Évaluation de Dictyostelium discoideum réponse à la Stimulation mécanique aiguë

L’objectif général de cette procédure est d’examiner l’activité de divers composants du réseau de transduction du signal intracellulaire à la suite d’une brève perturbation mécanique. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la migration cellulaire, telles que la façon dont les cellules détectent et migrent vers divers signaux environnementaux, y compris les stimuli mécaniques. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet d’examiner la réponse initiale à un stimulus mécanique sans la contribution confondante de la motilité ou de la polarité à la réponse.

Nous avons d’abord eu l’idée de cette méthode lorsque nous avons testé la réponse des cellules adhérentes au chimioattractant qui était délivré avec une légère agitation et nous avons remarqué une réponse robuste des cellules stimulées par le contrôle du véhicule. Pour commencer, préparez Klebsiella aerogenes en inoculant un petit nombre de cellules de stock congelé dans un milieu HL5 sans antibiotiques et incubez la culture pendant la nuit. La croissance de Dictyostelium en présence de bactéries Klebsiella aerogenes réduira le nombre de macropinosomes, ce qui améliorera la réponse cellulaire aux stimuli externes.