Un modèle de lapin de la maladie sèche aqueuse-déficiente d'oeil induite par concanavalin une injection dans les glandes lacrimal : application aux études d'efficacité de drogue

Notre méthode fournit le modèle animal fiable manquant de la maladie sèche d’oeil qui peut être aiguë ou chronique grâce à notre méthode d’injecter toutes les glandes lacrimales et les injections répétées. Cette technique fournit de manière fiable Concanavalin A à la glande lacrimale inférieure en utilisant des conseils ultrasoniques pour les glandes de tailles largement variables et jusqu’à la glande lacrymale supérieure faisant de cette méthode une approche complète. Ce modèle fournit un moyen simple, optimisé et nonchirurgical pour induire la maladie aqueuse-déficiente d’oeil sec.

Il est bien adapté pour étudier l’efficacité des médicaments et la pathophysiologie de la maladie. L’identification de l’incisure postérieure et l’utilisation de la localisation des ultrasons peuvent être difficiles au début. Enlever toute la fourrure est essentiel pour faciliter la localisation des ultrasons pour ces deux étapes.

Wei Huang, un étudiant diplômé de mon laboratoire, démontrera la procédure. Après avoir confirmé une légère sédation en observant une position de tête détendue avec les lobes de l’oreille n’est plus entièrement debout, utilisez une micropipette pour appliquer 25 microlitres de lidocaïne sans agent de conservation sur le premier œil et placer un spéculum flexible de couvercle métallique entre les paupières. À l’aide de 0,3 forceps, saisir la membrane nictante à son sommet et l’étendre sur la cornée.

À l’aide d’une aiguille tranchante de calibre 26, injecter la lidocaïne 1% avec 1:100 000e épinéphrine subconjuctivally dans la base de la membrane nictante. Un bleb modéré devrait se former au-dessus de la membrane. Retirez ensuite le spéculum et faites une injection identique dans la membrane nictante gauche.

Après environ cinq minutes, remettre le spéculum du couvercle dans l’œil et utiliser 0,3 forceps pour rétracter la membrane nictante à son sommet. À l’aide de ciseaux Westcott, couper la membrane nictante à sa base et enlever le spéculum. Ensuite, placez l’onguent antibiotique topique sur l’œil.

Pour la portion palpebrale de l’injection supérieure de glande lacrymale, après confirmation de la sédation, cisaillez la fourrure dans la zone pré-orbitale et du cuir chevelu et utilisez la crème depilatory pour enlever complètement n’importe quelle fourrure résiduelle. Après deux minutes, retirer la crème et appliquer 25 microlitres de lidocaïne sans agent de conservation à l’œil approprié. Evert la paupière supérieure et appliquer une pression médiale douce sur la jante orbitale postérieure jusqu’à ce que la protubérance marquant la partie palpebrale de la glande est vu.

À l’aide de forceps à dents fines et d’une seringue à tuberculine munie d’une aiguille de calibre 27, pénétrer directement dans la glande par une approche transconjonctivale avançant l’aiguille de deux millimètres dans le tissu et injecter 100 microlitres d’une solution de 500 microgrammes de Concanavalin A ou Con A.Immédiatement après l’injection, appliquer une pression médiale sur le globe pour faire dépasser la glande lacrimale orbitale de l’incisure postérieure. À l’aide de forceps incurvés fermés, en retrait de la zone jusqu’à ce que l’ouverture osseuse dans le crâne se fait sentir et appliquer une pression plus modeste avec des forceps pour laisser une indentation dans la peau pour servir de point de repère pour le placement de l’aiguille. Insérez une seringue à tuberculine munie d’une aiguille de calibre 27 perpendiculaire à la peau au-dessus de la marque d’indentation d’environ un quart de pouce dans l’incision et redirigez l’aiguille postérieurement et extérieurement vers le canthus latéral visant le point médian entre le site d’injection et la jante orbitale osseuse.

Une fois que le moyeu de l’aiguille est atteint, injectez lentement 0,2 millilitres d’une solution de 1000 microgrammes d’injection con A.For ILG, visualisez l’animal du côté pour localiser la proéminence de l’ILG le long de la partie antérieure inférieure de l’orbite. Utilisez un stylo de marquage chirurgical pour tracer une ligne verticale sur la peau où la partie superficielle de la glande ILG passe de son lieu de repos superficiel sur l’os zygomatique à son emplacement plus médial dans l’orbite. Balayez une sonde à ultrasons tenue verticalement à travers la ligne sur la peau pour identifier l’extrémité de l’os zygomatique.

La transition ilg se produit lorsque l’image de la glande change d’une ligne hyperéchoïque circonscrite à une ligne sans bordure médiale reconnaissable. La position relative de la pièce à main à la ligne tracée sur la peau lorsque ce changement est observé sera le site d’injection. Pour placer Con A dans une glande à un point juste médial à l’os de l’arc zygomatique, définir la profondeur désirée de l’injection que la profondeur du signal hyperéchoïque os zygomatique plus un millimètre moins la longueur connue de l’aiguille.

Insérez l’aiguille d’environ 12 millimètres dans la glande au point d’injection avant de vous retirer lentement jusqu’à ce que la longueur de l’aiguille exposée à l’extérieur du corps soit égale à la différence calculée. Injectez ensuite 0,2 millilitres d’un microgramme de solution Con A de 1000 et confirmez le succès de l’injection par ultrasons. L’ILG doit présenter un espace hyperéchoïque caractéristique.

Les injections de Con A induisent une réponse inflammatoire forte dans la glande lacrymale caractérisée par un infiltration lymphocytique dense qui s’accompagne d’une production diminuée de déchirure. Les niveaux de lactoferrine de déchirure sont supprimés ayant pour résultat un épithélium cornéen et conjonctival compromis et une coloration accrue de bengale de rose. L’injection des trois tissus orbitaux de LG produit un état uniforme et uniforme de maladie oculaire sèche.

Un seul ensemble d’injections de Con A produit la maladie sèche d’oeil durant environ une semaine avec tous les paramètres cliniques normalisant par jour 10. Les injections séquentielles de Con A à environ une semaine d’intervalle prolongent la durée de la maladie oculaire sèche en conséquence. Après environ cinq séries d’injections, l’état de maladie oculaire sèche devient souvent permanent sans avoir besoin d’injections supplémentaires.

Il est très important de localiser de façon optimale les structures des glandes lacrimales. La familiarité avec l’anatomie crânienne et l’attention aux détails fins comprenant l’enlèvement de la fourrure avec la compétence utilisant l’ultrason améliorent tous des résultats. Comme cette technique simple nécessite l’utilisation de pointes, l’enquête devrait prendre les précautions appropriées pour prévenir les blessures par piqûre d’aiguille.