Name: Utilisation dune batterie de produits chimiques et écotoxicologiques Méthodes pour lévaluation de lefficacité des processus de traitement des eaux usées pour supprimer œstrogénique Potency (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Découvrez une batterie de tests chimiques et écotoxicologiques pour évaluer l'efficacité des procédés de traitement des eaux usées dans l'élimination des contaminants œstrogéniques. Ces méthodes sensibles protègent les écosystèmes aquatiques.

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Les projets présentés dans cet article ont été financés par Severn Trent Water et l’Université Brunel, à Londres. Les auteurs tiennent à remercier Alan Henshaw et John Churchley pour leur aide sur le terrain et en laboratoire. T.J.C. remercie les fonds de dotation Heinz pour leur soutien. M.R.M. remercie l’Institut Steinbrenner pour une bourse de doctorat Steinbrenner et l’Université Carnegie Mellon pour une bourse présidentielle.

<ol><li>Bergman, Å, Heindel, J., Jobling, S., Kidd, K., Zoeller, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-science+of+endocrine+disrupting+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Lett%22%5BJournal%5D)">State-of-the-science of endocrine disrupting chemicals.</a> Toxicol. Lett. 211, (2012).</li>
<li>Rodgers-Gray, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+juvenile+roach+%28Rutilus+rutilus%29+to+treated+sewage+effluent+induces+dose-dependent+and+persistent+disruption+in+gonadal+duct+development%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Exposure of juvenile roach (Rutilus rutilus) to treated sewage effluent induces dose-dependent and persistent disruption in gonadal duct development.</a> Environ. Sci. Technol. 35 (3), 462-470 (2001).</li>
<li>Jobling, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+sexual+maturation+and+gamete+production+in+wild+roach+%28Rutilus+rutilus%29+living+in+rivers+that+receive+treated+sewage+effluents%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+reprod%22%5BJournal%5D)">Altered sexual maturation and gamete production in wild roach (Rutilus rutilus) living in rivers that receive treated sewage effluents.</a> Biol. reprod. 66 (2), 272-281 (2002).</li>
<li>Tyler, C. R., Der Eerden, B. V. an, Jobling, S., Panter, G., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+vitellogenin%2C+a+biomarker+for+exposure+to+oestrogenic+chemicals%2C+in+a+wide+variety+of+cyprinid+fish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%2C+Biochem.+Syst.+Environ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Measurement of vitellogenin, a biomarker for exposure to oestrogenic chemicals, in a wide variety of cyprinid fish.</a> J. Comp. Physiol. B, Biochem. Syst. Environ. Physiol. 166 (7), 418-426 (1996).</li>
<li>Jobling, S., Nolan, M., Tyler, C. R., Brighty, G., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+sexual+disruption+in+wild+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Widespread sexual disruption in wild fish.</a> Environ. Sci. Technol. 32 (17), 2498-2506 (1998).</li>
<li>Jobling, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicted+exposures+to+steroid+estrogens+in+U.K.+rivers+correlate+with+widespread+sexual+disruption+in+wild+fish+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Predicted exposures to steroid estrogens in U.K. rivers correlate with widespread sexual disruption in wild fish populations.</a> Environ. Health Perspect. 114, Suppl 1. 32-39 (2006).</li>
<li>Baynes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Additional+treatment+of+wastewater+reduces+endocrine+disruption+in+wild+fish+-+a+comparative+study+of+tertiary+and+advanced+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Additional treatment of wastewater reduces endocrine disruption in wild fish - a comparative study of tertiary and advanced treatments.</a> Environ. Sci. Technol. 46 (10), 5565-5573 (2012).</li>
<li>Routledge, E. J., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogenic+activity+of+surfactants+and+some+of+their+degradation+products+assessed+using+a+recombinant+yeast+screen%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Estrogenic activity of surfactants and some of their degradation products assessed using a recombinant yeast screen.</a> Environ. Toxicol. Chem. 15 (3), 241-248 (1996).</li>
<li>Grover, D. P., Balaam, J., Pacitto, S., Readman, J. W., White, S., Zhou, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+disrupting+activities+in+sewage+effluent+and+river+water+determined+by+chemical+analysis+and+in+vitro+assay+in+the+context+of+granular+activated+carbon+upgrade%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Endocrine disrupting activities in sewage effluent and river water determined by chemical analysis and in vitro assay in the context of granular activated carbon upgrade.</a> Chemosphere. 84 (10), 1512-1520 (2011).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+determination+of+steroid+oestrogens+in+waters+using+chromatography+and+mass+spectrometry+%282008%29+Methods+for+the+Examination+of+Waters+and+Associated+Materials%22">The determination of steroid oestrogens in waters using chromatography and mass spectrometry (2008) Methods for the Examination of Waters and Associated Materials</a>. (2008), Environment Agency. Bristol, UK. (2008).</li>
<li>Van den Belt, K., Berckmans, P., Vangenechten, C., Verheyen, R., Witters, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+the+in+vitro%2Fin+vivo+estrogenic+potencies+of+17beta-estradiol%2C+estrone%2C+17alpha-ethynylestradiol+and+of+17beta-estradiol%2C+estrone%2C+17alpha-ethynylestradiol+and+nonylphenol%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+toxicol%22%5BJournal%5D)">Comparative study on the in vitro/in vivo estrogenic potencies of 17beta-estradiol, estrone, 17alpha-ethynylestradiol and of 17beta-estradiol, estrone, 17alpha-ethynylestradiol and nonylphenol.</a> Aquat. toxicol. 66 (2), 183-195 (2004).</li>
<li>Mills, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+ecotoxicity+of+17%CE%B1-ethinylestradiol+using+TAML%2Fperoxide+water+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Removal of ecotoxicity of 17α-ethinylestradiol using TAML/peroxide water treatment.</a> Sci. Rep. 5, 10511(2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22EN+14962%3A2006+Water+quality+-+Guidance+on+the+scope+and+selection+of+fish+sampling+methods%22">EN 14962:2006 Water quality - Guidance on the scope and selection of fish sampling methods</a>. , British Standards Institute. London, UK. (2006).</li>
<li>Beresford, N., Brian, J. V., Runnalls, T. J., Sumpter, J. P., Jobling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogenic+activity+of+tropical+fish+food+can+alter+baseline+vitellogenin+concentrations+in+male+fathead+minnow+%28Pimephales+promelas%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Estrogenic activity of tropical fish food can alter baseline vitellogenin concentrations in male fathead minnow (Pimephales promelas).</a> Environ. Toxicol. Chem. 30 (5), 1139-1145 (2011).</li>
<li>Nolan, M., Jobling, S., Brighty, G., Sumpter, J. P., Tyler, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histological+description+of+intersexuality+in+the+roach%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">A histological description of intersexuality in the roach.</a> J. Fish Biol. 58 (1), 160-176 (2001).</li>
<li>Dascenzo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+of+natural+estrogen+conjugates+in+municipal+sewage+transport+and+treatment+facilities%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Fate of natural estrogen conjugates in municipal sewage transport and treatment facilities.</a> Sci. Total Environ. 302 (1-3), 199-209 (2003).</li>
<li>Gomes, R. L., Birkett, J. W., Scrimshaw, M. D., Lester, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+natural+and+synthetic+steroid+estrogens+and+their+conjugates+in+aqueous+matrices+by+liquid+chromatography%2Fmass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Environ.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of natural and synthetic steroid estrogens and their conjugates in aqueous matrices by liquid chromatography/mass spectrometry.</a> Int. J. Environ. Anal. Chem. 85 (1), 1-14 (2005).</li>
<li>Metcalfe, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogenic+potency+of+chemicals+detected+in+sewage+treatment+plant+effluents+as+determined+by+in+vivo+assays+with+Japanese+medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Estrogenic potency of chemicals detected in sewage treatment plant effluents as determined by in vivo assays with Japanese medaka (Oryzias latipes).</a> Environ. Toxicol. Chem. 20 (2), 297-308 (2001).</li>
<li>Stalter, D., Magdeburg, A., Wagner, M., Oehlmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ozonation+and+activated+carbon+treatment+of+sewage+effluents%3A+Removal+of+endocrine+activity+and+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Ozonation and activated carbon treatment of sewage effluents: Removal of endocrine activity and cytotoxicity.</a> Water Res. 45 (3), 1015-1024 (2011).</li>
<li>Caldwell, D. J., Mastrocco, F., Anderson, P. D., Länge, R., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicted-no-effect+concentrations+for+the+steroid+estrogens+estrone%2C+17%CE%B2-estradiol%2C+estriol%2C+and+17%CE%B1-ethinylestradiol%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Predicted-no-effect concentrations for the steroid estrogens estrone, 17β-estradiol, estriol, and 17α-ethinylestradiol.</a> Environ. Toxicol. Chem. 31 (6), 1396-1406 (2012).</li>
<li>Gardner, M., Comber, S., Scrimshaw, M. D., Cartmell, E., Lester, J., Ellor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+hazardous+chemicals+in+wastewater+treatment+works+effluents%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">The significance of hazardous chemicals in wastewater treatment works effluents.</a> Sci. Total Environ. 437, 363-372 (2012).</li>
<li>Filby, A. L., Shears, J. A., Drage, B. E., Churchley, J. H., Tyler, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+advanced+treatments+of+wastewater+effluents+on+estrogenic+and+reproductive+health+impacts+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Effects of advanced treatments of wastewater effluents on estrogenic and reproductive health impacts in fish.</a> Environ. Sci. Technol. 44 (11), 4348-4354 (2010).</li>
<li>Magdeburg, A., Stalter, D., Oehlmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+effluent+toxicity+assessment+at+a+wastewater+treatment+plant+upgraded+with+a+full-scale+post-ozonation+using+aquatic+key+species%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Whole effluent toxicity assessment at a wastewater treatment plant upgraded with a full-scale post-ozonation using aquatic key species.</a> Chemosphere. 88 (8), 1008-1014 (2012).</li>
<li>Collins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TAML+oxidant+activators%3A+a+new+approach+to+the+activation+of+hydrogen+peroxide+for+environmentally+significant+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">TAML oxidant activators: a new approach to the activation of hydrogen peroxide for environmentally significant problems.</a> Acc. Chem. Res. 35 (9), 782-790 (2002).</li>
<li>Collins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+Ligands+for+Oxidizing+Complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Designing Ligands for Oxidizing Complexes.</a> Acc. Chem. Res. 27 (9), 279-285 (1994).</li>
<li>Truong, L., Denardo, M. A., Kundu, S., Collins, T. J., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Assays+as+Developmental+Toxicity+Indicators+in+The+Design+of+TAML+Oxidation+Catalysts%5BTitle%5D)+AND+%22Green+Chem%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Assays as Developmental Toxicity Indicators in The Design of TAML Oxidation Catalysts.</a> Green Chem. 15 (9), 2339-2343 (2013).</li>
<li>Murk, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+estrogenic+potency+in+wastewater+and+surface+water+with+three+in+vitro+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Detection of estrogenic potency in wastewater and surface water with three in vitro bioassays.</a> Environ. Toxicol. Chem. 21 (1), 16-23 (2002).</li>
<li>Test No 455: The Stably Transfected Human Estrogen Receptor-alpha Transcriptional Activation Assay for Detection of Estrogenic Agonist-Activity of Chemicals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+4%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4</a>. , OECD Publishing. Paris. (2009).</li>
<li>Kolle, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+house+validation+of+recombinant+yeast+estrogen+and+androgen+receptor+agonist+and+antagonist+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">In house validation of recombinant yeast estrogen and androgen receptor agonist and antagonist screening assays.</a> Toxicol in Vitro. 24 (7), 2030-2040 (2010).</li>
<li>Lee, O., Tyler, C. R., Kudoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+transient+expression+assay+for+detecting+environmental+oestrogens+in+zebrafish+and+medaka+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Development of a transient expression assay for detecting environmental oestrogens in zebrafish and medaka embryos.</a> BMC Biotechnology. 12, 32(2012).</li>
<li>Brian, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+prediction+of+the+response+of+freshwater+fish+to+a+mixture+of+estrogenic+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Accurate prediction of the response of freshwater fish to a mixture of estrogenic chemicals.</a> Environ Health Perspect. 113 (6), 721-728 (2005).</li>
<li>Test No 229: Fish Short Term Reproduction Assay. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+2%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2</a>. , OECD Publishing. Paris. (2009).</li>
<li>Test No 230: 21-day Fish Assay: A Short-Term Screening for Oestrogenic and Androgenic Activity and Aromatase Inhibition. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+2%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2</a>. , OECD Publishing. Paris. (2009).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

les usines de traitement des eaux usées sont la principale voie de contamination des eaux de surface avec EDC. Une évaluation de l&#39;efficacité de l&#39;élimination de l&#39;activité du système endocrinien des procédés de traitement classiques, avancée ou émergents nécessite l&#39;utilisation d&#39;une variété de dosages chimiques et biologiques. L&#39;analyse chimique en utilisant une analyse non ciblée et ciblée fournit des données qualitatives ou quantitatives sur l&#39;efficacité de l&#39;élimination des composants individuels et permet donc une évaluation à faire par rapport aux normes de qualité de l&#39;environnement ou les concentrations prédites sans effet pour les composés ou mélanges de composés analysés. La génération des produits de transformation résultant de la minéralisation incomplète des matières après le traitement et la présence de composants biologiquement actifs inconnus dans les eaux usées limite l&#39;utilité des tests chimiques seuls. Une combinaison in vivo et in vitro dans des essais biologiques en combinaison avec chimistedépistage ry fournit une boîte à outils utile pour déterminer l&#39;efficacité de l&#39;élimination EDC par des procédés de traitement des eaux usées émergents. Ces tests, lorsqu&#39;elles sont conduites aux côtés de paramètres de qualité de l&#39;eau traditionnels et d&#39;autres points finaux toxicologiques et microbiologiques permettent une évaluation critique des technologies de traitement des eaux usées actuelles et émergentes. Il est important de noter que les écrans à base de levure d&#39;œstrogènes (par exemple, YES) ne sont pas le seul essais in vitro pour déterminer la puissance œstrogénique des produits chimiques et des eaux usées. Un certain nombre d&#39;essais à base de cellules de mammifère transfectées de manière stable ont été développés aussi, par exemple, l&#39;ER-CALUX 27 et hERa-HeLa-9903 28 avec des cellules de cancer du sein humain ou des cellules tumorales du col , respectivement. Le OUI a été comparé à des tests similaires à base de cellules de mammifères et a été trouvé pour avoir un niveau élevé comparable de reproductibilité, les taux réels oestrogéniques positifs et négatifs vrais identification 29, although il est parfois considéré comme un peu moins sensibles 27. Un des avantages de levure à base des dosages de rapporteur est que dans les laboratoires sans expérience significative avec la culture de cellules de mammifères OUI peut être plus facilement adoptée, car elle nécessite des mesures de bio-contrôle moins strictes et des techniques stériles (OUI peut être effectuée sur la paillasse si nécessaire) . Les tests basés sur les cellules humaines ont également besoin de CO 2 incubateurs et luminomètres par rapport aux lecteurs de l&#39; incubateur et de microplaques standards utilisés dans le OUI. Deux levures tests oestrogène à base de rapporteurs (OUI, Saccharomyces cerevisiae et, adeninivorans Arxula-OUI A) sont actuellement en cours sentiers inter-laboratoires pour la validation de la norme ISO 19040 &quot;Qualité de l&#39; eau - Détermination du potentiel oestrogénique de l&#39; eau et des eaux usées&quot; mettant en évidence les industries l&#39;intérêt pour ces techniques. Il existe un certain nombre de limitations des procédés décrits, qui comprennent la contamination potentielledes échantillons au cours de l&#39; échantillonnage, le stockage d&#39;échantillons et l&#39; analyse des substances oestrogéniques provenant de l&#39;environnement sur ​​le terrain ou en laboratoire ou par contamination humaine (par exemple, des plastifiants, des tensioactifs, des produits de soins personnels). Ce type de contamination dans le test YES (ou d&#39;autres dosages de rapporteur à base de cellules) va élever le fond et l&#39;impact de l&#39;utilisation du dosage. Des échantillons d&#39;eau ou de solvants stockés dans des bouteilles en plastique peuvent facilement provoquer des faux positifs. Les faux négatifs sont également préoccupants à la fois comme LCMS / MS et le test YES nécessitent SPE se concentrer oestrogènes à des niveaux détectables. La matrice, le choix du sorbant et SPE solvant d&#39;élution peut affecter l&#39;efficacité de l&#39;extraction et les types de composés élués. L&#39;utilisation de cartouches C18 SPE pour l&#39;extraction en utilisant les conditions décrites dans le présent protocole peut générer un biais négatif, comme des composés hautement polaires et basiques seraient mal conservés par le sorbant. En outre, ce protocole doit être reconstitué de l&#39;éluant OUI élue de methanol à l&#39;éthanol par évaporation à sec source de financement de l&#39;azote résultant dans la perte de composés volatils. En conséquence, le protocole pourrait apporter une sous-estimé l&#39;activité œstrogénique des échantillons testés. Ces limitations sont particulièrement importantes lorsque l&#39;on considère l&#39;essai YES comme composés inconnus ou inattendus pourrait manquer, parce qu&#39;il n&#39;a pas été extraits ou ils sont perdus à cause de l&#39;évaporation. En outre, la technique LCMS / MS utilise des normes internes marquées pour corriger pour la récupération; cette approche ne peut pas être utilisé avec le dosage OUI. Limitations significatives des tests in vivo des effluents comprennent le coût et le temps nécessaires à l&#39; évaluation élevée par rapport aux méthodes in vitro. Actuellement, l&#39;utilisation de tests d&#39;embryons de poissons pour détecter l&#39;activité oestrogénique est limitée. Cependant, il y a eu un certain succès avec la production d&#39; œstrogènes transgéniques sensibles rougeoyante embryons de poisson 30, ce qui pourrait avoir des applications futures. vairons Fathead (utilisés dans ce protocol) est une espèce de laboratoire communes et VTG induction chez les poissons mâles est un bio-marqueur bien documenté d&#39;exposition oestrogénique et une mesure quantifiable des effluents d&#39; eaux usées strogénicité 22 ou d&#39; autres composés oestrogéniques ou des mélanges 31. Les lignes directrices de test OCDE pour les perturbateurs endocriniens ont été validés à l&#39; aide des adultes Vairon à grosse tête, medaka japonais et zebrafish 32,33, avec VTG étant un biomarqueur sensible de l&#39; exposition aux œstrogènes chez les trois espèces. Cependant, VTG induction ne correspond pas directement à altération de la reproduction et donc les conséquences écologiques de l&#39; exposition des eaux usées, comme on le voit dans sévèrement roach intersexe 3. D&#39;autre part, le gardon ne sont pas une «espèce de laboratoire&quot; classiques pour la recherche sur l&#39;écotoxicologie en raison de leur grande taille, longue durée de génération (2-3 ans pour atteindre la maturité sexuelle), le style de la reproduction; groupe frai (reproduction) a lieu une fois par an, et la difficulté d&#39;identifier les mâles des femelles (autres que pendantla saison de ponte). Cependant, cette espèce normalement gonochorique a été très bien étudié au Royaume - Uni, en raison de la découverte que , en aval des effluents d&#39;eaux usées oestrogéniques, les poissons mâles exposées perturbations à leur endocrinologie (par exemple, la présence de la vitellogénine femelle spécifique dans le sang) et l&#39; histopathologie (ovotestis - le développement des œufs dans les testicules et / ou conduits reproducteurs féminins) 5,6. Par conséquent, comme une application future de ces protocoles, le gardon (ou espèces similaires) pourraient être une espèce sentinelle sauvages utiles pour montrer si réelles améliorations à la qualité des eaux usées (et strogénicité réduite) sont observés dans les rivières qui reçoivent des effluents traités avancés. Ils peuvent également être utilisés en fin de systèmes de tuyaux pour surveiller l&#39; amélioration technologique des effluents provenant des installations à l&#39;échelle pilote 7. Lorsque l&#39;on considère que les espèces à utiliser dans des évaluations des eaux usées in vivo il existe un compromis entre les espèces de laboratoire d&#39;essai en utilisant relativement rapides et contrôlés par rapport à laplus le terrain sur la base, mais plus pertinent pour l&#39;environnement, les tests utilisant des espèces indigènes. Cependant, comme des évaluations in vivo sont un coût élevé et ne devrait être considérée comme la dernière série de tests suivants évaluations en utilisant l&#39; analyse chimique et dans des essais in vitro. Les étapes critiques dans les protocoles décrits comprennent la préparation et la manipulation des échantillons et de la verrerie (c. -à- bouteilles et l&#39; équipement d&#39;échantillonnage doivent être pré-traités avec la surface de l&#39; agent de nettoyage actif approprié) afin d&#39; éviter la contamination des échantillons de contaminants de l&#39; environnement , y compris en limitant le contact des échantillons avec des matières plastiques et d&#39;autres matériaux qui peuvent produire des résultats faussement positifs. Ceci est tout aussi important lors de la conception et la construction de systèmes d&#39;exposition aquariums et de poissons. Idéalement aquariums (stocks de logements et pendant les expositions) devrait être construit à partir de matériaux à faible adsorption 32 avec le risque de contamination minimale. L&#39;acier inoxydable peut être utilisé pour des réservoirs de rétention d&#39;effluents ou de l&#39;eau.Considérant que les réservoirs d&#39;une construction de verre sont préférés pour les réservoirs de poissons (car cela fournit également une observation facile du poisson). L&#39;utilisation de tuyaux ou des tubes en plastique de qualité faible doit être évité 32, PVC 34 et ABS peut être utilisé si «bien assaisonné», à savoir, de gauche à lessiver les contaminants dans l&#39; eau de dilution courante pendant au moins 12 heures avant l&#39;utilisation. tube de silicium de qualité médicale a été employée avec succès dans notre usine pour la livraison de la pompe péristaltique de produits chimiques et de l&#39;eau des eaux usées / de dilution aux réservoirs. Aussi bien que compte tenu de la contamination oestrogénique dans la construction et le fonctionnement du système aquatique, il est également important de penser à l&#39;alimentation des poissons; de nombreux aliments de poissons de propriété ont été trouvés pour être oestrogénique pour les poissons. Par conséquent , il est important de tester tous les aliments pour l&#39; activité (par exemple, dans l&#39;écran de Estrogen de levure, Voir Beresford et al. 14) avant de les utiliser dans ces types d&#39;études. Dépannagedes protocoles d&#39;essai d&#39;analyse chimique ou OUI décrits est simplifiée si les échantillons d&#39;assurance de la qualité, y compris Voyage multiple, laboratoire et ébauches de solvants sont analysés à côté des contrôles positifs et des échantillons réels pour éliminer les faux résultats positifs et faux négatifs. Positive (par exemple, EE2) et négatif (dilution de l&#39; eau seulement) le contrôle doit aussi toujours être utilisé dans les essais in vivo pour confirmer la sensibilité des biomarqueurs ou le terminal (ie, VTG ou histopathologie) biologique prévu, et permettre à toute contamination inattendue à détecter ( par exemple de dispositif expérimental up, régime alimentaire, ou dans les eaux de dilution). Toute modification dans le protocole doivent être validés avant d&#39;effectuer toute étude. Avec une réglementation plus stricte des composés oestrogéniques pénètrent dans l&#39;environnement par les effluents des SEEU il est envisage que les technologies plus efficaces de traitement des eaux usées devront être mis au point. La batterie de tests décrits dans ce manuscrit félicite leLes tests d&#39;évaluation écotoxicologiques et chimiques normalement appliquées au traitement des eaux usées rejets d&#39;effluents de l&#39;usine. Par conséquent, l&#39;application future de ce type de batterie holistique de l&#39;essai devrait permettre aux développeurs de technologie des eaux usées, et les exploitants de centrales, de mettre en œuvre les conceptions les plus écologiquement sûr compte tenu des meilleures méthodes pour éliminer les produits chimiques oestrogéniques réglementés spécifiques et l&#39;activité biologique globale.

Les préoccupations concernant les effets néfastes des composés endocriniens perturbateurs sur la faune de santé génésique a conduit l&#39;Union européenne à placer deux substances oestrogéniques (estradiol et éthinylestradiol) sur une «liste de surveillance» en vertu de la directive cadre sur l&#39;eau (DCE). EDC englobent une variété de classes chimiques, y compris les œstrogènes naturels et synthétiques de stéroïdes, les médicaments, les pesticides et les produits chimiques industriels et composants de produits de consommation avec des effets indésirables connus sur la faune. Certains de ces composés peuvent avoir un impact potentiellement la santé humaine 1. La recherche a montré que les effluents de la station d&#39; épuration sont oestrogénique à pêcher 2 et comme conséquence de nombreuses eaux réceptrices sont également oestrogénique pour les poissons 3. Cela a été démontré d&#39; abord par des enquêtes nationales au Royaume-Uni qui a montré une augmentation des concentrations de vitellogénine (une femelle spécifique de la protéine précurseur jaune 4) dans le sang des poissons mâles sauvages et une haute prévalence de intersexe (développement des œufs et / ou des conduits reproducteurs féminins dans les testicules des poissons mâles) chez les espèces de poissons normalement gonochorique 5,6. le traitement classique des eaux usées est généralement un processus en trois étapes consistant en un examen préalable suivi d&#39;un traitement primaire et secondaire qui supprime à la fois dissous et mis en suspension la matière organique. L&#39;efficacité de l&#39;élimination de l&#39;individu EDC dépend des propriétés physico-chimiques des substances et sur l&#39;efficacité du processus de traitement appliquée. Pour beaucoup élimination EDC par adsorption et la dégradation biologique peut être importante mais incomplète. Le traitement tertiaire, comme la filtration sur sable, peut être efficace pour augmenter le retrait EDC 7 alors que le traitement avancé utilisant l&#39; oxydation avancée (par exemple l&#39; ozone) ou du charbon actif peuvent être efficaces pour atteindre près de l&#39; élimination complète 7. L&#39;évaluation de toute nouvelle technologie pour le traitement des eaux usées needs pour déterminer l&#39;efficacité du processus proposé dans l&#39;enlèvement d&#39;EDC. Une batterie de tests, y compris l&#39; analyse chimique ciblée aux côtés de tests d&#39;écotoxicologie, en utilisant in vivo et essais biologiques in vitro, fournit des données détaillées à cet effet. Bien que très utile à des fins réglementaires, l&#39;analyse chimique ciblée ne peut fournir des données sur les composés (et métabolites spécifiques) surveillés. Bioassays permettent en outre la «détection» des effets indésirables des métabolites et la transformation des eaux usées de traitement généré par les sous-produits qui seraient autrement pas détectés 8,9. Cet article décrit l&#39;utilisation d&#39;une batterie de tests de laboratoire d&#39;écotoxicité chimiques et d&#39;évaluer l&#39;efficacité d&#39;un certain nombre de procédés de traitement des eaux usées avancées et émergentes pour éliminer la puissance œstrogénique du brut et les eaux usées traitées et les eaux réceptrices.

<table><tbody><tr><td>Wellwash Versa laveur de plaques</td><td>Thermo Scientific</td><td>5165010</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de plaques</td><td>Molecular Devices</td><td>SpectraMax 340PC</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur</td><td>Memmert</td><td>INB 400</td><td>37 &#176 ; C Incubation requise pour le dosage de la carpe</td></tr><tr><td>Fisherbrand whirlimixer</td> Fisher <td>Scientific</td><td>13214789</td> Machine à <td></td></tr><tr><td>glaçons</td><td>Scotsman</td><td>AF80</td><td></td></tr><tr><td>Pipette numérique multicanaux 12 canaux F1</td><td>Thermo Scientific Finnpipette</td><td>4661070</td><td></td></tr><tr><td>kits ELISA</td><td>Biosense Laboratories</td><td>V01018401-096 (Tête-de-boule) V01003402-096 (Carpe)</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à microfuges, 0,5 ml</td><td>Alpha labs</td><td>LW2372</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à microfuges, 1,5 ml</td><td>Alpha labs</td><td>LW2375</td><td></td></tr><tr><td>Acide sulfurique, 95-98 %</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td> 258105<td></td></tr><tr><td>Histology</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Processeur de tissus</td><td>Leica Biosystems</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>Distributeur de cire</td><td>Thermo Scientific Raymond Lamb</td><td>E66HC</td><td></td></tr><tr><td>Moule d’enrobage en métal</td><td>Leica Biosystems</td><td>Divers</td><td></td></tr><tr><td>Plaque chauffante</td><td>Thermo Scientific Shandon</td><td>3120063</td><td></td></tr><tr><td>Plaque froide (EG1150 C)</td><td>Leica Biosystems</td><td>14038838037</td><td></td></tr><tr><td>Pince chauffante (EG F)</td><td>Leica Biosystems</td><td>14038835824</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica Biosystems</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>Section de paraffine flottation&nbsp ; bain</td><td>Électrothermique</td><td>MH8517</td><td></td></tr><tr><td>Banc de séchage sur lames</td><td>Électrothermie</td><td>MH6616</td><td></td></tr><tr><td>Stainmate colorant automatisé</td><td>Thermo Scientific Shandon</td><td>E103/S10L</td><td></td></tr><tr><td>Cassettes, Histosette II, biopsie</td><td>Simport</td><td>M493</td><td></td></tr><tr><td>Cire de paraffine</td><td>Thermo Scientific Raymond Lamb</td><td>W1</td><td></td></tr><tr><td>Histo-Clear II</td><td>National Diagnostics</td><td>HS-202</td><td></td></tr><tr><td>IMS (mélange d’éthanol), IDA99</td><td>Tennants</td><td>ID440</td><td></td></tr><tr><td>Lames d’adhérence en polysinus</td><td>Thermo Scientific Gerhard Menzel</td><td>J2800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Couvercles, 22x50 mm</td><td>VWR</td><td>631-0137</td><td></td></tr><tr><td>Histomount</td><td>National Diagnostics</td><td>HS-103</td><td></td></tr><tr><td>Haematoxylin Harris GURR</td><td>VWR</td><td>351945S</td><td></td></tr><tr><td>Eosin, 1 %, aqueux</td><td>Pyramid Inovation</td><td>S20007-E</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand boîtes à lames</td><td>Fisher Scientific</td><td>11701486</td><td></td></tr><tr><td>Microtome blades, MB35</td><td>Thermo Scientific Shandon</td><td>3050835</td><td></td></tr><tr><td>Bouin' s solution</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HT10132-1L</td><td></td></tr><tr><td>Crib à levures</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flow armoire</td><td>Labcaire Systems Ltd</td><td>SC12R</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur refroidi</td><td>LMS Incubateur refroidi</td><td>303</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur</td><td>Memmert</td><td>INB 400</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Shaker Grant</td><td>PSU-10i</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand whirlimixer</td><td>Fisher Scientific</td><td>13214789</td><td></td></tr><tr><td>Agitateur de plaques</td><td>Heidolph Titramax 100</td><td>544-11200-00</td><td></td></tr><tr><td>Pipette numérique multicanaux 12 canaux F1 Thermo</td><td>Scientific Finnpipette</td><td>4661070</td><td></td></tr><tr><td>Pipette 12 canaux, électronique</td><td>Sartorius</td><td>735441</td><td></td></tr><tr><td>microplaques</td> <td>à fond plat 96 puitsMP Biomedicals Thermo Scientific Nunc Sarstedt</td><td>76-232-05 260860 82.1581.001</td><td>Nous avons constaté que ces plaques multipuits produisent toutes des fonds faibles</td></tr><tr><td>Eau de qualité HPLC</td><td>Rathburn</td><td>RH1020</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol absolu</td><td>Hayman Kimia</td><td>F200238</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate de potassium monobasique anhydre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5655</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate d’ammonium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-2939</td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de potassium, granulés</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-1767</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de magnésium anhydre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de fer(III)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>307718</td><td></td></tr><tr><td>L-Leucine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-8912</td><td></td></tr><tr><td>L-Histidine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-6034</td><td></td></tr><tr><td>Adénine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-2786</td><td></td></tr><tr><td>L-argénine, chlorhydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-6969</td><td></td></tr><tr><td>L-méthionine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-5308</td><td></td></tr><tr><td>L-tyrosine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-8566</td><td></td></tr><tr><td>L-isoleucine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-7403</td><td></td></tr><tr><td>L-lysine, chlorhydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-8662</td><td></td></tr><tr><td>L-phénylalanine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5482</td><td></td></tr><tr><td>Acide L-glutamique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-8415</td><td></td></tr><tr><td>L-Valine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V-0513</td><td></td></tr><tr><td>L-sérine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-4311</td><td></td></tr><tr><td>Thiamine, chlorhydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-1270</td><td></td></tr><tr><td>Pyridoxine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5669</td><td></td></tr><tr><td>Acide D-pantothénique, sel hémicalcique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5155</td><td></td></tr><tr><td>Inositol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-5125</td><td></td></tr><tr><td>D-Biotine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-4639</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose anhydre ; anomères mixtes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7021</td><td></td></tr><tr><td>Acide L-aspartique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-4534</td><td></td></tr><tr><td>L-Thréonine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-8441</td><td></td></tr><tr><td>Sulfate de cuivre(II), anhydre</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-1297</td><td></td></tr><tr><td>Chlorophénolred-&#946 ;-D galactopyranoside (CPRG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10884308001</td><td></td></tr><tr><td>Glycérol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-2025</td><td></td></tr><tr><td>17 &beta ;-Estradiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-8875</td><td></td></tr><tr><td><Stéroïdes>forts</forts></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acétone</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acétonitrile</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solution d’ammoniac</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethylacétate</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nitrate de cuivre(II)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acétone</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dichlorométhane</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,4,16,16-d4-17&#946 ;-œstradiol</td><td>CDN Isotopes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,4,16,16-d4-estrone</td><td>CDN Isotopes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,4,16,16-d4-17&#945 ;-éthynyl oestradiol</td><td>CDN Isotopes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17&#946 ;-estradiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estrone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17&#945 ;-éthynyl oestradiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hexane</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acide chlorhydrique</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydrogénocarbonate de sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydroxyde de sodium</td><td>Sigma-Aldrich Cartouche d’extraction</td> en phase solide de styrène divinyl benzène Sigma-Aldrich <td></td><td></td></tr><tr><td>(Isolute ENV+) (200 mg/6 ml)</td><td>Cartouche</td> d’extraction en phase solide aminopropyle Biotage <td></td><td></td></tr><tr><td>Isolute (500 mg/6 ml)</td><td>Biotage</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fish studyTube de collecteur en silicone </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>orange-white 0.63 bore pk 6</td><td>Watson Marlow</td><td>982.0063.000</td><td></td></tr><tr><td>connecteurs droits pour pk 0.5/0.8 alésage 20</td><td>Watson Marlow</td><td>999.2008.000</td><td></td></tr><tr><td>tube en silicone pumsil 0.8 alésage 15 m</td><td>Watson Marlow</td><td>913.A008.016</td><td></td></tr><tr><td>Pompe persitaltique multicanaux série 200</td><td>Watson Marlow</td><td>205CA</td><td></td></tr><tr><td>Tube en silicone x 15 m (réservoirs de dosage)</td><td>VWR</td><td>SFM1-3250</td><td></td></tr><tr><td>Tube en silicone x 15 m (grand pour l’entrée/la sortie)</td><td>VWR</td><td>SFM1-5450</td><td></td></tr><tr><td>2,5 L verre winchester pk 4</td><td>Fisher Scienctific</td><td>BTF-505-050B</td><td></td></tr><tr><td>barre d’agitation magnétique 51 x 8 mm pk 10</td><td>Fisher Scienctific</td><td>FB55595&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Méthanesulfonate d’éthyle 3-aminobenzoate (MS222)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E10521-10G</td><td></td></tr><tr><td>17&alpha ;-éthynylestradiol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E4876-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol absolu</td><td>Hayman Kimia</td><td>F200238</td><td></td></tr><tr><td>SPE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1/8 pouces Tubes PTFE 'pailles' codé couleur pk 4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57276</td><td></td></tr><tr><td>liners jetables pour collecteur</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57059</td><td></td></tr><tr><td>tubes de filtration sans frittes 6 ml pk 30</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57242</td><td></td></tr><tr><td>adaptateurs de réservoir pk 12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57020-U</td><td></td></tr><tr><td>poids en acier inoxydable pour collecteur pk 4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57278</td><td></td></tr><tr><td>mâle Luer plug pour collecteur pk 12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>504351</td><td></td></tr><tr><td>SPE Collecteur à vide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57265</td><td></td></tr><tr><td>robinets d’arrêt pour l’extraction du perlage principal (supelco) pk 12</td><td>Waters</td><td>WAT054806</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak Plus C18 boîte à cartouches 50&nbsp ;</td><td>Waters</td><td>WAT020515</td><td></td></tr><tr><td>Méthanol HPLC grade 2,5 L</td><td>Fisher Scientific</td><td>M/4056/17</td><td></td></tr><tr><td>Flacons en verre de 7 ml avec couvercles (58 x 17 mm) pk 399</td><td>Fisher Scientific</td><td>TUL-520-031K</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol absolu</td><td>Hayman Kimia</td><td>F200238</td><td></td></tr><tr><td>pompe à vide, par exemple , VP Series Pompe à vide</td><td>Camlab</td><td>1136915</td><td></td></tr></tbody></table>

utilisation d&#39;une batterie de produits chimiques et écotoxicologiques méthodes pour l&#39;évaluation de l&#39;efficacité des processus de traitement des eaux usées pour supprimer œstrogénique potency

Use of a Battery of Chemical and Ecotoxicological Methods for the Assessment of the Efficacy of Wastewater Treatment Processes to Remove Estrogenic Potency

Les perturbateurs endocriniens présentent un risque important pour l’environnement aquatique. L’éthinylestradiol (EE2) et l’œstrone (E1) ont récemment été inclus dans une liste de surveillance des polluants environnementaux en vertu de la Directive-cadre européenne sur l’eau. Les usines municipales de traitement des eaux usées contribuent grandement au pouvoir œstrogénique des eaux de surface. Une grande partie du pouvoir œstrogénique des effluents des usines de traitement des eaux usées (STEP) peut être attribuée au rejet d’œstrogènes stéroïdiens, notamment l’œstradiol (E2), l’EE2 et l’E1, en raison de l’élimination incomplète de ces substances à l’usine de traitement. L’évaluation de l’efficacité des procédés de traitement des eaux usées nécessite la détermination quantitative des substances individuelles, le plus souvent à l’aide de méthodes d’analyse chimique. Les méthodes les plus fréquemment utilisées comprennent la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GCMS/MS) ou la chromatographie en phase liquide-spectrométrie de masse (LCMS/MS) à l’aide de la surveillance à réactions multiples (MRM). Bien que très utile à des fins réglementaires, l’analyse chimique ciblée ne peut fournir que des données sur les composés (et les métabolites spécifiques) surveillés. Les méthodes d’écotoxicologie garantissent en outre que tous les sous-produits produits ou les composés œstrogéniques inconnus présents sont également évalués par la mesure de leur activité biologique. Un certain nombre d’essais biologiques in vitro, y compris le Yeast Estrogen Screen (YES), sont disponibles pour mesurer l’activité œstrogénique d’échantillons d’eaux usées. L’analyse chimique, associée à des essais biologiques in vivo et in vitro, fournit une boîte à outils utile pour l’évaluation de l’efficacité et de la pertinence des procédés de traitement des eaux usées en ce qui concerne les composés perturbateurs endocriniens œstrogéniques. Cet article utilise une batterie de tests chimiques et écotoxicologiques pour évaluer les procédés conventionnels, avancés et émergents de traitement des eaux usées dans des études en laboratoire et sur le terrain.

Les tentatives visant à comprendre l&#39;impact des améliorations aux procédés de traitement des eaux usées ou de déterminer la technologie la plus appropriée pour moderniser l&#39;équipement comme traitement tertiaire au WWTP existant par rapport à l&#39;efficacité de l&#39;élimination de l&#39;activité perturbant le système endocrinien des effluents déchargés, exige non seulement la mesure du produit chimique clé composants qui entrent dans les œuvres, mais nécessite l&#39;analyse des produits de dégradation qui peuvent aussi avoir une activité perturbant le système endocrinien. Dans les effluents d&#39;eaux usées domestiques, les substances les plus œstrogéniques sont les hormones stéroïdiennes, l&#39; estrone (E1), 17β-oestradiol (E2) et 17α-éthinylestradiol (EE2) 5,8. Les oestrogènes stéroïdiens sont principalement éliminés du corps sous forme de mélange de conjugués inactifs 16,17. Ces œstrogènes conjugués sont sensiblement déconjugués dans le système d&#39;évacuation des eaux usées par l&#39;activité bactérienne et une nouvelle dégradation se produit dans la station d&#39;épuration. Les stéroïdes déconjugués are retiré du courant d&#39;eaux résiduaires par adsorption sur de la boue ou biodégrader au cours du traitement secondaire conduisant à la formation, d&#39;une part de sous-produits de transformation et, finalement, la minéralisation complète peut se produire du composant actif initial. L&#39;analyse chimique de tous les composés individuels dans le courant d&#39;effluent serait difficile, longue et coûteuse et ne couvre pas les composants actifs inconnus présents dans un échantillon. De plus, une somme de la contribution de chaque composant oestrogénique ne fournira une indication de l&#39;activité oestrogénique cumulative d&#39;un échantillon des composés analysés. Ceci est un risque où les processus de transformation génèrent des substances oestrogéniques inconnus ou lorsque l&#39;affluent est d&#39;origine industrielle. La combinaison de l&#39; analyse chimique avec in vivo et dans des essais biologiques in vitro écotoxicologiques apporte une solution à la présence de composants œstrogéniques inconnus dans des mélanges tels que les eaux usées traitées. Les essais in vitro tels que la levure Estrogen Screen (YES) ont été largement utilisées pour déterminer l&#39;activité oestrogénique des effluents d&#39;eaux usées et pour aider à identifier les composants actifs dans les échantillons traités 8,18,19. Cependant, les comparaisons entre in vivo et in vitro tests peuvent être significatifs 11 et une évaluation complète des nouveaux processus en matière de traitement du système endocrinien activité perturbant nécessite une batterie de tests chimiques et écotoxicologiques. Pour déterminer si les usines de traitement individuels ou processus supprimer des composés actifs dans le flux des eaux usées peut être réalisé en utilisant une analyse chimique qui suit l&#39;extraction de l&#39;échantillon, la concentration et le nettoyage de l&#39;extrait avant l&#39;analyse, le plus souvent effectué à l&#39;aide LCMS (/ MS) ou SMGC (/ SM). Les données obtenues à partir de l&#39; analyse chimique peuvent être utilisés pour déterminer la conformité individuelle prédit concentrations sans effet (PNEC) 20 ou standards de qualité de l&#39; environnements (NQE) 21 de composés individuels spécifiques et par conséquent , ces méthodes sont essentielles pour les données de conformité réglementaire. En outre, ciblées ou par des méthodes d&#39;analyse chimique non ciblés permettent l&#39;identification et la quantification de composés individuels ou d&#39;isomères par rapport aux procédés biologiques, qui donnent une réponse totale. Les méthodes d&#39;analyse chimique permettent donc l&#39;évaluation des composés discrets à faire se rencontrer et de faire face à ces problèmes de traitement des eaux usées sur une base de l&#39;usine de traitement individuel. Des études ont montré que le traitement des eaux usées classique (par exemple, les installations à boues activées) peut être très efficace dans l&#39;élimination des hormones stéroïdes naturelles , bien que la suppression de l&#39;hormone synthétique EE2 a tendance à être moins efficaces. Des études de terrain à l&#39;aide de traitement avancé utilisant des techniques telles que l&#39;ozone, le carbone granulé activé (GAC) et les membranes ont démontré, mais à un coût élevé, qu&#39;ils peuvent être utilisés comme une solution de bout-de-pipe pour enlever EE2 au-dessous de predigés niveaux d&#39;effet et au - dessous des limites de détection. La figure 3 montre le retrait de EE2 utilisant GAC à une usine de traitement des eaux usées municipales à l&#39;échelle pilote. Des études menées à l&#39; échelle pilote dans les usines de traitement des eaux usées municipales à l&#39; aide de l&#39; extrémité du tuyau de traitement GAC montrent également la réduction de la puissance estrogénique suivante GAC mesurée à l&#39; aide de l&#39;écran Yeast Estrogen (YES) comme on le voit sur ​​la figure 4. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig3.jpg" /> Figure 3. Données sur le terrain Exemple montrant l&#39;enlèvement d&#39;éthinylestradiol suivant un traitement tertiaire avancé. (A) Les échantillons sont recueillis à partir de la station d&#39; épuration suivante (usine de boues activées) traitement conventionnel suivant les procédures décrites pour la conservation de l&#39; échantillon. (B) Les échantillons sont extraits en utilisant l&#39; extraction en phase solide, nettoyé à éliminer les substances interférant au moyen de SPE en phase normale etchromatographie par perméation de gel. (C) L&#39;extrait concentré pur est concentrée à un faible volume et analysé à l&#39; aide électropulvérisation à ions négatifs LCMS / MS en mode MRM. Les résultats sont calculés en utilisant la normalisation interne à l&#39;aide des standards internes marqués par des isotopes. Dans l&#39;exemple illustré, EE2 est présent dans l&#39;effluent final ASP à une concentration supérieure à la dose sans effet (PNEC) de 0,1 ng / L et est éliminé en utilisant GAC et de l&#39; ozone (O 3) à une concentration sécuritaire pour l&#39; environnement. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig3large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquez ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig4.jpg" /> Figure 4. Photo d&#39;un écran Yeast Estrogen (YES) plaque d&#39;essai (A) montrant le changement de couleur du jaune au rouge, relatif à l&#39; activité oestrogénique des échantillons. Parcelles créés à partir de la plaque d&#39;essai YES démontrant corrigées absorbance (540nm) de la norme estradiol (B), procédé par boues activées des effluents (ASP) et charbon actif en grains (CAG) traités échantillons effluents d&#39;eaux usées (C). Chaque échantillon a été testé en double. ASP et GAC effluents ont été extraites et concentrées en utilisant les méthodes de SPE décrites dans la section 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig4large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> L&#39;ozonation est également efficace pour éliminer les oestrogènes stéroïdes et de l&#39;activité oestrogénique de traités de façon conventionnelle les usines de traitement des eaux usées. L&#39;ozone est capable d&#39;oxyder une large gamme de contaminants organiques et des matières organiques dissoutes dans les échantillons d&#39;eaux usées et fournit des propriétés de désinfection. L&#39;efficacité de l&#39;ozonation dépend des caractéristiques de l&#39;eau tels que le pH, la quantité de matière organique et la dose appliquée de l&#39;ozone. Les estrogènes qui sont mal éliminés par un traitement conventionnel peut êtreenlevés des eaux usées avec des doses comprises entre 0,8 et 2 mg O 3 / mg COD. L&#39;ozone est un agent oxydant sélectif, qui réagit avec les sites d&#39;électrons riches (les liaisons insaturées carbone-carbone, des composés aromatiques, y compris les alcools aromatiques), ce qui rend l&#39;ozone applicable pour la répartition d&#39;un certain nombre d&#39;EDC. Toutefois, l&#39;élimination des composés individuels ne conduit pas nécessairement à la minéralisation complète du composé d&#39;origine. l&#39;ozonation des substances organiques suivantes peuvent être transformés intermédiaires de génération ou d&#39;une oxydation de transformation des sous-produits qui comprennent un certain nombre de bas poids moléculaire, des classes de composés polaires tels que des aldéhydes, des cétones, des acides carboxyliques, des céto-acides et les composés bromés. Des exemples comprennent le bromate, le formaldéhyde, l&#39;acétaldéhyde et des acides carboxyliques. L&#39; utilisation in vivo et in vitro dans des essais biologiques , il a été démontré que , bien que l&#39; ozone oxyde partiellement certaines substances chimiques, les principaux produits de transformation résultants ont une faible estrogenic puissance et donc l&#39;application de l&#39;ozone à un résultat approprié de la dose dans un retrait élevé d&#39;activité oestrogénique. L&#39;un des principaux avantages d&#39;un traitement supplémentaire des eaux usées est la réduction de la féminisation des poissons mâles dans les eaux réceptrices; un effet négatif qui peut entraîner une diminution de la fertilité 3. Dans des études in vivo à l&#39; aide de poissons (par exemple, le gardon ou Vairon à grosse tête) exposés à des eaux usées montrent des cellules germinales femelles ou des ovocytes dans les testicules des poissons mâles (par exemple, comme on le voit sur ​​la figure 5). Intersexes ou mâle VTG est absent ou réduit de manière significative dans les poissons suite à un traitement avancé tel que GAC 7 ou ozone 22. Ces études montrent que les produits de transformation produites au cours de l&#39;ozonation ne sont pas oestrogénique, mais cela ne répond pas à la toxicité de l&#39;effluent produit. Cette question a été abordée dans d&#39; autres études, par exemple une étude de Magdeburg et al. <sup&gt; 23 qui montre que l&#39; oxydation de l&#39; ozone sous-produits sont toxiques pour la truite arc , mais cette toxicité peut être éliminé par filtration sur sable aval suivant ozonation. <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig5.jpg" /> Figure 5. photomicrographies d&#39;un mâle normal (A) et intersexuées (B, C) ​​gonades de roach adulte (Rutilus rutilus) exposées à des eaux usées dans un champ évaluation fondée. Photomicrographie-A, représente une coupe histologique de testis mâle normal. Photomicrographie-B et C, dépeint des coupes histologiques d&#39;un poisson mâle intersexe, ayant été exposés à procédé par boues activées effluents d&#39;eaux usées pendant six mois. Les flèches indiquent les ovocytes présents dans le tissu testiculaire. La barre d&#39;échelle représente 100 um dans chaque microphotographie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig5large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a> <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; Le coût élevé de la fin du traitement de la conduite en utilisant l&#39;ozone, le GAC ou la technologie membranaire nécessite le développement d&#39;un faible coût de remplacement, des méthodes durables pour perturbateurs endocriniens chimiques (EDC) l&#39;enlèvement. En outre, les méthodes d&#39;adsorption et de séparation simplement séparent EDC d&#39;une phase à l&#39;autre plutôt que de les éliminer par la dégradation. Activateurs TAML ont été développés pour catalyser l&#39; hydrogène oxydation par le peroxyde de micropolluants organiques dans les eaux usées 12,24 - 26. TAML activateurs avec H 2 O 2 dégrade efficacement EE2 et d&#39; autres oestrogènes stéroïdes dans l&#39; eau de laboratoire pure ainsi que dans les effluents des usines municipales de traitement des eaux usées et dans des échantillons d&#39;urine enrichis 12. Des études en laboratoire, montre TAML / H 2 O 2 traitement permet l&#39; élimination de l&#39; oestrogène stéroïde élevé , y compris le retrait EE2 et réduit sensiblement l&#39; activité oestrogénique mesurée in vitro en utilisant le bioessai OUI et substantially diminue poissons féminisation in vivo mesurée en utilisant le bioessai VTG (Figure 1 et Figure 6). <img alt="Figure 6" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig6.jpg" /> Figure 6. concentration de EE2 moyenne et l&#39; activité oestrogénique dans les eaux traitées et non traitées du réservoir (A) et vitellogénine du plasma dans la ligne de base et les poissons exposés mâle (B). A) de concentration de EE2 (ng / L, barres bleu foncé) a été mesurée par LCMS / MS , l&#39; activité oestrogénique (EE2 ng / équivalent L, barres vert foncé) a été mesurée via vitro écran dans Yeast Estrogen (YES). B) vitellogénine plasmatique (ng / ml, bars bleu clair) concentration en vairons mâles ont été mesurés par une enzyme quantitative liés en immunosorbent assay (ELISA). EE2 résultats des analyses chimiques déclarées comme &lt;0,03 ng / L de EE2 (ie, inférieure à la limite de détection (LOD)) ont été considérés comme ayant la moitié LOD (ie, </em&gt; 0,015 ng / L EE2) pour une utilisation dans le calcul des moyennes, erreur standard et l&#39;analyse statistique. EE2 et l&#39;activité oestrogénique sont des concentrations moyennes mesurées échantillonnées au cours de l&#39;exposition de 21 jours. VTG plasma a été mesurée avant l&#39;exposition (de base) et après l&#39;exposition de 21 jours. Le régime de traitement a consisté; contrôle négatif (eau de dilution uniquement), EE2 + H 2 O 2 + TAML, EE2 + H 2 O 2, et EE2 seule. Les barres d&#39;erreur dans le graphique-A représentent l&#39;erreur standard de la moyenne, les barres d&#39;erreur dans le graphique-B représentent l&#39;écart type. Lettres au-dessus des barres dans le graphique-B représentent la similarité statistique. Ce chiffre a été modifié depuis Mills et al. 12 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig6large.jpg" target="_blank">S&#39;il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.</a>

Perturbateurs endocriniens (EDC) posent un risque important pour l&#39;environnement aquatique. Les usines municipales de traitement des eaux usées sont les principaux contributeurs à la puissance œstrogénique des eaux de surface. La méthodologie fournie dans le présent document permet une évaluation de l&#39;efficacité et de la pertinence des processus de traitement des eaux usées par rapport à l&#39;élimination EDC.

Utilisation d&#39;une batterie de produits chimiques et écotoxicologiques Méthodes pour l&#39;évaluation de l&#39;efficacité des processus de traitement des eaux usées pour supprimer œstrogénique Potency

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in ...

L'objectif général de la batterie de tests décrite ici, comprenant la chimie analytique ainsi que des méthodes in vitro et in vivo, est de déterminer l'efficacité des technologies émergentes et nouvelles de traitement des eaux usées pour éliminer les contaminants œstrogéniques. Ces méthodes peuvent aider à répondre à des questions clés en génie environnemental, par exemple lors du choix des procédés de traitement des eaux usées les plus efficaces face à une activité œstrogénique variable des eaux usées. Le principal avantage de ces techniques réside dans leur sensibilité à de très faibles concentrations de composés actifs, permettant ainsi d'identifier les meilleures technologies pour protéger la vie aquatique.Les procédures seront démontrées par le chercheur postdoctoral, Dr Chris Green, l'étudiante diplômée, Angela Pinzon, la chercheuse associée, Dr Alice Baynes, et la technicienne principale de recherche, Nicola Beresford. Le processus SPE exige une attention rigoureuse à la propreté et à l'ordre afin d'éviter la contamination des échantillons. Nettoyez préalablement tous les tubes, robinets et frittés avec du méthanol.Avant de traiter les échantillons, fixez les lignes de transfert au collecteur d'extraction et rincez l'ensemble du système avec de l'eau déionisée. Pour traiter les échantillons, insérez d'abord les douilles jetables pour valve, puis fixez les cartouches SPE en styrène-divinylbenzène. Ensuite, pipetez cinq millilitres d'acétate d'éthyle dans chaque réservoir pour conditionner les cartouches.Pendant cette étape, veillez à ce que l'EXC soit hermétiquement scellée. Ensuite, mettez en marche la pompe à vide pour un débit de 10 millimètres par minute. Avant que les cartouches ne s'assèchent, ajoutez cinq millilitres de méthanol, suivis de cinq millilitres d'eau.Il est très important que les cartouches SPE ne s'assèchent pas. Une fois que l'eau a presque entièrement traversé, arrêtez la pompe et complétez chaque réservoir de cartouche avec de l'eau. Ensuite, reliez des tubes en PTFE de 1/8 de pouce entre les réservoirs des cartouches et les flacons en verre pour échantillons.Maintenant, réglez le vide sur un débit inférieur à 10 millilitres par minute et laissez passer tout l'échantillon à travers la cartouche. Ensuite, séchez complètement les cartouches SPE jusqu'à ce que la couleur du contenu de la cartouche change. Utilisez un vide ou un courant de gaz.Maintenant, chargez des vials de collecte en verre propres et secs de 10 millilitres dans un porte-échantillons et placez le porte-échantillons à l'intérieur du bloc d'extraction. Vérifiez que chaque insert se trouve bien au-dessus d'un vial. Remplissez les réservoirs d'échantillons avec deux fois quatre millilitres, soit un total de huit millilitres de dichlorométhane, mettez en marche la pompe à vide et laissez le liquide traverser la SPE et s'écouler dans les vials de collecte.Ensuite, utilisez un concentrateur pour réduire le volume de tous les flacons de collecte à un millilitre. Transférez chaque échantillon dans un flacon d'auto-échantillonneur et concentrez-les davantage jusqu'à 100 microlitres à l'aide d'un équipement de concentration par soufflage à l'azote. La prochaine étape du processus consiste à utiliser la chromatographie par perméation de gel (GPC) pour éliminer les interférences macromoléculaires.Commencez par injecter 95 microlitres de l'extrait d'échantillon éludé dans la CPG équipée d'une HPLC. Concentrez l'extrait de CPG jusqu'à 200 microlitres à l'aide d'un concentrateur et d'un appareil de concentration par courant d'azote, puis complétez jusqu'à deux millilitres avec de l'hexane. Ensuite, fixez des douilles de valve jetables, des cartouches amino purple et des réservoirs de cartouche sur le bloc de SPE, ainsi que les vials de collecte en verre de 10 millilitres.Maintenant, chargez deux millilitres d'hexane dans chaque cartouche pour les conditionner, puis jetez le solvant. Ensuite, chargez l'extrait d'échantillon GPC dans le réservoir et aspirez-le à travers. Mettez l'extrait recueilli de côté et remplacez le flacon dans le porte-échantillons pour recueillir le lavage.Ensuite, faites passer deux millilitres d’un mélange d’acétate d’éthyle et d’hexane à 30 pour cent en volume à travers la cartouche. Puis, ajoutez deux millilitres supplémentaires d’acétate d’éthyle et d’hexane, jetez les fractions de lavage recueillies et remettez le flacon de collecte de 10 millilitres dans le support. Ajoutez maintenant deux millilitres d’un mélange d’acétate d’éthyle et d’acétone à 50 pour cent en volume dans le réservoir, puis démarrez la pompe à faible débit, inférieur à deux millilitres par minute.Une fois que le liquide est passé, ajoutez deux autres millilitres d'acétate d'éthyle à 50 % dans le réservoir. Utilisez ensuite un concentrateur pour réduire le volume de l'extrait à un millilitre. Transférez ensuite l'échantillon dans un petit flacon en verre et utilisez un appareil de concentration à l'azote pour évaporer l'extrait jusqu'à incipience. Ajoutez 100 microlitres de méthanol, mélangez soigneusement l'échantillon, puis transférez-le dans un flacon d'autoéchantillonneur muni d'un insert de 0,3 millilitre.Ensuite, effectuez une analyse LC-MS/MS de l'extrait. La veille du début du test, préparez un milieu de croissance frais et ensemencez-le avec le témoin de culture HER de la souche utilisée. Le jour suivant, préparez le test en réalisant des dilutions sérielles de 100 microlitres des produits chimiques à tester ou des extraits d'effluents, puis une courbe étalon d'E2 dans l'éthanol.Transférez maintenant des aliquotes de 10 microlitres dans une plaque stérile de 96 puits étiquetée. Laissez ensuite la plaque découverte afin d'évaporer l'éthanol. Préparez ensuite 50 millilitres de milieu de croissance contenant 0,5 millilitre de solution CPRG.À partir de la culture de levures de 24 heures, mesurez la turbidité à 620 nanomètres pour estimer la densité cellulaire. Ensuite, ajoutez 40 millions de cellules de levures aux 50 millilitres de milieu d'essai. Transférez le milieu d'essai inoculé dans un bac stérile, puis utilisez une pipette multicanal pour transférer 200 microlitres de milieu dans chaque puits de la plaque d'essai.Remplacez le couvercle de la plaque d'essai, scellez les bords avec du ruban adhésif et agitez vigoureusement la plaque pendant deux minutes à l’aide d’un agitateur pour plaque. Incubez ensuite la plaque à 32 °C dans une enceinte chauffante à ventilation naturelle. Après trois jours d’incubation, répétez l’agitation, puis laissez les levures se déposer pendant environ une heure.Enfin, mesurez l'absorbance lumineuse des échantillons à 540 et 620 nanomètres. Des échantillons d'eau provenant d'une station d'épuration conventionnelle utilisant le procédé de boues activées ont été analysés par spectrométrie de masse en mode électrospray en ions négatifs (LCMS), et l'éthinylœstradiol était présent à une concentration supérieure au niveau prédit sans effet. Grâce à un traitement avancé de l'eau, tel que le charbon actif granulé, ou GAC, il a été possible de réduire substantiellement les concentrations d'éthinylœstradiol.Toutes les extraits d'eaux usées ont été analysés à l'aide d'un étalon interne marqué par des isotopes, pic rouge, afin de permettre la quantification. Le test de dépistage levure-œstrogène s'est révélé clairement sensible à l'estradiol standard, mais n'a montré aucune réponse à l'éthanol, qui correspond essentiellement au témoin. Les cellules du test de dépistage à base de levure ont clairement réagi à l'effluent du procédé de boues activées, tandis que l'effluent traité au charbon actif granulaire a produit une réponse atténuée, bien qu'il reste plus actif biologiquement que le témoin.Grâce à cette nouvelle technologie de traitement des eaux usées, la concentration en éthinylestradiol, indiquée en bleu, et l'activité œstrogénique, indiquée en vert, ont été significativement réduites par un traitement combiné au peroxyde d'hydrogène et au TAML. Les stations d'épuration des eaux usées constituent la principale source de contamination des eaux de surface par des substances œstrogéniques. De nouvelles approches visant à améliorer les procédés de traitement de l'eau nécessitent des tests approfondis de l'activité œstrogénique.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension d'une batterie de tests chimiques et d'écotoxicologie nécessaires pour mesurer l'activité œstrogénique dans des échantillons d'eau. Il est extrêmement important de s'assurer que la contamination des échantillons et des extraits est minimisée grâce à une manipulation soigneuse de ces derniers. Par exemple, les plastiques couramment utilisés contiennent des composés œstrogéniques ; il est donc essentiel d'inclure des contrôles négatifs afin de vérifier la contamination chimique, ainsi que des contrôles positifs pour s'assurer que la méthode d'extraction a fonctionné et qu'il y a une bonne récupération des œstrogènes ajoutés.

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