Name: HuVEC Tube-formation Dessai pour évaluer limpact des produits naturels sur langiogenèse (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 12 s
Description: Apprenez le test de formation de tubes sur matrice gelée pour évaluer l'angiogenèse avec des extraits de Ruta graveolens. Cette méthode permet d'étudier l'impact des composés naturels sur la formation des réseaux vasculaires.

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Ces travaux ont été financés par Fondi di Ateneo à Luca Colucci-D'Amato et les fonds du programme VALERE à Maria Teresa Gentile et le fonds AIRC IG18999 à Maurizio Bifulco.

1. Préparation RGWE
<ol><li>Recueillir les feuilles de R. graveolens des plantes pendant les mois de printemps/été sous la supervision d'un botaniste. REMARQUE: Dans ce cas, les feuilles ont été recueillies à la Section expérimentale des plantes médicinales dans le Jardin botanique de Naples, Italie5. La plante est spontanée, vivace et est présente dans les régions méditerranéennes (figure 1).</li>
	<li>Peser 250 g de feuilles et les hacher finement avec des ciseaux.</li>
	<li>Mettre les feuilles dans un flacon conique et ajouter 1 L d'eau distillée à 250 g de feuilles hachées et porter à ébullition à 110 oC pendant 60 min. Couvrir le flacon de papier d'aluminium pour éviter une évaporation excessive.</li>
	<li>Utilisez du papier filtre de 3 mm pour séparer les feuilles bouillies de la phase liquide qui représente l'extrait d'eau.</li>
	<li>Filtrer la phase liquide à travers un filtre de 0,22 m, en le recueillant dans un bécher. Couvrir le bécher de parafilm et congeler l'extrait à -80 oC pendant la nuit.</li>
	<li>Faire 10 - 15 trous avec une aiguille dans le parafilm et lyophiliser l'extrait dans un lyophilisateur. Notez qu'il peut prendre quelques jours pour obtenir la poudre.</li>
	<li>Peser la poudre obtenue, la diviser en aliquots et la conserver à 4 oC jusqu'à ce que cela soit nécessaire. Il est possible de le stocker pendant un an.</li>
	<li>Si nécessaire pour les expériences, préparer une solution de stock, diluer la poudre avec de l'eau distillée à une concentration standard de 50 mg/mL. Séparez-le en aliquots en petit volume (p. ex. 1 ml). Cette préparation peut être stockée à -20 oC jusqu'à ce qu'elle soit utilisée, mais ne peut pas être stockée à 4 oC pendant plus de deux jours en raison des oxydations des molécules. Évitez le gel et le dégel.</li>
</ol>2. Culture cellulaire
<ol><li>Cultiver huVECs dans le milieu de croissance cellulaire endothéliale: milieu basal endothélial complété par 1 hydrocortisone g/mL et 1 ng/mL facteur de croissance épidermique, 10% FBS, et la pénicilline / streptomycine à 37 oC dans une atmosphère de 5% CO2.</li>
	<li>Lorsque 80% de confluents, diviser les cellules au rapport de 1:3 chaque passage. Utilisez des cellules de deux à cinq passages, qui ne montrent pas de différences apparentes en réponse aux facteurs de croissance. Après le sixième passage, les cellules deviennent sénescentes et ne forment pas de tubes sur la matrice du sous-sol gélifié.</li>
</ol>3. Transfection
<ol><li>Lorsque les HUVEC sont confluents à 70 %, transfect-les avec le gène désiré.</li>
	<li>Pour une plaque de 100 mm, utilisez 1 g de vecteur pCDNA3 vide comme vecteur de contrôle et 1 g de vecteur pCDNA3 contenant le gène d'intérêt (constitutivement actif MEK [caMEK], dans ce cas).</li>
	<li>Complexe 1 g d'ADN avec 3 l de lipofectamine 2 000, dilué avec un milieu sérique réduit (voir Tableau des matériaux) au volume final de 200 l. Retirez le milieu des cellules et remplacez-le par 1 ml de milieu frais et complet; puis, ajoutez la solution de transfecting aux cellules. Incuber les cellules de l'incubateur à 37oC, avec 5 % de CO 2. Il est également possible d'utiliser d'autres agents de transfection différents de la lipofectamine 2 000, suivant les instructions du fabricant.</li>
	<li>Ajouter 7 ml de milieu frais complet de 3 h après la transfection et, ensuite, incuber davantage les cellules à 37 oC pendant 24 à 48 h avant de procéder aux essais suivants. Le lendemain de la transfection, remplacer le milieu par un milieu frais et complet.</li>
</ol>4. Essai de formation de tube
<ol><li>Refroidir une assiette de 96 puits et des pointes de pipette à 4 oC pour 1 h avant de préparer le sous-sol gélifié.</li>
	<li>Au moment de la préparation du sous-sol, mettre la plaque sur la glace (0 oC) et ajouter 50 l de matrice froide dans chaque puits tout en évitant la formation de bulles. Notez que la fiole contenant la matrice doit être conservée sur la glace pendant la procédure puisque la matrice devient solide à température ambiante.</li>
	<li>Mettre la plaque dans l'incubateur à 37 oC avec 5 % de CO2 pendant au moins 30 min pour permettre au sous-sol de polymériser.</li>
	<li>En attendant, récoltez les cellules. Laver les HUVEC avec 1 ml d'une solution EDTA de 0,25 % trypsine/0,53 mM; puis, ajouter 2 ml de la solution trypsine-EDTA et incuber à 37 oC pendant 5 min. Observez les cellules sous un microscope inversé pour vérifier que la couche cellulaire est complètement dispersée. Ensuite, recueillir le milieu dans lequel les cellules sont suspendues et récolter les cellules détachées par centrifugation à 264 x g pendant 3 min. Resuspendre dans 1 ml de saline tamponnée de phosphate (PBS).</li>
	<li>Pour compter les cellules, ajouter 0,2 ml de la suspension cellulaire à 0,5 ml de PBS et 0,3 ml de solution bleue trypan de 0,4 %. Après 5 min à température ambiante, compter les cellules dans une chambre de Bûrker.</li>
	<li>Resuspendre les cellules dans un milieu complet à la concentration de 2 x 104 cellules/50 l. Les ensemencer sur le sous-sol gélifié à la concentration de 2 x 104 cellules par puits et les laisser s'y installer.</li>
	<li>Faites attention au nombre de cellules. Trop ou trop peu de cellules peuvent ne pas former des tubes de la bonne façon sur le sous-sol gélifié.</li>
	<li>Préparer des doses croissantes de RGWE (0,01, 0,1 et 1 mg/mL), diluer la solution de stock dans le milieu de culture ou la rutine (12, 120 et 300 g/mL), le tout dans le volume final de 50 l/puits, et les ajouter à 50 l/puits de suspension cellulaire. Le volume final dans chaque puits sera de 100 l. Préparer quatre à six puits pour chaque condition expérimentale. À titre de contrôle, diluer l'eau distillée (véhicule) dans le milieu de culture à un rapport de 1:50.</li>
	<li>Incuber les cellules de l'incubateur à 37 oC et 5 % de CO2 pendant une période allant de 6 à 24 h.</li>
	<li>Observez les cellules dans une plage de temps s'étendant de 6 à 24 h après l'ensemencement, à l'aide d'un microscope à contraste de phase à un grossissement de 10X. Les HUVEC sont capables de former des structures tubulaires dans un rayon de 6 h, mais il est possible d'observer de meilleurs résultats après 12 à 18 h. Photographiez les structures tubulaires de chaque puits et imagez en moyenne de trois à cinq champs aléatoires dans chaque puits.</li>
	<li>Après l'acquisition de l'image, les cellules peuvent être détachées de la matrice du sous-sol et comptées pour évaluer l'effet du traitement sur le nombre de cellules. Pour chaque puits, retirer le milieu, ajouter le dépase à une concentration de 24 U/mL, et mettre la plaque à 37 oC pendant 1 h. Puis, de chaque puits, recueillir le milieu dans lequel les cellules sont suspendues et récolter les cellules détachées par centrifugation à 264 x g pendant 3 min. Resuspendre dans 0,2 ml de PBS. Pour compter les cellules, ajouter 0,2 ml de suspension cellulaire à 0,5 ml de PBS et 0,3 ml de solution bleue trypan de 0,4 %. Après 5 min à température ambiante, compter les cellules dans la chambre de La ville.</li>
	<li>Pour quantifier les résultats de l'essai de formation du tube, il est possible de compter le nombre de points de branche dans lesquels se rejoignent au moins trois tubes. À l'aide du logiciel d'image approprié, comptez pour chaque champ dans chaque micrographe le nombre de points de branche et calculez la moyenne - l'erreur standard (SE) pour chaque condition expérimentale. Utilisez un test tà deux queues pour évaluer la signification statistique.</li>
</ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+life%2C+disease+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in life, disease and medicine.</a> Nature. 438 (7070), 932-936 (2005).</li>
<li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+and+clinical+applications+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis.</a> Nature. 473 (7347), 298-307 (2011).</li>
<li>Ferrara, N., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+as+a+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis as a therapeutic target.</a> Nature. 438 (7070), 967-974 (2005).</li>
<li>Ravishankar, D., Rajora, A. K., Greco, F., Osborn, H. M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flavonoids+as+prospective+compounds+for+anti-cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Flavonoids as prospective compounds for anti-cancer therapy.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 45, 2821-2831 (2013).</li>
<li>Gentile, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ruta+graveolens+water+extract+inhibits+cell-cell+network+formation+in+human+umbilical+endothelial+cells+via+MEK-ERK1%2F2+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Ruta graveolens water extract inhibits cell-cell network formation in human umbilical endothelial cells via MEK-ERK1/2 pathway.</a> Experimental Cell Research. 364 (1), 50-58 (2018).</li>
<li>Butler, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+products+to+drugs%3A+natural+product-derived+compounds+in+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Reports%22%5BJournal%5D)">Natural products to drugs: natural product-derived compounds in clinical trials.</a> Natural Product Reports. 25, 475-516 (2008).</li>
<li>Sulaiman, R. S., Basavarajappa, H. D., Corson, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+product+inhibitors+of+ocular+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Natural product inhibitors of ocular angiogenesis.</a> Experimental Eye Research. 129, 161-171 (2014).</li>
<li>Risau, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis.</a> Nature. 386 (6626), 671-674 (1997).</li>
<li>Trung, N. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+for+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Science+%26+Development%22%5BJournal%5D)">In vitro models for angiogenesis.</a> Journal of Science & Development. 13 (4), 850-858 (2015).</li>
<li>Ucuzian, A. A., Greisler, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Models+of+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">In vitro Models of Angiogenesis.</a> World Journal of Surgery. 31, 654-663 (2007).</li>
<li>Simons, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Heart+Association+Council+on+Basic+Cardiovascular+Sciences+and+Council+on+Cardiovascular+Surgery+and+Anaesthesia.+State-of-the-Art+Methods+for+Evaluation+of+Angiogenesis+and+Tissue+Vascularisation%3A+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">American Heart Association Council on Basic Cardiovascular Sciences and Council on Cardiovascular Surgery and Anaesthesia. State-of-the-Art Methods for Evaluation of Angiogenesis and Tissue Vascularisation: A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Circulation Research. 116 (11), e99-e132 (2015).</li>
<li>Arnaoutova, I., Kleinman, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+angiogenesis%3A+endothelial+cell+tube+formation+on+gelled+basement+membrane+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">In vitro angiogenesis: endothelial cell tube formation on gelled basement membrane extract.</a> Nature Protocols. 5 (4), 628-635 (2010).</li>
<li>DeCicco-Skinner, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+tube+formation+assay+for+the+in+vitro+study+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51312(2014).</li>
</ol>

Les auteurs n'ont rien à révéler.

Les composés naturels sont caractérisés par une grande diversité chimique et spécificité biochimique et représentent une source de molécules potentiellement thérapeutiques. Ici, nous montrons comment obtenir l'extrait d'eau de la plante R. graveolens et proposons l'essai de formation de tube comme méthode facile à exécuter, fiable, et quantitative utile pour étudier les effets de RGWE sur l'angiogenèse. Il est important de faire bouillir les feuilles de R. graveolens pendant 1 h pour être sûr d'obtenir ...

L'angiogenèse est un processus physiologique qui conduit à la formation de nouveaux vaisseaux sanguins à partir de ceux préexistants et se produit pendant l'embryogenèse et la croissance des organes. À l'âge adulte, l'angiogenèse n'est activée que dans l'ovaire cycliste, dans le placenta pendant la grossesse, et pendant la cicatrisation et la réparation des plaies. L'angiogenèse dépend de la capacité des cellules endothéliales à proliférer, différencier et migrer pour former un réseau vasculaire intact1. Cependant, dans plusieurs désordres, tels que les maladies inflammatoires, métaboliques, et rhumatismales, les processus angiogéniques sont modifiés et l'angiogenèse devient excessive. En outre, les processus angiogéniques incontrôlés stimulent également la progression de tumeur et la métastasie1. Pour ces raisons, au cours de la dernière décennie, les études de recherche sont axées sur le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques visant à l'inhibition de l'angiogenèse excessive dans le cancer, oculaire, articulaire, ou les troubles de la peau2,3.
Le facteur de croissance endothéliale vasculaire (VEGF) représente lacible principale des thérapies antiangiogenic actuelles 4, et plusieurs anticorps monoclonaux anti-VEGF ont été développés et synthétisés pour empêcher l'angiogenèse excessive. Cependant, ces drogues synthétiques montrent des effets secondaires graves et ont un rapport coût-bénéfice défavorable5,6. Par conséquent, il est impératif de trouver de nouvelles stratégies thérapeutiques pour limiter l'angiogenèse excessive avec des effets secondaires minimes pour compléter et combiner avec les médicaments actuellement utilisés. Ces nouveaux médicaments peuvent être trouvés parmi les produits naturels qui sont caractérisés par une grande diversité chimique et la spécificité biochimique.
Dans cet article, nous proposons une méthode simple pour évaluer l'impact de la RGWE sur la capacité des HUVECs à former des tubules sur une matrice de sous-sol gélifiée in vitro5. En effet, RGWE est un mélange de métabolites secondaires tels que les flavonoïdes et les polyphénols parmi lesquels la rutine est la principale composante5. Beaucoup d'entre eux ont déjà été testés comme agents anti-inflammatoires et vasoprotecteurs7,8,9,10,11. En outre, nous avons récemment démontré que RGWE, mais pas rutin, est capable d'inhiber la capacité HUVEC de former des tubules sur une matrice de sous-sol gélifiéet et que ce phénomène est médié par la voie MEK-ERK, indiquant RGWE comme un outil thérapeutique potentiel capable de prévenir la formation excessive de nouveaux vaisseaux sanguins5.

<table><tbody><tr><td>Cellules HUVEC</td><td>Clontech</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>EBM-2 milieu basal</td><td>Clontech</td><td>cc3156</td><td></td></tr><tr><td>Kit de devis unique - suppléments et facteurs de croissance</td><td>clontech</td><td>cc4147</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>plaques à 96 puits</td><td>Thermo Scientific</td><td>167008</td><td></td></tr><tr><td>Tubes coniques de 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62,554,502</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sérologique jetable de 10 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861,254,001</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sérologique jetable de 5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>861,253,001</td><td></td></tr><tr><td>1,000 &mu ; Pipette L</td><td>Gilson</td><td>Pipetman classic</td><td></td></tr><tr><td>100 &mu ; L pipette</td><td>Gilson</td><td>Pipetman classic</td><td></td></tr><tr><td>20 &mu ; Pipette L</td><td>Gilson</td><td>Pipetman classic</td><td></td></tr><tr><td>p1000 pointes de pipette</td><td>Sarstedt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p20-200 pointes de pipette</td><td>Sarstedt</td><td>70,760,502</td><td></td></tr><tr><td>Chambre Burker</td><td>Fortuna</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypan blu stain</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>mill-ex 0.22 &mu ; m filters</td><td>Millipore</td><td>SLGS033SS</td><td></td></tr><tr><td>Lyophilizer</td><td>VirTis-SP Scientific</td> Incubateur Thermo <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2</td><td>AirCos</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pen-Strep</td><td>Gibco</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Antenne parabolique de 100 mm</td><td>Sarstedt</td><td>833,902</td><td></td></tr><tr><td>pcDNA3</td><td>Invitrogen</td><td>v79020</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine-2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668027</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td>Sérum réduit moyen</td></tr><tr><td>Rutin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R5143-50G</td><td></td></tr><tr><td>Axiovert 25 microscope</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AmScope MD500 appareil photo</td><td>AmScope</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Thermo Scientific</td><td>D4818</td><td></td></tr><tr><td>Chauffage de laboratoire</td><td>Falc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ParaFilm</td><td>American National Can</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

huvec tube-formation d'essai pour évaluer l'impact des produits naturels sur l'angiogenèse

HUVEC Tube-formation Assay to Evaluate the Impact of Natural Products on Angiogenesis

L'angiogenèse est un phénomène qui comprend différents processus, tels que la prolifération des cellules endothéliales, la différenciation et la migration, qui conduisent à la formation de nouveaux vaisseaux sanguins et impliquent plusieurs voies de transduction du signal. Ici, nous montrons que l'essai de formation de tube est une méthode in vitro simple pour évaluer l'impact des produits naturels sur l'angiogenèse et pour étudier les mécanismes moléculaires impliqués. En particulier, en présence de l'extrait d'eau de Ruta graveolens (RGWE), les cellules endothéliales ne sont plus en mesure de former un réseau cellulaire et que les effets RGWE sur la formation de tubes de cellules endothéliales de veine ombilicale humaine (HUVEC) sont abolis par le l'activation constitutive de MEK.

Pour évaluer l'influence de RGWE sur l'angiogenèse, nous avons effectué un essai de formation de tube sur une matrice gélifiée de sous-sol. Lorsqu'ils sont cultivés sur elle, huVECs forment des structures tubulaires qui proviennent de cellules qui semblent allongées et qui se connectent les uns les autres pour former un réseau cellulaire -cellule (Figure 2). Dans la figure 3, nous montrons que le nombre de branches dans les HUVEC...

Ici, nous évaluons les effets de l'extrait d'eau de Ruta graveolens sur la formation du réseau de navires en utilisant un essai de formation de tube sur une matrice de sous-sol gélifiée.

HuVEC Tube-formation D'essai pour évaluer l'impact des produits naturels sur l'angiogenèse

Angiogenesis is a phenomenon that includes different processes, such as endothelial cell proliferation, differentiation, and migration, that lead to the ...

Tube-formation Assay est un test in vitro pour étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents à plusieurs étapes qui conduisent à la formation de nouveaux vaisseaux sanguins. Cet essai permet d’identifier les composés et les cascades de signalisation associés à l’angiogenèse. Avec un seul test, nous sommes en mesure de montrer qu’un composé naturel comme RGWE réduit la capacité des cellules endothéliales à former une structure tube-like, n’affectent pas la viabilité cellulaire, et que cet effet dépend de l’activation de la voie MEK / ERK. Il est important d’effectuer le test avec le bon nombre de cellules. En fait, trop peu ou trop de cellules ne pouvaient pas permettre la bonne formation de tubes. Pour cette raison, il est conseillé d’effectuer un test préliminaire pour savoir le bon nombre de cellules. Luca Olga Pastorino, doctorant dans mon laboratoire, montrera les procédures. Tout d’abord, recueillir les feuilles de Ruta graveolens pendant les mois de printemps et d’été. Mettre 250 grammes de feuilles hachées dans un flacon conique, et ajouter un litre d’eau distillée, faire bouillir et filtrer, tel que décrit dans le manuscrit. Le lendemain, utilisez un lyophilisateur pour

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Developmental Biology

Biologie du développement

Ce protocole vidéo illustre l'isolement et la culture de cellules humaines endothéliales de veine ombilicale (HUVEC) de cordon ombilical humain. Une fois isolé ces cellules peuvent être utilisées pour des dosages angiogenèse in vitro comme le dosage optimisé fibrine billes de gel a également démontré par le laboratoire de M. Hughes.

Isolement de cellules humaines endotheliales de veine ombilicale (HUVEC)

Cette vidéo montre le protocole d'un essai angiogenèse in vitro que les stades récapitule plusieurs de l'angiogenèse. Time-lapse images de la germination, la formation de lumière, la ramification et anastomose - caractéristiques essentielles de l'angiogenèse - sont présentés.

Optimisé fibrine billes de gel d&#39;analyse pour l&#39;étude de l&#39;angiogenèse

Un essai de formation de tube est utilisé pour évaluer l'activité vasculaire des cellules tumorales.

Un test basé sur Matrigel Tube Formation d&#39;évaluer l&#39;activité Vasculogenic de cellules tumorales

Adulte normale vascularisé tissus de mammifères qui manque de l'angiogenèse physiologique et qui n'a pas été exposé à une intervention chirurgicale est utilisée pour étudier: (i) l'initiation et le développement de l'angiogenèse après administration intrapéritonéale d'agents de test, et (ii) la modification de l'angiogenèse après l'administration systémique de certains agents de test.

Assay Rat angiogenèse Mésentère

L'essai de formation de tubes est une méthode rapide pour la mesure quantifiable de l'angiogenèse in vitro. Les cellules endothéliales sont combinés avec des milieux conditionnés et étalées sur un extrait de la membrane basale. formation de métro se produit dans les heures et les tubules nouvellement formés facilement quantifiable.

Des cellules endothéliales Tube Formation test pour la<em&gt; In Vitro</em&gt; Etude de l&#39;angiogenèse

Ce manuscrit décrit un test de formation de tubes pour quantifier les effets d’un composé ou d’une condition donnée sur l’angiogenèse en utilisant la formation de tubes de cellules endothéliales dans un environnement contrôlé.

Stratégique des cellules endothéliales Tube Formation Assay: Comparaison matrice extracellulaire et le facteur de croissance réduit la matrice extracellulaire

miRNA therapeutics ont un potentiel important dans la régulation de la progression du cancer. Démontré ici sont des approches analytiques utilisées pour l’identification de l’activité d’un traitement de miRNA combinatoire pour stopper le cycle cellulaire et l’angiogénèse.

Analyse de miRNA combinatoire des traitements pour réguler le Cycle cellulaire et l’angiogenèse

Le système d'analyse sphéroïque de co-culture tridimensionnaux est conçu pour imiter l'angiogenèse physiologique. Les sphéroïdes de co-culture sont formés par deux précurseurs de cellules vasculaires humaines, Les ECFC et les MSC, et incorporés dans le gel de collagène. Le nouveau système est efficace pour évaluer les modulateurs angiogéniques, et fournit des informations plus pertinentes à l'étude in vivo.

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La méthode présentée ici permet d’évaluer l’effet des réactifs sur l’angiogenèse ou la perméabilité vasculaire in vivo sans coloration. La méthode utilise l’injection de dextran-FITC via la veine de la queue pour visualiser les néo-vaisseaux ou les fuites vasculaires.

Essai de bouchon de gel matriciel in vivo modifié pour les études d’angiogenèse

Le protocole actuel permet de récupérer des structures tubulaires formées dans l’essai classique d’angiogenèse-formation de tubes in vitro où les cellules, telles que les cellules trophoblastiques, s’organisent en structures capillaires sur une couche de matrice de membrane basale extracellulaire. Les structures récupérées sont utilisées pour l’isolement de l’ARN et des protéines pour diverses analyses biochimiques.

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Apprenez le test de formation de tubes sur matrice gelée pour évaluer l'angiogenèse avec des extraits de Ruta graveolens. Cette méthode permet d'étudier l'impact des composés naturels sur la formation des réseaux vasculaires.

HuVEC Tube-formation D'essai pour évaluer l'impact des produits naturels sur l'angiogenèse

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