hétérogénéité entre les cellules capturées représente l&#39;hétérogénéité au sein d&#39;un tissu à un seul point du temps plutôt que de l&#39;hétérogénéité dans l&#39;expression des gènes présenté par la différenciation des cellules dépendant de l&#39;âge. Par rapport à des souris, le développement de l&#39; embryon de poisson zèbre peut être précisément synchronisée à travers un grand nombre d&#39;embryons 12. En outre, avec les grandes tailles d&#39;embrayage, les embryons de poisson zèbre peuvent être utilisés comme une source abondante de cellules souches et progénitrices. Ce protocole décrit une méthode pour isoler des cellules à partir d&#39;embryons de poisson zèbre et de capturer des cellules individuelles en utilisant un circuit de microfluidique intégré (IFC) puce et autoprep système disponible dans le commerce pour qRT-PCR analyse de l&#39;expression génique. Ce protocole peut être rapidement cessible à tous les essais à haut débit de multiplexage, y compris touteséquençage du transcriptome qui permet une analyse plus complète de l&#39; hétérogénéité cellulaire 13. Il offre également plusieurs avantages aux essais traditionnels d&#39;expression génique. Le protocole d&#39;isolement d&#39;une cellule unique donne une viabilité élevée après FACS, ce qui diminue la proportion de cellules compromis qui sont inclus dans les applications en aval. En utilisant un CFI, les cellules capturées peuvent être directement observées pour évaluer les taux de capture et d&#39;évaluer la santé des cellules morphologiquement. En outre, ce protocole est largement applicable à la communauté de recherche zebrafish, exigeant seulement une ligne de poissons transgéniques étiquetés et l&#39;accès aux technologies de capture de cellules microfluidiques. Comme preuve de principe, des cellules individuelles dérivées de progéniteurs cardiaques ont été isolés et capturés sur une puce IFC, puis l&#39;abondance relative des marqueurs de différenciation cardiaque a été mesurée par qRT-PCR. l&#39;analyse de l&#39;expression génique au niveau de la cellule unique démontre que progéniteurs cardiaques coexistent avec leur différeprogéniture ntiating. L&#39;idée tirée de profilage à cellule unique de progéniteurs cardiaques peut faire la lumière sur l&#39;hétérogénéité des profils d&#39;expression génique entre les cellules progénitrices cardiaques au cours du développement des vertébrés, qui peuvent avoir été masqués dans les analyses basées sur la population traditionnelle.

<table><tbody><tr><td>Supplies</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Pince</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>Pour l’ablation du chorion des embryons Tube de</td></tr><tr><td>microcentrifugation 2 ml</td><td>GeneMate</td><td>C-3261-1</td><td></td></tr><tr><td>Passoire à cellules de 40 um</td><td>Biobasic</td><td>SP104151</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de culture de 35 mm</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Tubes FACS surmontés d’une crépine de cellule de 35 um</td><td>Falcon</td><td>352235</td> P1000 et pointes Rainin 17005089 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P20 et pointes</td><td>Rainin</td><td>17005091</td><td></td></tr><tr><td>protocole du fabricant de la puce IFC</td><td>Fluidigm</td><td>100-6117</td><td>Version 100-6117 E1 a été utilisé dans une expérience représentative</td></tr><tr><td>Verre pastuer à large alésage pippette</td><td>VWR</td><td>14673-010</td><td>Pour transfert d’embryons</td></tr><tr><td>Poisson zèbre sauvage adulte</td><td>N/A</td><td></td><td>Nous avons utilisé la lignée AB</td></tr><tr><td>Poisson zèbre transgénique adulte</td><td>N/A</td><td></td><td>Nous avons utilisé Tg(nkx2.5 :ZsYellow)</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Catalog Number</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Réactifs pour la dissociation cellulaire</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Double distilled water</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Instant Ocean Sea Salt</td><td>Instant</td> Ocean <td>SS15-10</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>FisherScientific</td><td>S271-3</td><td>faire du stock dans l’eau et l’utiliser pour le tampon de déjoutage</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5405</td><td>faire du stock dans l’eau et l’utiliser pour le tampon de déjoutage</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6014</td><td>faire stock dans l’eau et utiliser pour le tampon de déjoutage</td></tr><tr><td>Leibovitz’s L-15</td><td>Gibco</td><td>21083-027</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>FisherScientific</td><td>03-600-511</td><td>Chaleur inactivée ; toute marque de FBS doit être fine</td></tr><tr><td>Réactif de dissociation cellulaire 1 -TrypLE</td><td>Life Technologies</td><td>12605-010</td><td>Conserver à température ambiante.</td></tr><tr><td>Réactif de dissociation cellulaire 2 - FACSmax</td><td>Genlantis</td><td>T200100</td><td>Stocker -20 ; décongeler sur de la glace ; amener à température ambiante avant utilisation</td></tr><tr><td>pronase (facultatif)</td><td>Sigma</td><td>P5147</td><td></td></tr><tr><td>L/D Dye - Sytox Blue</td><td>Life Technologies</td><td>S34857</td><td>Toute coloration vivante/morte adaptée à la cytométrie en flux fonctionnera</td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Name </td><td>Company</td><td>Numéro de catalogue</td><td>Comments</td></tr><tr><td> réactifs pour l’utilisation de plaques IFC et de sondes</td> spécifiques à qRT-PCR<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gene</td> Les <td>sondes varieront selon l’expérience</td>TaqMan Probe ef1a Life Technologies Dr03432748_m1 <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Probe gata4</td><td>Life Technologies</td><td>Dr03443262_g1</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Probe nk2-5</td><td>Life Technologies</td><td>Dr03074126_m1</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Probe myl7</td><td>Life Technologies</td><td>Dr03105700_m1</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Probe vmhc</td><td>Life Technologies</td><td>Dr03431136_m1</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Probe isl1</td><td>Life Technologies</td><td>Dr03425734_m1</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Master Mix</td><td>Life Technologies</td><td>4369016</td><td></td></tr><tr><td>Réactifs répertoriés dans le protocole</td><td></td><td></td><td></td>IFC du fabricant</tr><tr><td>C1 Kit de réactifs</td><td>Fluidigm</td><td>100-5319</td><td>Réactifs pour le chargement de cellules sur une plaque IFC</td></tr><tr><td>Ambion Single Cell-to-CTTM</td><td>Life Technologies</td><td>4458237</td><td>Réactifs pour les étapes de transcription inverse et de préamplification</td></tr><tr><td>Biologie moléculaire Qualité Eau</td><td>Corning</td><td>46-000CM</td><td></td></tr><tr><td>C1 IFC pour PréAmpli (5-10 um)</td><td>Fluidigm</td><td>100-5757</td><td>Plaque IFC pour petites cellules</td></tr><tr><td>Nom</td><td>Entreprise</td><td>Numéro de catalogue</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C1 Machine AutoPrep</td><td>Fluidigm</td><td>100-5477</td><td>Pour l’utilisation d’un hémocytomètre sur plaque IFC</td></tr><tr><td>.</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z359629</td><td>Pour le comptage des cellules et l’évaluation</td></tr> de la taille <tr><td>des cellules Microscope</td><td></td><td></td> de dissection <td>Pour le prélèvement d’embryons du chorion</td></tr><tr><td>Microscope</td><td></td><td></td> de culture tissulaire <td>Pour l’évaluation de la digestion de cellules uniques</td></tr><tr><td>Machine</td><td></td><td></td> FACS <td>Pour l’isolement des cellules d’intérêt</td></tr></tbody></table>

isolement et caractérisation de cellules isolées à partir d&#39;embryons de poisson zèbre

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

Le poisson-zèbre (Danio rerio) est un organisme modèle puissant pour étudier le développement des vertébrés. Bien que de nombreux aspects du développement embryonnaire du poisson-zèbre aient été décrits au niveau morphologique, on sait peu de choses sur la base moléculaire des changements cellulaires qui se produisent au fur et à mesure que l’organisme se développe. Grâce aux progrès récents de la microfluidique et des technologies de multiplexage, il est maintenant possible de caractériser l’expression des gènes dans des cellules uniques. Cela permet d’étudier l’hétérogénéité entre les cellules individuelles de populations cellulaires spécifiques afin d’identifier et de classer les sous-types cellulaires, de caractériser les états intermédiaires qui se produisent lors de la différenciation cellulaire et d’explorer les réponses cellulaires différentielles aux stimuli. Cette étude décrit un protocole permettant d’isoler des cellules uniques viables à partir d’embryons de poisson-zèbre pour des tests de multiplexage à haut débit. Cette méthode peut être rapidement appliquée à tout type de cellule embryonnaire de poisson-zèbre avec des marqueurs fluorescents. Une extension de cette méthode peut également être utilisée en combinaison avec des technologies de séquençage à haut débit pour caractériser complètement le transcriptome de cellules uniques. Comme preuve de principe, l’abondance relative des marqueurs de différenciation cardiaque a été évaluée dans des cellules uniques isolées dérivées de progéniteurs cardiaques positifs nkx2.5. En évaluant l’expression génique au niveau de la cellule unique et à un seul point temporel, les données soutiennent un modèle dans lequel les progéniteurs cardiaques coexistent avec une descendance différenciante. La méthode et le flux de travail décrits ici sont largement applicables à la communauté de recherche sur le poisson-zèbre, ne nécessitant qu’une lignée de poisson transgénique étiquetée et un accès aux technologies de microfluidique.

Comme preuve de principe, l&#39;expression des gènes a été évaluée pour explorer la dynamique de différenciation au cours du développement cardiaque. Chez le poisson zèbre, les progéniteurs cardiaques proviennent d&#39;une population mésodermique de cellules qui migrent vers la plaque latérale mésoderme antérieure où ils fusionnent pour former le tube cardiaque linéaire. Avant la fusion, les progéniteurs cardiaques commencent à exprimer le Nkx2.5 facteur de transcription (NK2 ho...

Ce protocole décrit une méthode pour isoler des cellules uniques à partir d’embryons de poisson-zèbre, enrichir pour des cellules d’intérêt, capturer des cellules de poisson-zèbre dans des systèmes de multiplexage de cellules uniques basés sur la microfluidique, et évaluer l’expression génique à partir de cellules uniques.

Isolement et caractérisation de cellules isolées à partir d&#39;embryons de poisson zèbre

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

L'objectif général de cette expérience est d'isoler des cellules individuelles à partir d'embryons de poisson zèbre à un stade précoce afin de les capturer dans un système multiplexe de cellule unique basé sur la microfluidique, dans le but d'évaluer l'expression génique de cellules individuelles. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la biologie du développement, telles que les changements transcriptionnels que subissent les cellules durant la spécification et la différenciation. Le principal avantage de cette technique réside dans son approche impartiale permettant de révéler l'hétérogénéité masquée par les techniques conventionnelles basées sur des populations cellulaires.En général, les personnes novices dans cette technique éprouveront des difficultés, car la préparation de cellules individuelles viables est techniquement exigeante mais essentielle pour les analyses en aval. Une fois maîtrisée, la transformation d'échantillons d'embryons entiers en cellules individuelles lysées sur une puce microfluidique intégrée peut être réalisée en six heures, à condition que les étapes soient correctement exécutées. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de veiller à ce que seules des cellules individuelles soient capturées sur le dispositif microfluidique.Après avoir croisé des zebrafish adultes de type sauvage et transgéniques, recueillir les embryons à des intervalles de 15 minutes conformément aux procédures opérationnelles standard approuvées par l'établissement. Deux heures au moins plus tard, transférer de 100 à 300 embryons fécondés issus d'un même point temporel dans une nouvelle boîte de Pétri contenant de l'eau pour œufs fraîche. Puis utiliser une pince fine pour retirer manuellement la chorioine de chaque embryon.Ensuite, utilisez une pipette en verre à large orifice pour transférer les embryons dans un tube microcentrifuge de 2 millilitres avec un volume minimal d'eau pour œufs. Une fois tous les embryons transférés, remplacez l'eau par 1 millilitre d'eau pour œufs glacée et immergez le tube dans de la glace pendant 20 minutes. Après l'euthanasie, utilisez une pipette en verre à large orifice pour éliminer le surnageant.Et une pipette P-1000 pour ajouter deux fois de l’eau fraîche pour œufs aux embryons. Après le deuxième lavage, remplacer l’eau pour œufs par 1 millilitre de tampon de déyolquage et utiliser une pipette P-1000 pour triturer les embryons de huit à douze fois jusqu’à ce que le vitellus soit dissous et que seuls les corps des embryons soient visibles. Recueillir le tissu par centrifugation.Ensuite, utilisez la pipette pour éliminer délicatement le surnageant sans perturber le culot tissulaire, puis remettez en suspension les cellules dans 1 millilitre d'eau d'œufs fraîche. Après avoir lavé les embryons deux fois supplémentaires, remettez le culot en suspension dans 1 millilitre de réactif de dissociation cellulaire-1 à température ambiante. Placez ensuite le tube sur le côté pendant une incubation de 10 minutes à température ambiante.Avec une trituration douce toutes les deux à trois minutes pour éviter l'agglutination. À la fin de l'incubation, centrifuger à nouveau les cellules et re-suspendre le culot dans 1 millilitre de réactif de dissociation cellulaire-2. Incuber les cellules horizontalement à température ambiante pendant cinq à 15 minutes supplémentaires avec une trituration douce toutes les deux à trois minutes.Toutes les cinq minutes, diluez 2 microlitres de surnageant dans 18 microlitres de tampon FACS, puis déposez les cellules sous forme de goutte sur une boîte de culture cellulaire. Placez une lame couvre-objet sur l'échantillon et utilisez un microscope de culture tissulaire pour évaluer l'avancement de la digestion aux grossissements 10 et 20x. Lorsque la préparation semble composée principalement de cellules isolées, accompagnées de quelques petits et grands agrégats cellulaires ainsi que de quelques embryons encore majoritairement intacts, centrifugez les cellules et remettez en suspension le culot dans 1 millilitre de tampon FACS froid.Ensuite, humidifiez un tamis cellulaire de 40 microns avec du tampon FACS. Filtrez les cellules à travers le tamis dans une boîte de culture cellulaire de 35 millimètres. Après une nouvelle centrifugation des cellules, resuspendez le culot dans 100 microlitres de tampon FACS et déterminez le nombre de cellules viables par exclusion au bleu de trypan.Ensuite, diluez l'échantillon à 5 fois 10 à la puissance 6 cellules par millilitre. Réservez 10 à 20 % des cellules pour le témoin non coloré. Coloriez le reste des cellules avec un colorant fluorescent de discrimination entre cellules vivantes et mortes.Humidifiez ensuite un tube FACS de 35 micromètres muni d'un tamis à cellules avec 20 microlitres de tampon FACS, puis ajoutez-y les cellules en les faisant passer à travers le tamis, en les recueillant par gravité. À l'aide de la stratégie de triage illustrée, isolez les cellules uniques vivantes exprimant le marqueur fluorescent. Vérifiez le triage à l'aide des cellules doublement marquées.Tri de 2 000 à 4 000 cellules issues de la population d’intérêt dans 5 microlitres de tampon FACS froid dans un tube de microcentrifugeuse placé sur de la glace. Ensuite, transférer 1 microlitre des cellules triées dans un nouveau tube FACS contenant 100 microlitres de tampon de tri FACS et une dilution de 1 à 1 000 du colorant viabilité/non viabilité. Puis analyser l’échantillon cellulaire à l’aide des fenêtres de tri afin d’évaluer la viabilité après le tri.Ensuite, déposez 1 microlitre de cellules diluées dans 9 microlitres de tampon FACS sur une hématimètre pour déterminer la concentration cellulaire et le diamètre moyen. Sélectionnez maintenant un circuit microfluidique intégré, ou puce IFC, de la taille appropriée pour le diamètre cellulaire moyen de l'échantillon, puis amorcer la fluidique conformément aux instructions du fabricant. Chargez les cellules sur la plaque selon les instructions du fabricant, puis insérez la plaque dans un appareil fluidique compatible.Ensuite, exécuter un script de chargement cellulaire approprié pour la puce IFC afin de diriger les cellules vers les voies de capture. Pour confirmer que les cellules sont logées dans les sites de capture, monter la plaque sur un microscope équipé d'un adaptateur pour plaque et acquérir des images en champ clair et en fluorescence de chaque site de capture avec un grossissement de 10x. Les cellules peuvent ensuite être traitées pour une évaluation en aval de l'expression de leur gène cible par RT-qPCR.À l'étape du 18e somite, la microscopie à fluorescence peut être utilisée pour vérifier l'expression de ZsYellow chez les embryons. Après le tri, des cellules présentant une gamme de diamètres sont obtenues. La plaque IFC peut être utilisée pour capturer des cellules ayant un diamètre d'intérêt.Par exemple, dans cette expérience, des cellules de cinq à dix micromètres de diamètre. Comme prévu, les cellules triées et capturées provenant d'embryons âgés de 18 heures post-fécondation exprimaient le marqueur fluorescent ZsYellow. Ici, la RT-qPCR a été utilisée pour évaluer l'expression génique relative de gènes d'intérêt spécifiques dans 40 cellules individuelles provenant de sites de capture cellulaire sur une plaque IFC.Étant donné que la plage des valeurs de seuil de cycle pour le gène de référence était trop large pour comparer l'expression génique entre les échantillons, et que de nombreuses valeurs de seuil de cycle dépassaient 30, les valeurs ont été visualisées sous forme de carte thermique. En comparant les échantillons, une hétérogénéité importante de l'expression génique a été observée dans cette expérience, les cellules étant classées en types 1 à 5 selon leur profil d'expression génique.Une fois maîtrisée, la transformation d'échantillons entiers d'embryons en cellules individuelles lysées sur une puce microfluidique intégrée peut être réalisée en six heures si les étapes sont correctement effectuées. Lors de la réalisation de cette procédure, il est important de garder à l'esprit que seules des cellules individuelles sont capturées sur la puce microfluidique. Après cette procédure, d'autres méthodes, telles que le séquençage à haut débit de cellules uniques, peuvent être réalisées afin de caractériser complètement les transcriptomes des cellules individuelles.Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la biologie du développement pour explorer l'hétérogénéité cellulaire dans les embryons en développement précoce. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la manière d'isoler des cellules individuelles à partir d'embryons de poisson zèbre, de capturer des cellules uniques dans un système microfluidique multiplexe basé sur des cellules uniques et d'évaluer l'expression génique de cellules individuelles.

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