Détermination du taux d’argile/cyanobactéries venait s’installer

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la sédimentologie, telles que la façon dont des sédiments riches en matières organiques et à grains fins peuvent être déposés dans des conditions oxygénées. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet de produire à la fois des résultats quantitatifs et un enregistrement visuel de la sédimentation. Pour commencer, préparez les cultures de cyanobactéries selon le protocole de texte.

Rincez ensuite un erlenmeyer de 250 millilitres et deux flacons d’un litre résistants à la chaleur avec une solution d’acide chlorhydrique à quatre molaires suivie d’eau distillée. Remplissez les trois flacons de milieu liquide. Fermez les flacons avec des bouchons en mousse perméables aux gaz et couvrez les goulots avec du papier d’aluminium.

Ensuite, étiquetez et autoclavez les flacons à 121 degrés Celsius et 100 kilopascals pendant 25 minutes. Après cela, laissez-les refroidir à température ambiante. Pour inoculer le milieu, stérilisez à la flamme une boucle d’inoculation.

Ensuite, utilisez la boucle pour transférer la culture cyanobactérienne dans le ballon de 250 millilitres qui contient 50 millilitres de milieu. Après l’inoculation, restérilisez le rebord de la fiole de 250 millilitres et remplacez le bouchon en mousse et la feuille d’aluminium. Ensuite, préparez la chambre de croissance comme indiqué dans le texte.

Transférez la culture inoculée de 50 millilitres dans la chambre de croissance et incubez avec une température maintenue de 30 degrés Celsius et une agitation de 150 tr/min. Après une croissance réussie de la culture, placez la culture de 50 millilitres et le ballon d’un litre contenant 400 millilitres de milieu liquide dans une hotte à flux laminaire. Retirez les bouchons en mousse et les capuchons en aluminium.

Utilisez un bec Bunsen pour stériliser le bord de chaque flacon. Versez la culture de la fiole de 250 millilitres dans la fiole d’un litre contenant 400 millilitres de milieu. Ensuite, restérilisez le goulot de la fiole d’un litre et fixez l’appareil à buller.

Enfin, agitez la fiole d’un litre à 30 degrés Celsius et 150 tr/min avec l’appareil à bulles fixé à une pompe à air qui fait circuler un mélange d’air humidifié à travers la solution à raison de 300 millilitres par minute. Incuber la culture pendant 120 à 168 heures à 30 degrés Celsius dans la chambre de culture. À l’aide d’un cylindre gradué, transférez le milieu de croissance supplémentaire dans la culture de 400 millilitres jusqu’à ce que le volume final soit d’un litre, diluant ainsi la culture.

Ajoutez la solution dans un réservoir en acrylique. Étiquetez deux tubes de microcentrifugation d’un millilitre et placez-les près du réservoir en acrylique. Pesez ensuite 50 grammes d’argile de kaolin.

Utilisez un caméscope pour enregistrer l’expérience. Pipeter un millilitre de l’échantillon de cyanobactéries dans un tube de microcentrifugation étiqueté. Utilisez l’échantillon pour déterminer le nombre de cellules cyanobactériennes en mesurant la densité optique à 750 nanomètres.

Versez rapidement l’argile dans la cuve en remuant vigoureusement avec un bâtonnet pendant 10 à 15 secondes. Ensuite, à l’aide d’une pipette P1000, extraire un millilitre de l’échantillon pour la détermination de la chlorophylle a et enregistrer cette fois comme T0. Prélever des échantillons supplémentaires à des intervalles de temps appropriés, comme indiqué dans le texte. Ensuite, utilisez la procédure modifiée décrite dans le texte pour déterminer la concentration de chlorophylle a dans chaque échantillon de cellule.

À l’aide d’une microcentrifugeuse, granulez les cellules de chaque échantillon à température ambiante pendant trois minutes à 13 000 fois la gravité. Utilisez ensuite une pipette P1000 pour retirer l’excédent de fluide. Remettez en suspension la pastille de cellule avec un millilitre de méthanol à 100 %.

Incuber les échantillons à moins 20 degrés Celsius pendant 24 heures. Après avoir centrifugé à nouveau les échantillons, utilisez un spectrophotomètre pour déterminer la concentration de chlorophylle a. Cette expérience illustre l’effet de l’argile sur les populations de cyanobactéries et leurs taux de sédimentation.

Les cultures de cyanobactéries Synechococcus qui sont mélangées à de l’argile kaolin ont des taux de sédimentation plus élevés que les cultures contenant uniquement des cyanobactéries. Après avoir été exposées à l’argile, les cellules cyanobactériennes se déposent hors de la suspension en 10 minutes. Les cultures de cyanobactéries Synechocystis mélangées à de l’argile ont également des taux de sédimentation plus élevés que les cultures contenant uniquement des cyanobactéries.

Après avoir été exposées à l’argile, ces cellules cyanobactériennes sont également sorties de la suspension en 10 minutes. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de mesurer les taux de sédimentation des cyanobactéries et des mélanges d’argile, ce qui peut être utilisé pour informer les modèles de dépôt de coquilles noires.