Augmentation du temps de récupération et une diminution de LPS administration à étudier les mécanismes de stimulation du nerf vague dans les réponses inflammatoires limitées

L’objectif global de cette intervention chirurgicale est d’observer l’effet de la stimulation du nerf vague dans les conditions inflammatoires. Analyser et comprendre les différents mécanismes et cellules impliqués dans la voie anti-inflammatoire dite cholinergique. Cette méthode a été développée dans le laboratoire de Kevin Tracey à l’Institut Feinstein.

La méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la neuroimmunologie. Les progrès récents établissent un lien étroit entre les systèmes nerveux et immunitaire. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut être facilement mise en place dans un laboratoire.

Mais des règles importantes doivent être respectées en ce qui concerne les soins aux animaux et le protocole chirurgical. Le parcours errant du nerf vague dans tout le corps et sa capacité à réguler à la baisse l’information dans divers modèles animaux impliquent que sa stimulation pourrait être utile dans le traitement de nombreuses maladies inflammatoires. Habituellement, les personnes novices dans cette technique auront du mal à identifier et à isoler le nerf vague de l’artère carotide sous observation microscopique.

Cependant, bien que cela soit délicat au début, cela devient plus facile avec le temps et la pratique. Commencez par allumer l’ordinateur et le système d’acquisition de données lié à l’électrode de stimulation. Lancez le logiciel d’acquisition et d’analyse de données.

Suivez ensuite une aliquote de 5 milligrammes par millilitre de lipopolysaccharide ou LPS et diluez-la à zéro virgule cinq milligrammes par millilitre avec une solution saline. Anesthésie une souris de 25 grammes dans une chambre d’induction. Lorsque le niveau d’anesthésie souhaité est atteint, déplacez l’animal de la chambre au masque.

Tournez le connecteur à trois voies pour alimenter le masque et ajustez le régulateur de débit. Vérifiez la présence d’un plan chirurgical d’anesthésie par perte du réflexe de redressement et une fréquence respiratoire régulière d’environ 100 respirations par minute avant de commencer l’intervention chirurgicale. Une fois la souris correctement anesthésiée, fixez les pattes de la souris à l’établi avec du ruban adhésif.

Assurez-vous que le nez de l’animal est toujours soigneusement positionné dans le masque. Désinfectez correctement la zone chirurgicale conformément aux procédures approuvées. Ensuite, après avoir pratiqué une incision d’un à un point cinq centimètres dans la peau au niveau du cou, positionnez un stéréomicroscope avec un objectif 12 point cinq x pour visualiser la zone chirurgicale.

Localisez le muscle sterno-cléido-mastoïdien en enlevant les couches de peau et de graisse à l’aide d’une pince. Rétractez le muscle sterno-cléido-mastoïdien et déplacez la pince derrière le nerf vague gauche et l’artère carotide. Isolez le nerf de l’artère en plaçant très soigneusement la pince entre le nerf et l’artère.

Il s’agit d’une étape critique de la procédure, car le nerf et l’artère sont proches l’un de l’autre, il est très facile de couper les vaisseaux et de tuer les animaux. Cependant, en plaçant très soigneusement la pince entre le nerf et l’artère, ils finissent par se séparer et il est possible d’isoler le nerf vague. Maintenant, placez l’électrode sous le nerf vague.

Comme l’électrode de l’aiguille est assez longue, le nerf sera toujours en contact avec l’électrode même s’il bouge légèrement. Ensuite, effectuez une injection intrapéritonéale de LPS et attendez cinq minutes avant de commencer la stimulation. Après cinq minutes, stimulez le nerf vague pendant cinq minutes à cinq volts et un hertz en appuyant sur le bouton de démarrage du logiciel d’acquisition.

Lorsque la période de stimulation est terminée, retirez l’électrode puis cousez la plaie de l’animal avec du fil de suture chirurgical. Vaporisez un film barrière anti-piqûre sur la plaie afin d’améliorer la cicatrisation et de protéger contre les infections. Enfin, placez l’animal dans une cage propre et surveillez-le pendant qu’il reprend pleinement conscience.

Les images suivantes montrent l’effet d’une réduction de la concentration de LPS et d’une augmentation de la latence à sacrifier sur les niveaux de TNF alpha et d’IL un bêta après la stimulation du nerf vague. Ici, on peut voir que le paradigme original diminue considérablement à la fois TNF alpha et IL un bêta par rapport aux contrôles simulés. Le protocole démontré dans cette vidéo réduit considérablement les niveaux de TNF alpha mais pas d’IL un bêta.

Comme on le voit ici, une récupération de six heures sans injection de LPS n’affecte pas les niveaux de TNF alpha ou d’IL un bêta. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 20 minutes environ si elle est exécutée correctement. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la neuroimmunologie.

Étudier le lien entre le nerf central et le système immunitaire. Et aussi étudier l’innervation du nerf vague de nouveaux organes et l’effet de la voie anti-inflammatoire cholinergique dans les maladies inflammatoires chroniques. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de localiser, d’isoler et de stimuler le nerf vague.

Et gardez également à l’esprit que le niveau d’inflammation induite et le temps de récupération de l’animal peuvent être des questions importantes à prendre en compte.