Induction et notation de la maladie de graft-Versus-Host dans un modèle xénogéné de murine et quantification des cellules t humaines dans des tissus de souris utilisant PCR numérique

Ce protocole décrit comment induire la maladie xénogreffe-contre-hôte, ou xenoGVHD, et comment aveugler et normaliser la notation clinique pour assurer des résultats cohérents. Le modèle xenoGVHD fournit une méthode in vivo pour tester les thérapies immunosuppressrices contre les cellules T humaines plutôt que murines, améliorant la traduction de ces études à la clinique. Amara Seng, étudiante diplômée de mon laboratoire, démontrera la procédure.

Un jour avant l’injection, placez des souris scid gamma diabétiques non obèses âgées de huit à 12 semaines, ou NSG, souris dans une cage à tarte stérilisée, et irradiez les souris dans une source de césium-137 avec une dose totale de 150 centigrays, avec une rotation lente pour assurer une irradiation même. Ensuite, placez les souris dans des cages propres dans une armoire de biosécurité stérile pendant la nuit. Le lendemain matin, recueillir suffisamment de sang humain sain pour isoler 1,1 fois 10 aux sept cellules mononucléaires périphériques du sang, ou PBMCs, par souris, et diluer le sang héparinisé dans un volume égal de 2% sérum bovin fœtal, ou FBS, dans PBS.