Le nerf fibulaire Méthode Blessure: Un test fiable pour identifier et tester les facteurs qui réparation neuromusculaires Jonctions

L’objectif global de cette méthode de lésion des nerfs périphériques est d’examiner de manière fiable les jonctions neuromusculaires en régénération chez la souris. Cette méthode nous aidera à identifier les changements moléculaires, cellulaires et fonctionnels associés à la régénération des jonctions neuromusculaires. Le principal avantage de cette procédure est que le taux de régénération des jonctions neuromusculaires peut être comparé de manière fiable entre les groupes expérimentaux, en grande partie en l’absence de changements myogéniques.

William Dalkin, un étudiant en médecine de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Avant de commencer la procédure, utilisez de l’éthanol à 80 % pour nettoyer le site chirurgical, la planche et les instruments, puis désinfectez-vous avec de la povidone iodée. Ensuite, placez la souris sur la planche chirurgicale et confirmez l’absence de réponse au pincement des orteils.

Alignez les membres à l’intérieur des dispositifs de contention avec le membre postérieur cible dans une position anatomiquement naturelle et les articulations du genou légèrement étendues sans rotation interne ou externe. Ensuite, transférez l’animal sous un microscope chirurgical et ajustez la planche jusqu’à ce que l’articulation osseuse du genou et la crête entre le tibial antérieur et les muscles gastrocnémiens soient visibles à travers l’objectif. À l’aide d’un scalpel et d’une pince, faites une incision d’environ trois centimètres à travers la peau, perpendiculairement au trajet sous-jacent du nerf fibulaire commun.

Poursuivez l’incision à travers le fascia superficiel en exposant les muscles du biceps fémoral et du vaste latéral, suivie d’une incision d’un à deux centimètres à travers le fascia profond de connexion pour séparer les muscles. Ensuite, utilisez des écarteurs mécaniques pour faire reculer le muscle biceps fémoral vers la caudale afin de révéler le nerf fibulaire commun. Tracez le nerf proximal jusqu’à ce que son intersection avec le tendon de la tête latérale du muscle gastrocnémien soit trouvée.

Ensuite, à l’aide d’une pince fine, saisissez le nerf alignant les pointes parallèlement au bord latéral du tendon gastrocnémien et appliquez une pression constante et concentrée pendant cinq secondes pour écraser le nerf fibulaire commun. En tenant la pince perpendiculairement à la fibre, saisissez le tissu avec la zone juste derrière la pointe de la pince et appliquez une pression ferme mais douce pour un écrasement net et linéaire du nerf le long du bord du tendon. Inspectez visuellement le nerf à l’aide du microscope chirurgical pour confirmer un écrasement complet du tissu.

Le nerf apparaîtra translucide au site de la blessure. Si des souris exprimant des protéines de fluorescence dans les axones périphériques sont utilisées, la fluorescence disparaîtra du site de la lésion. Si le nerf a été suffisamment endommagé, retirez les écarteurs et réalignez les muscles dans leurs positions anatomiques.

Ensuite, utilisez des sutures en soie 6-0 pour fermer le site d’incision avec une à trois sutures interrompues simples et placez la souris sur un coussin chauffant dans une cage propre avec surveillance jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie. La compression du nerf pendant cinq secondes à l’aide d’une pince fine entraîne la disparition de la YFP du site de la blessure. L’épineurium reste contigu, servant de conduit pour la régénération précise des axones vers leurs cibles d’origine.

Chez les souris femelles âgées de 70 jours, la lésion nerveuse est suffisante pour provoquer la dégénérescence de tous les segments axonaux distaux du soma neuronal, quatre jours après l’écrasement. Sept jours après l’écrasement, les terminaisons nerveuses réoccupent activement les sites post-synaptiques libérés. Au 12e jour, les terminaisons nerveuses continuent de se différencier en sites pré-synaptiques et les jonctions neuromusculaires sont complètement réactivées.

Il y a peu de variabilité entre les souris dénervées pendant la même durée, ce qui démontre que l’écrasement du nerf fibulaire peut être utilisé comme test pour comparer le reinervation des muscles entre des animaux du même âge et du même sexe. Comme prévu, un certain nombre de changements se produisent dans les axones moteurs alpha lorsqu’ils renouvellent les fibres musculaires. Les cônes de croissance axonale s’étendent et se ramifient lorsqu’ils entrent en contact avec des sites post-synaptiques, se développant sur des régions spécifiques de la post-synapse, et culminant dans la juxtaposition presque complète des terminaisons axonales, avec les sites post-synaptiques.

Comme l’a démontré la PCR quantitative, les gènes associés aux jonctions neuromusculaires augmentent après la dénervation et diminuent à mesure que les jonctions neuromusculaires sont réactivées. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 15 minutes si elle est correctement exécutée. Lorsque vous tentez cette procédure, il est important de ne pas oublier de prendre votre temps, de visualiser toutes les structures et de vérifier qu’un écrasement complet a été obtenu.

À la suite de cette procédure, d’autres méthodes telles que la QPCR peuvent être effectuées pour répondre à des questions supplémentaires sur les gènes qui sont régulés à la hausse ou à la baisse. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la neurobiologie pour explorer les régénérations synaptiques chez la souris. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’effectuer un écrasement du nerf fibulaire pour examiner les taux de réintégration de la jonction neuromusculaire chez la souris.